SDS-PAGE

문서 내 토픽

• 1. SDS-PAGE

  SDS-PAGE는 단백질을 분리하는 기술로, 전기영동 이동성을 이용한다. 단백질은 SDS 처리를 통해 균일하게 음전하를 띠게 되어 분자량에 따라 분리될 수 있다. 이 실험에서는 단백질 발현에 IPTG의 영향을 확인하고자 하였으나 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다. 단백질 염색 결과를 통해 약 45 kDa 크기의 단백질이 분리된 것을 확인할 수 있었다.

• 2. Discontinuous Buffer System

  Discontinuous buffer system은 stacking gel과 running gel을 사용하여 단백질을 분리한다. stacking gel에서 단백질이 하나의 sharp band를 형성하고, running gel에서 분자량에 따라 분리된다. 이 시스템은 이온 농도 차를 이용하여 단백질 분리를 돕는다.

• 3. IPTG

  IPTG는 lac 오페론의 전사를 유발하는 유도제로, 대장균에서 단백질 발현을 유도하는 데 사용된다. IPTG는 lac 억제인자에 결합하여 lac 오페론의 전사를 활성화시킨다. 이번 실험에서는 IPTG 처리 유무에 따른 단백질 발현 차이를 확인하고자 하였으나, 이전 실험 결과의 불확실성으로 인해 IPTG의 영향을 명확히 알기 어려웠다.

• 4. GST 태그

  GST(glutathione S-transferase) 태그는 재조합 단백질의 정제에 사용되는 방법 중 하나이다. GST 태그가 부착된 단백질은 GSH(glutathione)와의 친화성을 이용하여 쉽게 정제될 수 있다. GST 태그는 단백질의 발현과 용해도를 높이는 데 도움이 될 수 있다.

Easy AI와 토픽 톺아보기

• 1. SDS-PAGE

  SDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 단백질 분자량 분석을 위한 가장 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. SDS는 단백질을 변성시켜 음전하를 띠게 하고, 전기영동을 통해 분자량에 따라 분리됩니다. 이 기술은 단백질의 크기와 순도를 확인하는 데 매우 유용하며, 단백질 정제, 단백질 구조 분석, 단백질 상호작용 연구 등 다양한 분야에서 활용됩니다. SDS-PAGE는 간단하고 재현성 있는 방법이며, 단백질 연구에 필수적인 도구라고 할 수 있습니다.

• 2. Discontinuous Buffer System

  Discontinuous Buffer System은 SDS-PAGE에서 사용되는 전기영동 버퍼 시스템입니다. 이 시스템은 샘플 로딩 웰과 분리 겔 사이에 농축 겔을 포함하여, 단백질 샘플이 농축되고 분리되는 과정을 최적화합니다. 농축 겔에서 단백질이 농축되면 좁은 밴드로 분리되어 분해능이 높아집니다. 또한 Tris-Glycine 버퍼 시스템을 사용하여 pH 변화에 따른 단백질 변성을 방지합니다. 이러한 Discontinuous Buffer System은 SDS-PAGE의 분리능과 재현성을 크게 향상시켜 단백질 분석에 널리 사용되고 있습니다.

• 3. IPTG

  IPTG(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside)는 대장균 유전자 발현 시스템에서 매우 중요한 유도제입니다. IPTG는 lac 프로모터를 활성화시켜 목적 단백질의 발현을 유도합니다. IPTG는 세포 내에서 분해되지 않고 지속적으로 작용하므로, 단백질 발현을 효과적으로 조절할 수 있습니다. 또한 IPTG는 세포독성이 낮아 세포 생장에 큰 영향을 미치지 않습니다. 이러한 특성으로 인해 IPTG는 재조합 단백질 생산, 유전자 기능 연구 등 다양한 분야에서 널리 사용되고 있습니다.

• 4. GST 태그

  GST(Glutathione S-Transferase) 태그는 재조합 단백질 정제에 널리 사용되는 융합 단백질 태그입니다. GST 태그는 26 kDa의 크기로, 목적 단백질과 융합되어 발현됩니다. GST 태그는 글루타치온 아가로스 비드에 강하게 결합하므로, 이를 이용하여 목적 단백질을 쉽게 정제할 수 있습니다. 또한 GST 태그는 단백질의 용해도와 안정성을 높이는 효과가 있어, 불용성 단백질의 발현에도 유용합니다. 이러한 장점으로 인해 GST 태그는 단백질 연구, 구조 분석, 효소 활성 측정 등 다양한 분야에서 널리 활용되고 있습니다.