PCR(예비).

소개

polymerase chain reaction을 이용하여 DNA에서 원하는 부분만을 증폭하고 그 원리를 이해한다.

목차

◆ 실험 목적
◆ 실험 방법
◆ 실험 원리

본문내용

◆ 실험 목적

polymerase chain reaction을 이용하여 DNA에서 원하는 부분만을 증폭하고 그 원리를 이해한다.





◆ 실험 방법

1) 10 x Taq polymerase PCR buffer와 dNTP(10mM), Primer(10pmol/㎕)를 미리 얼음 위에서 녹인다.
2) 증폭하고자 하는 target 유전자를 포함한 DNA를 준비한다.
3) 멸균된 PCR tube에 준비된 재료들을 넣고 섞어 반응액을 만든다.
4) 준비된 반응액에 Taq polymerase를 첨가한다.
5) Thermo cycler의 program을 setting하고, PCR 반응을 시작한다.
6) PCR 반응이 완료되면 전기영동을 실시하여 PCR product band를 확인한다.
7) PCR product purification kit 또는 agarose gel elution kit를 이용하여 정제한다.

◆ 실험 원리


◇ PCR

The polymerase chain reaction(PCR).
Polymerase chain reaction(PCR) technique은 1980년대 중반 K. Mullis에 의해서 고안된 기술이다. 이 PCR techinique은 유전자를 연구, 분석하는 분자유전학에 혁신을 일으켰다. 유전자를 분석하고 연구하는데 있어서 가장 큰 문제점은 복잡한 전체 genome중에 연구하고자 하는 유전자가 희귀하다는 것인데, PCR은 특정 DNA Sequence의 copy수를 기하급수적으로 증폭시킬 수 있다.
PCR은 DNA polymerase에 의한 DNA 복제의 특징을 이용한다. 일반적으로 증폭반응은 Thermus aquaticus로부터 정제된 DNA polymerase I에 의해 수행된다. 이 생물체는 온천에서 서식하고 있고, Taq polymerase를 포함하는 많은 효소들이 thermostable하다. 이것은 그들이 열처리에 의한 변성에 대해 저항성이 있다는 것을 의미한다. Taq polymerase의 thermostability는 PCR methodology에서 필수적인 요건이다. PCR증폭반응을 시작하기 위해, 그 효소를 primer가 결합된 DNA에 첨가하고 새로운 상보적인 가닥을 합성시키기 위해 반응시킨다. 그리고 나서 새롭게 합성된 가닥을 주형으로부터 분리시키기 위해 그 혼합액을 94℃로 가열시킨다

참고자료

· - T.A. Brown ,Gene cloning, p.179-193
· - Molecular Biology by Robert.F Weaver ISBN 0-697-14750-9
· - 박석기 외 5명 / 최신미생물학 실험 / 신광문화사 / P40~41
· - 김종협 외 2명 / 미생물학 실험서 / 대광문화사 / P25~26
· - 김명원 / 생명과학 / 라이프 사이언스 / P209
· - 강헌 / 미생물학 실험(환경, 생태, 해양) / 동화기술 / P266~267
· - 강종백 외 2명 / 유전자 크리닝 입문 / 월드 사이언스 / P236~248