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실험. 단백질 추출 및 발현

큐잉
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최초 등록일
2021.04.01
최종 저작일
2019.05
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목차

I. Introduction
1. 단백질 기능
2. 단백질 정량 (Protein quantitation) : Bradford assay
3. IPTG를 이용한 재조합단백질의 발현 유도

Ⅱ. Materials

Ⅲ. Chemical reagent & Apparatus

Ⅳ. Methods

V. Results

Ⅵ. Discussion

본문내용

1. 단백질 기능
단백질은 생명체의 주요 성분이며 세포에 필수적인 광범위한 기능을 수행한다. DNA는 정보 분자인데 반하여 단백질은 모든 세포에서 작업을 수행한다. 단백질은 신진 대사 활동을 조절하는 생화학 반응을 촉진하고 세포와 생물의 구조적 안정성을 유지한다. 단백질은 그들의 생물학적 기능을 포함한 다양한 방법으로 분류 될 수 있다.

2. 단백질 정량 (Protein quantitation) : Bradford assay
The Bradford assay (단백질 비색 분석)는 단백질에 존재하는 소수성 아미노산 잔기와 아르기닌이 염료와 결합할 때 쿠마시 염료의 흡광도 변화에 기초한다. 염료의 결합 형태는 파란색이고 595 nm에서 최대 흡광 스펙트럼을 가진다. 비 결합 형태는 녹색 (650 nm)와 붉은색(470 nm)이다. 595 nm에서 흡광도의 증가는 결합된 염료의 양이고 따라서 샘플에 존대하는 단백질의 양(농도)이다.
다른 단백질 분석법과는 달리, Bradford 단백질 분석은 단백질 시료에 존재할 수있는 여러 가지 화학 물질에 의한 간섭에 덜 민감하다.

3. IPTG를 이용한 재조합단백질의 발현 유도
1) IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) 란?
알로락토스(allolactose)와 분자적으로 유사하며, 젖당 대사물(lactose metabolite)로서 락 오페론(lac operon)의 전사를 개시한다. 그리고 이러한 이유로, 유전자가 락 오페론 통제 하에 있을 때 단백질 발현을 유도하는데 쓰인다.

2) 작용 메카니즘
알로락토스와 유사하게, IPTG는 젖당 분해 억제 단백질(lac repressor)에 결합하여 젖당 작동부위(lac operator)에서 알로스테릭한 방법으로 4량체의 억제제를 저해한다.

참고 자료

위키피디아 – IPTG
https://ko.wikipedia.org/wiki/IPTG
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