
단백질 분석(SDS-PAGE & Fluorescence)
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14주차_SDS page
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2023.09.02
문서 내 토픽
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1. SDS-PAGESDS-PAGE는 Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel eletrophoresis의 약자로, 5~250 kDa 사이의 단백질을 분리할 때 사용되는 방법입니다. SDS는 단백질에 결합하여 전하의 영향을 배제하고 크기에 의해 이동속도가 결정되도록 합니다. 또한 DTT와 같은 reducing agent는 단백질의 disulfide bond를 변성시켜 linear한 1차 구조로 만듭니다. SDS-PAGE 후 단백질을 확인하기 위해 Coomassie Briliant Blue, silver staining 등의 staining 방법을 사용합니다.
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2. Fluorescence spectroscopyemGFP는 488nm의 빛을 흡수하여 excitation되며, 510nm 부근에서 최대 emission peak를 나타냅니다. 이를 통해 emGFP의 형광 특성을 확인할 수 있습니다.
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1. SDS-PAGESDS-PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 단백질 분자량 분석을 위한 가장 널리 사용되는 기술 중 하나입니다. 이 기술은 단백질 시료를 SDS(음이온성 계면활성제)로 처리하여 단백질의 고유한 전하를 마스킹하고, 분자량에 비례하는 음전하를 부여합니다. 이렇게 처리된 단백질은 전기영동을 통해 분자량에 따라 분리되며, 염색 과정을 거쳐 밴드로 확인할 수 있습니다. SDS-PAGE는 단백질의 순도 확인, 분자량 추정, 단백질 복합체 분석 등 다양한 용도로 활용되며, 단백질 연구 분야에서 필수적인 기술로 자리잡고 있습니다.
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2. Fluorescence spectroscopy형광분광법(Fluorescence spectroscopy)은 형광 물질의 특성을 분석하는 기술로, 생물학, 화학, 물리학 등 다양한 분야에서 널리 사용되고 있습니다. 이 기술은 특정 파장의 빛을 시료에 조사하면 시료 내 형광 물질이 들뜬 상태가 되어 더 낮은 에너지 수준의 빛을 방출하는 현상을 이용합니다. 이를 통해 시료 내 특정 물질의 농도, 분포, 상호작용 등을 정량적으로 분석할 수 있습니다. 형광분광법은 민감도가 높고, 비파괴적이며, 실시간 모니터링이 가능하다는 장점이 있어 생물학 및 의학 분야에서 널리 활용되고 있습니다. 특히 단백질, 핵산, 세포 내 대사물질 등의 분석에 유용하게 사용되고 있습니다.
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Western Blotting 레포트1. Western Blotting Western Blotting은 단백질을 감지하고 양을 확인하여 분자량을 측정할 수 있는 방법입니다. 단백질을 polyacrylamide gel에서 전기영동으로 분리하고, nitrocellulose membrane에 옮긴 후, 찾고자 하는 단백질의 primary antibody와 secondary antibody를 이용하...2025.01.21 · 의학/약학
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생화학실험 단백질의 정성분석1. Western blot Western blot은 단백질을 폴리아크릴아마이드 겔에서 전기영동을 이용하여 분리하고, 니트로셀룰로오스 membrane에 옮긴 후 찾고자 하는 단백질의 항체(1차 항체)와 결합시킨 후 이 항체와 반응하는 2차 항체를 이용하여 밴드를 형상화하는 기술이다. 이 기술은 크기별 분리, 단백질을 고체 지지체로 이동, 1차 및 2차 항체...2025.05.06 · 자연과학
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Protein Electro-transfer and Western blot1. Western blotting Western blotting은 단백질에 대한 blotting 기술을 뜻하며, 항원-항체 반응을 이용한다. 단백질 혼합물을 polyacrylamide gel에서 SDS-PAGE를 이용하여 크기에 따라 분리하고 membrane으로 electro-transfer하여 흡착시킨 후 membrane 표면에서 항체를 이용하여 원하는...2025.01.23 · 의학/약학
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서울대학교 생화학실험 - Protein Expression & Purification (실험2) 결과레포트 8페이지
생화학실험 실험2 결과 레포트1. Abstract이번 실험에서 2주에 걸쳐 단백질의 발현, 정제 및 분리 방법을 학습했다. 5주차엔 Histag + eGFP protein을 E.Coli에서 발현한 후, 이를 Histag + Ni-NTA resin을 이용한 column chromatography로 정제하였다. 정제된 sample 중 elution에 해당하는 것에서만 eGFP의 fluorescence를 관찰할 수 있었다. 6주차엔 정제된 단백질 샘플을 SDS-PAGE로 분석하였다. Elution 샘플에서 특정한 protein band가...2022.12.10· 8페이지 -
생명과학실험1 A+ Protein electro transfer 와 Western blot 을 이용한 단백질 분석 보고서 7페이지
학생이름ㄶㅇ학번: ___분반: ___제출일자: 2022.04.26Protein electro transfer 와 Western blot 을 이용한 단백질 분석IntroductionWestern blot 은 biological sample 을 gel 에서 membrane 으로 옮겨 membrane 표면에서 검출하는 단백질 분석 방법이다. Western blot 은 다음과 같은 순서로 진행된다. (1) Protein mixture 을 SDS-PAGE 를 이용해 크기대로 분리한다. (2) 단백질을 nitrocellulose 또는 poly...2025.06.24· 7페이지 -
서강대학교 현대생물학실험1 6XHis tagged eGFP 발현과 정제 및 정량/정성적 특징 확인 13페이지
Abstract본 실험은 eGFP를 발현하고 정제한 후, 정량적 및 정성적 특징을 확인해 보았다. Green Fluorescent Protein(GFP)는 Aequorea Victoria에서 발견한 단백질로, 에너지를 흡수한 뒤 509nm 파장에서 녹색 형광을 방출한다. 본 실험에서는 GFP를 변형한 enhanced Green Fluorescent Protein(eGFP)을 사용한다. eGFP는 더 센 형광을 나타내며 extinction의 최대 파장은 488nm, emission의 최대 파장은 509nm이다. 단백질 정제를 위해 재...2025.03.30· 13페이지 -
Western Blotting&SDS Page 실험보고서 7페이지
실험 보고서실험일자 : 2010. 10. 12(화) 오전 9시~12시 학번 : 20091396 이름 : 변정은1. 제목 : Western Blotting&SDS-Page2. 실험의 목적Western Blotting을 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질만을 찾아낼 수 있다.3. 실험의 원리전기영동 기술은 생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는데 기본적인 기술이었다. 종이나 전분(starch), agarose등이 단단하고, 반응성이 없으며, 대류성이 없어서 전기 영 동 기술에 많이 이용되었으나 현재는 polyacryl...2013.03.12· 7페이지 -
[분자생물학실험]Protein assay and Western blot 7페이지
Protein assay and Western blot1. 실험 목적가. Protein assay : Cell에서 protein을 추출하는 과정을 이해하고, protein assay(BCA method)을 이용하여 단백질의 함량을 측정할 수 있음을 이해한다.나. Western blot : Protein sample을 membrane에 transfer하고, Western blot을 통하여 항원-항체 반응을 유도하여 원하는 특정 단백질을 detection 할 수 있음을 이해한다.2. 실험 기구 및 시약가. Protein assay1) ...2019.03.28· 7페이지