• AI글쓰기 2.1 업데이트
GOLD
GOLD 등급의 판매자 자료
리포트 / 자연과학

재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli

9.5/10 점 받은 생화학실험 보고서입니다. 깎인 이유와 교수님 피드백이 빨간 글씨로 들어있습니다.
10 페이지
한컴오피스
최초등록일 2024.03.28 최종저작일 2023.12
생화학실험 형질전환 단백질 발현 Recombinant proteins
10P 미리보기
재결합 단백질의 발현/ Expression of recombinant proteins in E. coli
상세정보 자료후기 0 자주묻는질문
  • 이 자료를 선택해야 하는 이유
    이 내용은 AI를 통해 자동 생성된 정보로, 참고용으로만 활용해 주세요.
    • 논리성
    • 전문성
    • 명확성
    • 유사도 지수
      참고용 안전
    • 🔬 분자생물학 실험의 상세한 프로토콜 제공
    • 🧬 재조합 단백질 발현의 심층적인 이론적 배경 설명
    • 🔍 단백질 정량 방법의 체계적인 비교 분석
    본 문서(hwp)가 작성된 한글 프로그램 버전보다 낮은 한글 프로그램에서 열람할 경우 문서가 올바르게 표시되지 않을 수 있습니다. 이 경우에는 최신패치가 되어 있는 2010 이상 버전이나 한글뷰어에서 확인해 주시기 바랍니다.

    미리보기

    소개

    9.5/10 점 받은 생화학실험 보고서입니다.
    깎인 이유와 교수님 피드백이 빨간 글씨로 들어있습니다.

    목차

    1. Summary
    2. Introduction
    3. Material and Methods
    4. Result and Discussion
    5. Reference

    본문내용

    1) GST-tagged Proteins

    glutathione S-transferase (GST), histidine (HIS), 기타 친화성 태그를 이용하여 단백질을 정제하게 되면 기존에 잘 알려진 생화학적 특성을 가진 단백질과 알려지지 않은 생화학적 특성을 가진 단백질의 정제를 가능하게 도와준다. 따라서 이런 방법은 잘 알려지지 않은 단백질의 생물학적 기능을 연구하기 위한 도구로 사용되고 있다. GST는 211개의 아미노산 단백질로 이루어졌으며 분자량은 26 kDa이다. DNA 서열 재조합 단백질의 생산을 위한 발현 벡터를 정제하기 위해 사용된다. GST 단백질은 번역 시에 안정적이고 가용성이 높은 단백질로 빠르게 접히기 때문에, GST 태그를 포함하면 태그가 없을 때보다 더 잘 발현하고 용해도를 촉진하는 경우가 많다. 또한, GST 태그가 부착된 융합 단백질은 효소인 GST가 그 기질인 glutathione (GSH)과 결합하는 능력에 따라 정제되거나 검출될 수 있다. 이러한 태그는 재조합 단백질의 N 말단에 결합하게 된다. GST가 태그된 단백질은 친화성에 의해 박테리아 용해물로부터 쉽게 정제된다. 결합은 TBS, pH 7.5와 같은 조건에서 거의 중성에 가까운 완충액, 즉 생리학적인 조건과 맞물릴 때 가장 효과적이다. 결합은 GST의 필수 구조와 효소 기능을 보존하는 것에 달려 있기 때문에 단백질 변성제와 호환하여 사용하지 않는다.

    2) 세포 파쇄

    세포 내에 목표 생성물이 있다면 세포를 메디아에서 분리한 뒤 세포 내 생성물을 분리하기 위해 세포를 파쇄해야 한다. 세포를 파괴하는 방법에는 여러 종류가 있는데, 기계적인 방법과 비기계적인 방법이 있다.

    <중 략>

    BSA 표준 용액을 이용하여 그래프를 그리면 다음과 같은 일차함수 식이 만들어진다.
    R 제곱 값이 1에 가까울수록 정확한 BSA 양이 들어갔다는 것을 의미한다.

    y= 0.0522x + 0.0081 라는 일차함수 식에 y에 sample 흡광도 값을 입력하여 농도인 x 값을 구하면 된다.

    sample의 양을 5 μL를 넣었기 때문에 농도를 구하기 위해선 5로 x 값을 나누어주면 농도인 μg/μL 값을 구할 수 있다.

    참고자료

    · Cytiva. (GST) gene fusion system. GST tagged protein. 2023-12-08.
    · https://cdn.cytivalifesciences.com/api/public/content/digi-11873-pdf
    · Thermofisher. GST-tagged Proteins – Production and Purification. GST tagged Protein. 2023-12-08. https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/gst-tagged-proteins-production-purification.html
    · 화학공학연구정보센터. 3세포파쇄. sonication. 2022-12-08.
    · https://www.cheric.org/files/education/cyberlecture/e200803/e200803-301.pdf
    · BIOLOGICS international Corp. IPTG Induction Theory. IPTG 원리. 2022-12-08
    · https://www.biologicscorp.com/blog/iptg-induction-protein-expression/

  • AI와 토픽 톺아보기

    • 1. GST-tagged Proteins
      GST-tagged proteins are a widely used tool in molecular biology and biochemistry for the purification and study of recombinant proteins. The glutathione S-transferase (GST) tag is a 26 kDa protein that can be fused to the N- or C-terminus of a target protein, allowing for efficient affinity purification using glutathione-agarose beads. The GST tag can also enhance the solubility of the target protein and facilitate its proper folding. However, the large size of the GST tag may interfere with the structure and function of the target protein, and the tag must be removed before further experiments. Overall, GST-tagged proteins are a valuable technique for protein expression and purification, but researchers must carefully consider the potential effects of the tag on their protein of interest.
    • 2. BCA assay
      The BCA (Bicinchoninic Acid) assay is a widely used method for the quantification of total protein concentration in a sample. It is a colorimetric assay that relies on the reduction of Cu2+ to Cu+ by proteins in an alkaline environment, followed by the chelation of the Cu+ ions by BCA, resulting in a purple-colored complex that can be measured spectrophotometrically. The BCA assay is advantageous because it is more sensitive and less susceptible to interference from common reagents compared to other protein quantification methods, such as the Bradford assay. Additionally, the BCA assay is compatible with a wide range of sample types, including cell lysates, purified proteins, and even detergent-containing solutions. However, the assay can be affected by the presence of certain compounds, such as reducing agents or chelating agents, and it is important to carefully optimize the protocol for each specific sample type. Overall, the BCA assay is a reliable and versatile method for accurate protein quantification in a variety of biological applications.
    • 3. IPTG
      IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) is a synthetic chemical inducer commonly used in bacterial expression systems to control the expression of recombinant proteins. IPTG is a lactose analog that binds to the lac repressor, relieving its inhibition of the lac operon and allowing the transcription of the target gene. This allows for tight control over the timing and level of protein expression, which is crucial for the production of proteins that may be toxic or growth-inhibitory to the host cells. IPTG is particularly useful in systems that utilize the lac promoter, such as the pET expression system, as it enables the researcher to induce protein expression at the desired time point during bacterial growth. While IPTG is an effective inducer, it is important to optimize the concentration and timing of induction to achieve the desired level of protein expression without negatively impacting cell growth and viability. Additionally, IPTG can be costly, and alternative inducers, such as lactose or autoinduction media, may be more cost-effective in certain situations.
    • 4. 단백질 정량
      단백질 정량은 생물학 및 생화학 연구에서 매우 중요한 기술입니다. 단백질 정량은 실험 결과의 해석, 단백질 정제 과정의 모니터링, 효소 활성 측정 등 다양한 응용 분야에서 필수적입니다. 대표적인 단백질 정량 방법으로는 Bradford assay, BCA assay, Lowry 방법 등이 있습니다. 각 방법마다 장단점이 있어 실험 목적과 시료 특성에 따라 적절한 방법을 선택해야 합니다. 예를 들어 Bradford 방법은 빠르고 간단하지만 계면활성제에 민감하고, BCA 방법은 계면활성제에 강하지만 발색 반응 시간이 오래 걸립니다. 또한 단백질 표준물질 선택, 반응 조건 최적화, 간섭물질 제거 등 실험 과정에서 주의해야 할 사항들이 많습니다. 따라서 단백질 정량 실험을 수행할 때는 실험 목적과 시료 특성을 고려하여 적절한 방법을 선택하고, 실험 조건을 세밀하게 최적화해야 합니다.
    • 5. 세포 파쇄
      세포 파쇄는 세포 내부의 단백질, 핵산, 소기관 등을 추출하기 위한 필수적인 과정입니다. 다양한 세포 파쇄 방법이 존재하는데, 각각의 방법은 장단점이 있어 실험 목적과 시료 특성에 따라 적절한 방법을 선택해야 합니다. 기계적 파쇄 방법으로는 소니케이션, 균질화기, 프렌치 프레스 등이 있으며, 화학적 파쇄 방법으로는 효소 처리, 계면활성제 처리 등이 있습니다. 또한 동결-해동 반복, 삼투압 충격 등의 방법도 사용됩니다. 세포 파쇄 시 주의해야 할 점은 단백질, 핵산 등의 변성을 최소화하고 효소 활성을 보존하는 것입니다. 이를 위해 적절한 완충액 선택, 저온 유지, 단백질 분해 억제제 사용 등이 필요합니다. 또한 세포 파쇄 후 불용성 물질을 제거하기 위한 원심분리 과정도 중요합니다. 결과적으로 세포 파쇄는 생물학 연구에서 필수적인 기술이지만, 실험 목적과 시료 특성에 맞는 최적의 방법 선택이 중요합니다.

  • 자료후기

      Ai 리뷰
      실험 절차와 원리를 상세히 설명하고 있으며, 실험 결과에 대한 분석과 고찰이 잘 이루어져 있다.

    • 자주묻는질문의 답변을 확인해 주세요

      해피캠퍼스 FAQ 더보기

      꼭 알아주세요

      • 자료의 정보 및 내용의 진실성에 대하여 해피캠퍼스는 보증하지 않으며, 해당 정보 및 게시물 저작권과 기타 법적 책임은 자료 등록자에게 있습니다.
        자료 및 게시물 내용의 불법적 이용, 무단 전재∙배포는 금지되어 있습니다.
        저작권침해, 명예훼손 등 분쟁 요소 발견 시 고객센터의 저작권침해 신고센터를 이용해 주시기 바랍니다.
      • 해피캠퍼스는 구매자와 판매자 모두가 만족하는 서비스가 되도록 노력하고 있으며, 아래의 4가지 자료환불 조건을 꼭 확인해주시기 바랍니다.
        파일오류 중복자료 저작권 없음 설명과 실제 내용 불일치
        파일의 다운로드가 제대로 되지 않거나 파일형식에 맞는 프로그램으로 정상 작동하지 않는 경우 다른 자료와 70% 이상 내용이 일치하는 경우 (중복임을 확인할 수 있는 근거 필요함) 인터넷의 다른 사이트, 연구기관, 학교, 서적 등의 자료를 도용한 경우 자료의 설명과 실제 자료의 내용이 일치하지 않는 경우
    • 정가
      2,500원
      판매자스토어판매자스토어 자료문의자료문의 링크복사 링크복사
      • 지식판매자
        슈튜 G
      • 페이지
        10 페이지 한컴오피스
      • 최초등록일
        2024.03.28
      • 최종저작일
        2023.12

    찾으시던 자료가 아닌가요?

    지금 보는 자료와 연관되어 있어요!
    왼쪽 화살표
    오른쪽 화살표
    문서 초안을 생성해주는 EasyAI
    안녕하세요 해피캠퍼스의 20년의 운영 노하우를 이용하여 당신만의 초안을 만들어주는 EasyAI 입니다.
    저는 아래와 같이 작업을 도와드립니다.
    - 주제만 입력하면 AI가 방대한 정보를 재가공하여, 최적의 목차와 내용을 자동으로 만들어 드립니다.
    - 장문의 콘텐츠를 쉽고 빠르게 작성해 드립니다.
    - 스토어에서 무료 이용권를 계정별로 1회 발급 받을 수 있습니다. 지금 바로 체험해 보세요!
    이런 주제들을 입력해 보세요.
    - 유아에게 적합한 문학작품의 기준과 특성
    - 한국인의 가치관 중에서 정신적 가치관을 이루는 것들을 문화적 문법으로 정리하고, 현대한국사회에서 일어나는 사건과 사고를 비교하여 자신의 의견으로 기술하세요
    - 작별인사 독후감
    “EasyAI 가 작성한 문서 초안은 완벽하지 않을 수 있습니다"
    EasyAI 이동하기
    해캠 AI 챗봇과 대화하기
    챗봇으로 간편하게 상담해보세요.
    2025년 12월 31일 수요일
    AI 챗봇
    안녕하세요. 해피캠퍼스 AI 챗봇입니다. 무엇이 궁금하신가요?
    9:54 오후