계대 배양

소개

계대 배양이 무엇인지 자세하게 설명하였고요,
또, 계대배양을 실험해서 얻은 데이터값과 그래프를 같이 올립니다.

목차

실험원리
실험과정
실험결과 1)
실험결과 2)
토의

본문내용

실험원리: 계대배양(subculture)은 배양 중인 동물세포를 유지하고 실험 조건에 알맞은 상태로 배양하기 위한 실험과정입니다. 동물세포가 dish의 90~100%정도를 채우게 되면 동물세포를 새로운 dish에 옮겨 배양합니다. 계대배양은 동물세포를 유지하는 과정이므로 필수적이고 중요한 과정이지만, 이 과정에서 오염이나 실험조작의 실수 등으로 동물세포가 사멸할 가능성이 높습니다. 계대배양 시 부착하여 자라는 동물세포의 경우에는 dish에서 세포를 떼어내는 과정이 필요하고 부유하는 세포의 경우에는 이 과정이 필요하지 않습니다.


실험과정 :
1. 접종 후 2일 배양하여 동물세포가 충분히 자란 T-plask의 배지를 suction으로 완전히 제거합니다.
계대배양의 시기는 초기 접종량과 동물세포의 종류에 따라 달라집니다. 접종량을 조절해서 2~3일 간격으로 계대배양을 해주는 것이 좋습니다. 동물세포주에 따라 증식하는 속도가 다르기 때문에 자신이 배양하는 동물세포의 증식속도에 맞춰서 접종량과 계대배양 시기를 정해주어야 합니다.
2. 배지가 제거된 T-plask에 PBS 2ml을 조심스럽게 넣어 동물세포에 묻어있는 배지를 세척해줍니다 그리고 바로 suction으로 PBS를 제거합니다.
3. T-plask에 trypsin-EDTA 0.3ml을 micropipette을 이용하여 골고루 뿌려준 후 CO2 배양기에 넣고 1~2분간 방치합니다.
4. T-plask를 CO2 배양기에서 꺼낸 후 배지 1.7ml을 넣어 trypsin-EDTA를 불활성화 시켜줍니다. Dish를 조심스럽게 흔들어 배지를 골고루 섞어 준 다음 pipette으로 모아서 15ml conical tube에 옮겨 담습니다. 이 때 dish에 동물세포가 남아있지 않도록 주의합니다.

참고자료

· 없음