eGFP 항체 생산 및 Western blotting 분석

본 내용은 " 현대생물학실험1 4차 풀레 eGFP의 복강주사를 통한 Mouse에서의 항체 생산과 분석(A0) " 의 원문 자료에서 일부 인용된 것입니다. 2025.09.06

문서 내 토픽

• 1. 면역반응과 항체 생산

  면역반응은 외부 물질에 대한 세포의 방어 반응으로 비특이적 방어와 특이적 방어가 있다. 특이적 방어는 항원을 인식하여 일어나는 후천적 반응으로 세포성 면역과 체액성 면역으로 구분된다. 항체는 B림프구에서 생성되는 면역글로불린으로 항원과 특이적으로 결합하는 Y형 구조를 가진다. 1차 면역반응에서 항체가 생성되고, 같은 항원이 재침입할 때 2차 면역반응이 일어나 더 빠르고 다량의 항체가 생산된다.

• 2. Western blotting 기술

  Western blotting은 SDS-PAGE로 분리한 단백질을 membrane에 옮긴 후 항체를 이용하여 특정 단백질을 검출하는 방법이다. Transfer 과정에서 음전하로 대전된 단백질이 양극 방향으로 이동하여 membrane으로 옮겨진다. Blocking, 1차 항체 반응, 2차 항체 반응, Detection 순서로 진행되며, AP나 HRP 효소를 이용하여 시각적으로 검출한다.

• 3. SDS-PAGE 전기영동

  SDS-PAGE는 분자량에 따라 단백질을 분리하는 기술로, 음이온성 계면활성제인 SDS가 단백질에 결합하여 음전하의 선형 형태로 유지한다. Stacking gel과 Separating gel로 구성되며, Stacking gel은 sample을 축적하여 해상도를 높이고 Separating gel은 높은 pH에서 단백질을 분자량에 따라 분리한다.

• 4. 실험동물 및 채혈 방법

  Mus musculus는 다루기 쉽고 가격이 저렴하며 사육이 용이한 실험동물이다. 심장 채혈은 많은 양의 혈액을 확보할 수 있으나 동물에게 고통을 주므로 안락사 시에만 사용한다. 좌심실에서 채혈하는 이유는 근육이 두껍고 상대적으로 많은 혈액을 확보할 수 있기 때문이다.

Easy AI와 토픽 톺아보기

• 1. 면역반응과 항체 생산

  면역반응과 항체 생산은 생명과학 연구의 핵심 주제입니다. 항체는 특정 항원을 인식하고 결합하는 단백질로서, 진단, 치료, 연구 등 다양한 분야에서 필수적인 도구입니다. B세포가 항원을 인식한 후 형질세포로 분화하여 항체를 생산하는 과정은 정교하고 효율적으로 조절됩니다. 단클론항체 기술의 발전으로 특이성 높은 항체 생산이 가능해졌으며, 이는 질병 진단과 치료에 혁신을 가져왔습니다. 면역반응의 메커니즘을 이해하는 것은 백신 개발, 면역질환 치료, 암 면역치료 등 현대 의학의 발전에 매우 중요합니다.

• 2. Western blotting 기술

  Western blotting은 특정 단백질을 검출하고 분석하는 고전적이면서도 여전히 널리 사용되는 기술입니다. 단백질을 크기별로 분리한 후 항체를 이용하여 특정 단백질을 선택적으로 검출할 수 있어 높은 특이성을 제공합니다. 정량적 분석이 가능하며, 단백질의 발현 수준, 수정, 상호작용 등을 연구할 수 있습니다. 다만 시간이 소요되고 정량성이 제한적일 수 있다는 단점이 있습니다. 현대에는 면역형광, 질량분석 등 다양한 기술이 개발되었지만, Western blotting은 여전히 신뢰성 있는 검증 방법으로 널리 활용되고 있습니다.

• 3. SDS-PAGE 전기영동

  SDS-PAGE는 단백질을 분자량에 따라 분리하는 가장 기본적이고 중요한 기술입니다. SDS는 단백질에 음전하를 부여하여 단백질의 크기에만 의존하는 분리를 가능하게 합니다. 이 기술은 단순하면서도 효과적이며, 단백질의 순도 확인, 분자량 결정, 단백질 정제 등 다양한 목적으로 사용됩니다. 2D-PAGE로 확장하면 등전점과 분자량 두 가지 특성으로 단백질을 분리할 수 있습니다. 비용 효율적이고 재현성이 높아 기초 연구부터 임상 진단까지 광범위하게 활용되는 필수 기술입니다.

• 4. 실험동물 및 채혈 방법

  실험동물은 생명과학 연구의 필수 요소이며, 윤리적이고 과학적으로 책임감 있게 사용되어야 합니다. 마우스, 래트, 토끼 등 다양한 동물 모델이 인간 질병 연구에 활용되고 있습니다. 적절한 채혈 방법은 동물의 스트레스를 최소화하고 신뢰할 수 있는 샘플을 확보하는 데 중요합니다. 동물 복지와 3R 원칙(Replacement, Reduction, Refinement)을 준수하는 것이 필수적입니다. 채혈 부위, 방법, 빈도는 동물의 종과 상태에 따라 신중하게 결정되어야 하며, 동물실험윤리위원회의 승인을 받아야 합니다.