생화학 실험 레포트 - RT-qPCR을 통한 mRNA 발현 확인 (Analysis of mRNA by real-time PCR)

소개

생화학실험 당시 작성했던 레포트 입니다~
해당 강의 A+ 받았어여

목차

Ⅰ. Introduction
1. mRNA와 cDNA
2. PCR(Polymerase Chain Reaction)
3. WUS, STM, ACT2
4. SYBR Green

Ⅱ. Experimental materials and Methods

Ⅲ. Results

Ⅳ. Discussion

Ⅴ. References

본문내용

Ⅰ. Introduction
- Experimental purpose
PCR의 원리를 알고, 실제로 지난 시간 extraction한 RNA를 이용해 cDNA template를 제조하여 RT-PCR 실험을 진행한다.

- Experimental Theory
1. mRNA와 cDNA
- mRNA는 단백질을 암호화하기 때문에 다양한 RNA 중 가장 많은 연구의 대상이다. 하지만 세포 내의 mRNA의 양은 상대적으로 제한적이다. Total RNA 중 다른 tRNA와 rRNA와 비교했을 때 가장 양이 적으며, 오히려 전체 질량으로 보았을 때 가장 많은 RNA는 rRNA이다. 따라서 mRNA는 세포에 따라 1~5%정도 밖에 차지하지 않는 것으로 추정된다. 따라서 mRNA를 이용하여 연구하기 위해 mRNA의 정제가 먼저 실시되어야 하고, 대표적으로 cDNA를 제조할 때 정제가 필요하다.

- 일반적으로 RNA보다는 DNA가 더 안정적이고 조작이 용이하기 때문에 PCR을 하기 위해서는 mRNA로부터 cDNA로 전환하는 과정이 필요한데, mRNA를 DNA로 전환시키는 과정은 역전사효소(Reverse transcriptase)를 필요로 한다. mRNA를 역전사시켜 DNA를 만든 후, 만들어진 단일가닥 DNA를 primer를 이용해 이중가닥 DNA로 전환시킨다. 이때 primer는 주로 oligo-dT를 사용하게 되는데, oligo-dT는 mRNA의 3‘부위에 polyadenylation 과정을 통해 생성

참고자료

· 곽한식 외. 생화학. (6판). 서울: 라이프사이언스
· 부성희 외. 생화학실험. 서울: 청문각
· Molecular Biology of the Gene. Watson저. (7판). Cold Spring Haber Laboratory
· Housekeeping gene. 생화학백과. 생화학분자생물학회. 2019년 11월 21일 검색.
· WUS, STM, ACT2. 2019년 11월 21일 검색.
· https://www.uniprot.org/uniprot/?query=shoot+meristemless&sort=score
· qPCR 분석 방법. ThermoFisher SCIENTIFIC. 2019년 11월 21일 검색. https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/real-time-pcr-basics/absolute-vs-relative-quantification-real-time-pcr.html