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RT-qPCR을 통한 mRNA 발현 확인 실험2025.12.131. RT-qPCR (Real-time quantitative PCR) RT-qPCR은 핵산을 증폭시키면서 동시에 그 농도를 실시간으로 측정하는 PCR 기술입니다. 형광 리포터를 이용하여 매 사이클마다 PCR 산물의 양을 측정하며, exponential phase에서 정확한 DNA 정량이 가능합니다. Ct(Cycle threshold)는 형광신호가 threshold를 넘기 위해 필요한 사이클 수로, 초기 핵산의 양이 적으면 높은 Ct값이 나옵니다. 상대 정량(Relative quantification) 방법으로 실험군과 대조군의 유...2025.12.13
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식품 생화학 실험 real time qPCR과정과 결과값2025.01.141. GAPDH GAPDH 유전자는 glyceraldehyde-3-phosphate 탈수소효소 단백질 계열의 구성원을 암호화한다. 암호화된 단백질은 기계적으로 구별되는 능력을 기반으로 월광 단백질로 확인되었다. 이 유전자의 산물은 무기 인산염과 nicotinamide adenine dinucleotide (NAD)의 존재 하에서 glyceraldehyde- 3-phosphate의 가역적 산화적 인산화인 탄수화물 대사에서 중요한 에너지 생성 단계를 촉매한다. 암호화된 단백질은 핵에서 uracil DNA glycosylase 활성을 갖...2025.01.14
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[생물공정실험] 3주차 Gene expression analysis by RT-PCR 예비보고서2025.04.261. cDNA 정의 및 합성 방법 cDNA(complementary DNA)는 RNA를 주형으로 역전사효소와 DNA 중합효소에 의해 합성된 DNA입니다. 역전사효소를 이용한 cDNA 합성에서는 RNA와 annealing 위치에 따라 3종류의 primer를 사용할 수 있습니다. (1) 역전사 효소 (reverse transcriptase; RTase), (2) RT반응에 사용하는 primer (oligo dT primer, random primer, gene-specific primer). 2. Downstream applicatio...2025.04.26
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PCR을 통한 gene structure 분석2025.05.011. EtOH Precipitation DNA는 전하를 띄는 인산골격을 가지고 있어서 극성이다. 물도 극성이므로 물에 잘 녹는다. DNA를 뭉치게 하려면 물과 DNA간 결합을 약화시켜야 한다. Ethanol은 물보다 훨씬 덜 극성이다. 따라서 ethanol을 첨가하면 DNA의 인산기와 다른 양이온간의 결합이 강해지면서 DNA 침전을 형성한다. 이 과정을 위해선 적절한 양의 양이온이 필요하다. 너무 많으면 DNA와 같이 침전되고 너무 적으면 침전되지 못한 DNA가 생긴다. 이 실험에선 3M sodium acetate를 final 0....2025.05.01
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RT-PCR을 이용한 cDNA 합성 및 유전자 발현 분석2025.12.191. RT-PCR (역전사 중합효소연쇄반응) RT-PCR은 RNA 서열을 cDNA로 역전사하여 증폭하는 분자생물학 기법입니다. One-step RT-PCR은 한 튜브에서 역전사와 PCR이 동시에 진행되어 오염 가능성이 낮지만 단일 프라이머만 사용 가능합니다. Two-step RT-PCR은 RNA로부터 cDNA 합성 후 튜브를 옮겨 진행하므로 오염 가능성이 있지만, 여러 프라이머를 사용하여 다양한 cDNA 발현을 확인할 수 있습니다. 2. cDNA 합성 (역전사) cDNA 합성은 RNA 템플릿으로부터 상보적 DNA를 만드는 과정입니다...2025.12.19
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추위 노출에 따른 백색지방의 베이지화와 갈색지방 활성화 연구2025.11.181. qPCR을 이용한 유전자 발현 측정 qPCR(실시간 정량적 중합효소연쇄반응)은 RNA를 역전사효소로 cDNA로 변환한 후 실시간으로 증폭하는 기법입니다. 본 실험에서는 추위 노출 마우스와 일반 환경 마우스의 지방조직에서 Ucp1, Dio2, Tbp 유전자의 mRNA 발현량을 비교 측정했습니다. RT-PCR 단계에서 total RNA와 oligo dT, dNTP를 반응시킨 후 역전사효소, DTT와 혼합하여 cDNA를 생성하고, 이를 qPCR로 40 사이클 증폭하여 유전자 발현 수준을 정량화했습니다. 2. 백색지방의 베이지화와 갈...2025.11.18
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RNA 분리 및 cDNA 합성, 실시간 PCR을 이용한 개화시기 측정2025.11.121. RNA 분리 (RNA Isolation) 생명과학 실험에서 세포나 조직으로부터 RNA를 추출하는 기본적인 분자생물학 기법입니다. 이 과정은 세포를 용해시키고 단백질과 DNA를 제거하여 순수한 RNA를 얻는 것을 목표로 합니다. 추출된 RNA는 이후 역전사 반응이나 유전자 발현 분석 등 다양한 실험의 기초 재료로 사용됩니다. 2. cDNA 합성 (cDNA Construction) mRNA를 주형으로 하여 역전사효소(reverse transcriptase)를 이용해 상보적 DNA(complementary DNA)를 합성하는 과정입...2025.11.12
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RT-reaction & qPCR을 이용한 p21 단백질 발현 분석2025.11.171. 역전사 반응(RT-reaction)과 cDNA 합성 역전사효소는 RNA를 주형으로 하여 DNA를 합성하는 효소이며, 결과물인 cDNA는 mRNA의 상보적 DNA이다. cDNA는 전사 가능한 엑손 영역만 포함하고 인트론이 제거되어 있어 genomic DNA와 다르다. RT-reaction에서는 Random Hexamer, dNTPs, RNase inhibitor, Reverse transcriptase 등을 사용하여 mRNA로부터 cDNA를 합성한다. 이 기술은 cDNA 라이브러리 제작과 RT-PCR 등 분자생물학의 핵심 기술에...2025.11.17
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Real-time PCR을 이용한 유전자 발현 분석2025.01.231. 전사(Transcription) 수준에서의 유전자 발현 분석 기법들 유전자 발현 분석 기법에는 Single gene analysis와 Whole genome analysis가 있다. Single gene analysis는 개별 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 Northern Blotting과 Real-time PCR이 있다. Whole genome analysis는 세포 내 전체 유전자의 발현량을 확인하는 실험 기법으로 RNA sequencing이 있다. 2. cDNA 합성에 사용될 수 있는 primer의 종류 cDN...2025.01.23
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동물 유방암 세포주의 RNA 추출 및 PCR 분석2025.12.201. RNA 추출 기술 TRIzol™ Reagent를 이용한 RNA 추출 방법으로, 페놀과 구아니디늄 이소티오시아네이트 기반 시약을 사용하여 세포를 용해하고 RNA, DNA, 단백질을 분리한다. Chloroform 처리로 상층에 RNA를, 하층에 DNA 및 단백질을 분리하고, isopropanol 침전으로 RNA를 고농도로 분리한 후 ethanol 세척으로 순도를 높인다. 이 과정에서 RNase 억제제 역할을 하는 TRIzol의 phenol이 단백질과 지질을 분해하며, 산성 용액이 DNA는 변성시키지만 RNA는 파괴하지 않는다. 2...2025.12.20
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