서강대학교 현대생물학실험3 세포의 계대배양, 진핵세포의 DNA Damage & Repair 및 Marker 확인

소개글

"서강대학교 현대생물학실험3 세포의 계대배양, 진핵세포의 DNA Damage & Repair 및 Marker 확인"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Data & Results
5. Discussion
6. References

본문내용

이번 실험에서는 진핵세포인 HaCaT cell을 세포의 계대배양을 통해 Incubation하고, 세포의 개수를 계산해보았으며, 이 세포를 Doxorubicin Damaging agent를 처리해, Western blot과 ICC(Immunocytochemistry)방법을 사용해 Doxorubicin의 유무에 따른 Cell의 경향을 알아보았다. 성인 피부에서의 불멸세포인 HaCaT cell은 In vitro에서 자발적으로 변형되는 Cell이며, 바닥에서 자라는 Adherent growing Cell이다. Doxorubicin은 밝은 형광을 띠며, 항암제로 쓰이며, DNA damaging agent이다. Serine139의 Histone H2AX의 Phosphorylation을 통한 Cell의 조작을 진행한다. ɤ-H2AX는 H2AX의 Phosphorylated form이며, Repair protein을 모으고, DNA damage response foci의 Integrity를 유지한다. 계대배양을 통한 Cell의 밀도는 5.015*104 Cells/mL로 계산되었으며, Western blot의 결과로는 Doxorubicin처리한 부분에서 ɤ-H2AX이 처리하지 않은 부분보다 선명히 나왔으며, ICC의 결과로 Control에서는 DAPI처리한 부분이 푸른색을 띠었고, FITC의 경우, 아무런 색을 띠지 않았다. Doxorubicin을 처리한 Cell을 관찰한 결과, DAPI와 FITC를 처리한 Cell에서 푸른색과 녹색으로 빛나는 것이 관찰되었으며, Cell의 위치 또한 일치했다. 이를 통해 DNA의 손상과 수리 과정을 알 수 있었다. 실험에 사용된 Gamma H2AX이외의 DNA Damaging agent marker와 Doxorubicin이외에 사용될 수 있는 물질을 알아보았고, Doxorubicin과 Tubulin이 사용된 이유를 통해 작용기전을 알아보았다. Control sample에서도 Gamma H2AX가 발현된 이유를 알아보아 실험을 마무리하였다.

참고 자료

Boukamp, Petra; Petrussevska, Rule T.; Breitkreutz, Dirk; Hornung, Jiirgen; Markham, Alex; Fusenig, Norbert E. (1 March 1988). "Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line". The Journal of Cell Biology. 106 (3): 761–771. doi:10.1083/jcb.106.3.761. PMC 2115116. PMID 2450098.
Ölschläger, Veronika; Schrader, Andreas; Hockertz, Stefan (13 December 2011). "Comparison of Primary Human Fibroblasts and Keratinocytes with Immortalized Cell Lines Regarding their Sensitivity to Sodium Dodecyl Sulfate in a Neutral Red Uptake Cytotoxicity Assay". Arzneimittelforschung. 59 (3): 146–152. doi:10.1055/s-0031-1296378. PMID 19402346.
Pang B, Qiao X, Janssen L, Velds A, Groothuis T, Kerkhoven R, Nieuwland M, Ovaa H, Rottenberg S, van Tellingen O, Janssen J, Huijgens P, Zwart W, Neefjes J (2013). "Drug-induced histone eviction from open chromatin contributes to the chemotherapeutic effects of doxorubicin". Nature Communications. 4 (5): 1908. Bibcode:2013NatCo...4.1908P. doi:10.1038/ncomms2921. PMC 3674280. PMID 23715267.
Pang B, Qiao X, Janssen L, Velds A, Groothuis T, Kerkhoven R, Nieuwland M, Ovaa H, Rottenberg S, van Tellingen O, Janssen J, Huijgens P, Zwart W, Neefjes J (2013). "Drug-induced histone eviction from open chromatin contributes to the chemotherapeutic effects of doxorubicin". Nature Communications. 4 (5): 1908. Bibcode:2013NatCo...4.1908P. doi:10.1038/ncomms2921. PMC 3674280. PMID 23715267.
Wikipedia - Fvasconcellos 23:30, 4 May 2007 (UTC) - Own work
Jakob B, Splinter J, Conrad S, Voss KO, Zink D, Durante M, Löbrich M, Taucher-Scholz G (August 2011). "DNA double-strand breaks in heterochromatin elicit fast repair protein recruitment, histone H2AX phosphorylation and relocation to euchromatin". Nucleic Acids Research. 39 (15): 6489–99. doi:10.1093/nar/gkr230. PMC 3159438. PMID 21511815.
Yang, Ping-Chang; Mahmood, Tahrin (2012). "Western blot: Technique, theory, and trouble shooting". North American Journal of Medical Sciences. 4 (9): 429. doi:10.4103/1947-2714.100998. ISSN 1947-2714. PMC 3456489.
Herman, G.E. and Modrich, P. (1982) Escherichia coli dam
methylase. Physical and catalytic properties of the
homogeneous enzyme. J Biol Chem 257, 2605-2612
Sancar, A. and Rupp, W.D. (1983) A novel repair enzyme:
UVRABC excision nuclease of Escherichia coli cuts a DNA
strand on both sides of the damaged region. Cell 33, 249-260
Amazinglarry (talk) at en.wikipedia
James D. Watson (2014), Molecular Biology of the Gene, PEARSON, 7th ed, pp. 320-337
Hamilton ML, Guo Z, Fuller CD, Van Remmen H, Ward WF, Austad SN, Troyer DA, Thompson I, Richardson A (2001). "A reliable assessment of 8-oxo-2-deoxyguanosine levels in nuclear and mitochondrial DNA using the sodium iodide method to isolate DNA". Nucleic Acids Res. 29 (10): 2117–26.
DNA DAMAGE REPAIR MARKERS, proteintech® Inc
Weiss RB (December 1992). "The anthracyclines: will we ever find a better doxorubicin?". Seminars in Oncology. 19 (6): 670–86. PMID 1462166.
Tacar, O; Sriamornsak, P; Dass, CR (February 2013). "Doxorubicin: an update on anticancer molecular action, toxicity and novel drug delivery systems". The Journal of Pharmacy and Pharmacology. 65 (2): 157–70. doi:10.1111/j.2042-7158.2012.01567.x. PMID 23278683. S2CID 34737360.
Rossi, S, ed. (2013). Australian Medicines Handbook (2013 ed.). Adelaide: The Australian Medicines Handbook Unit Trust. ISBN 978-0-9805790-9-3.
Wang D, Lippard SJ (April 2005). "Cellular processing of platinum anticancer drugs". Nature Reviews. Drug Discovery. 4 (4): 307–20. doi:10.1038/nrd1691. PMID 15789122. S2CID 31357727.
Johnstone TC, Suntharalingam K, Lippard SJ (March 2016). "The Next Generation of Platinum Drugs: Targeted Pt(II) Agents, Nanoparticle Delivery, and Pt(IV) Prodrugs". Chemical Reviews. 116 (5): 3436–86. doi:10.1021/acs.chemrev.5b00597. PMC 4792284. PMID 26865551.
"Cisplatin". The American Society of Health-System Pharmacists. Archived from the original on 21 December 2016. Retrieved 8 December 2016.