현대생물학실험1 4차 풀레 eGFP의 복강주사를 통한 Mouse에서의 항체 생산과 분석(A0)

소개

"현대생물학실험1 4차 풀레 eGFP의 복강주사를 통한 Mouse에서의 항체 생산과 분석(A0)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Meterial & Method
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
본 실험은 Mouse에 Purified eGFP를 복강 내 투여한 후 심장 채혈을 통해 항체를 추출하여 이를 Western blotting 하여 확인하는 것에 그 목적이 있다. 5주 된 Female BALB/c에 0.5 mg/ml eGFP와 Freund’s adjuvant를 1:1로 혼합한 mixture를 일주일 간격으로 총 3회 복강주사하여 Mouse에서 eGFP에 대한 항체를 형성하였다. 1주 차에는 complete adjuvant를, 2,3주 차에는 incomplete adjuvant를 사용하였는데 이는 너무 많은 면역 반응으로 인한 부작용을 줄이기 위함이다. 이후 CO_2 gas를 사용해 안락사를 진행하고 근육이 두꺼운 심장의 좌심실에서 혈액을 채취해 eGFP에 특이적으로 결합하는 polyclonal antibody가 함유된 혈청을 얻었다. 이 항체를 1차 항체로 사용한 후 AP가 결합된 anti-mouse IgG를 2차 항체로 사용하여 Western blotting을 진행하였다. 0.5 mg/ml eGFP를 1X, 1/2X, 1/4X, 1/8X로 희석한 후 Western blot을 실시하였으며 실험 결과 28.3 kDa 부근에서 선명한 band가 나와 문헌에서의 eGFP MW인 28.3 kDa와 일치하는 것을 확인하였다. 이를 통해 실험에서 채취한 혈청에 eGFP와 특이적으로 결합하는 항체가 들어있음을 알 수 있다. 실험 결과 희석배수가 낮을수록 선명하고 굵은 band가 관찰되었는데, 이는 항체의 농도가 높을수록 eGFP와 많이 결합하기 때문이다.

2. Introduction
면역반응(Immune response)이란 세포가 외부 물질에 방어하는 반응으로, 비특이적 방어 작용과 특이적 방어 작용이 존재한다. 특이적 방어 작용은 특정 항원을 인식하여 일어나는 후천적 반응으로 세포성 면역과 체액성 면역이 있다. 병원체가 침입하면 항원제시세포가 식세포 작용으로 항원을 제시한다.

참고자료

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