[A+] 2023 서강대 일반생물학실험1 4차 (Plasmid DNA의 제한효소 절단 및 전기영동)

소개

"[A+] 2023 서강대 일반생물학실험1 4차 (Plasmid DNA의 제한효소 절단 및 전기영동)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials and Methods
4. Results
5. Discussion

본문내용

이번 실험에서는 BamHⅠ 제한효소를 사용하여 pUC4K vector를 절단하고 전기영동을 통해 DNA 절편을 분리한다. 제한효소는 vector의 특정 염기서열을 인식하여 절단하며 절단된 DNA 절편은 음전하를 띠기 때문에 양전하 쪽으로 이동하는 속도의 차이를 이용하여 DNA 절편을 분리할 수 있다. 전기영동을 실시할 때는 DNA를 확인할 수 있도록 형광을 나타내는 redsafe와 loading dye를 제한효소, vector와 함께 넣어준다. Redsafe는 UV light를 쬐면 537nm 파장의 빛을 방출하여 형광을 나타낸다. 효소가 반응할 동안 agarose와 1X TAE buffer를 섞어 1% agarose gel을 만든다. Incubation이 끝나면 만들어둔 agarose gel에 시료를 loading한다. DNA 분자의 크기를 알아보기 위해 DNA ladder와 uncut vector도 함께 loading한다. 전기영동 결과를 관찰하여 DNA ladder와 비교해보면 자르지 않은 uncut vector는 약 4000bp, 절단된 vector의 작은 DNA 절편은 약 1000bp에 해당하고 큰 DNA 절편의 경우 대략 2000과 3000bp 사이의 크기를 가진다는 것을 확인할 수 있었다. 제한효소를 사용하여 절단한 DNA의 이론적인 크기와 유사한 실험결과가 관찰되었다. 하지만 전기영동 결과를 비교해보면 여러 개의 band가 만들어진 것을 관찰할 수 있다.

참고자료

· Neil. A Campbell (2021), Biology A Global Approach, 12th, Pearson, pp. 453-454
· W Arber, S Linn (1969), DNA modification and restriction, Annual Review of Biochemistry, 38: 467-500
· David L. Smisek, David A. Hoagland (1989), Agarose gel electrophoresis of high molecular weight, synthetic polyelectrolytes, Macromolecules, 22: 2270-2277