DPPH 라디칼 소거 활성능을 이용한 항산화 물질 평가

본 내용은 " <화공생물공학실험> DPPH " 의 원문 자료에서 일부 인용된 것입니다. 2023.11.15

문서 내 토픽

• 1. DPPH 라디칼 소거 활성능

  DPPH 라디칼 소거 활성능은 [(A control - A sample) / A control] × 100 공식으로 계산되며, A control은 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도, A sample은 시료를 첨가한 반응군의 흡광도를 의미한다. 실험 결과 Tocopherol이 가장 우수한 항산화 능력을 보였으며, Gallic acid도 상당한 항산화 능력을 나타냈다. L-ascorbic acid는 중간 정도의 항산화 능력을 보였고, Naringin은 상대적으로 낮은 항산화 능력을 나타냈다.

• 2. 흡광도 측정 및 분석

  517nm 파장에서 흡광도를 측정하여 항산화 물질의 효능을 평가한다. 보라색 DPPH가 항산화물질에 의해 라디칼이 제거되면 노란색으로 변하므로, 효과가 뛰어난 시료는 작은 흡광도 값을, 효과가 떨어지는 시료는 큰 흡광도 값을 갖는다. 농도가 증가할수록 흡광도가 감소하는 추세를 보였다.

• 3. 연속희석 실험 방법

  200μM부터 6.25μM까지 6단계로 연속희석하여 각 농도별 시료를 준비한다. Gallic acid, L-ascorbic acid, Naringin, Tocopherol 등 4가지 물질에 대해 0.25mL씩 취하여 에탄올 또는 증류수 0.25mL를 첨가하는 방식으로 진행되며, 각 단계별로 정확한 농도 조절이 이루어진다.

• 4. 항산화 물질의 특성 비교

  Tocopherol은 DPPH 라디칼을 효과적으로 중화시키는 강력한 항산화 물질로 확인되었다. Gallic acid도 상당한 항산화 능력을 나타냈으며, L-ascorbic acid는 자유라디칼 중화에 효과적인 중간 수준의 항산화 물질이다. Naringin은 음의 변화를 나타내어 다른 시료에 비해 제한적인 항산화 능력을 가지는 것으로 나타났다.

Easy AI와 토픽 톺아보기

• 1. DPPH 라디칼 소거 활성능

  DPPH 라디칼 소거 활성능은 항산화 물질의 효능을 평가하는 가장 널리 사용되는 방법 중 하나입니다. 이 방법은 간단하고 빠르며 비용 효율적이라는 장점이 있어 많은 연구에서 활용됩니다. DPPH는 안정적인 자유 라디칼로서 항산화 물질과 반응하면 색상이 변하므로 정량적 측정이 용이합니다. 다만 이 방법은 수용성 항산화제에 더 적합하며, 지용성 항산화제의 경우 정확도가 낮을 수 있다는 한계가 있습니다. 또한 DPPH 소거 활성능이 높다고 해서 반드시 생체 내 항산화 효과가 크다고 보장할 수 없으므로, 다른 평가 방법과 함께 병행하는 것이 권장됩니다.

• 2. 흡광도 측정 및 분석

  흡광도 측정은 항산화 활성 평가에서 핵심적인 분석 기법입니다. 분광광도계를 이용한 흡광도 측정은 객관적이고 정량적인 데이터를 제공하며, 재현성이 우수합니다. 측정 파장, 큐벳의 경로길이, 온도 등 여러 변수를 정확히 제어해야 신뢰할 수 있는 결과를 얻을 수 있습니다. 흡광도 값의 변화를 통해 반응 진행 정도를 시간에 따라 추적할 수 있어 반응 동역학 분석에도 유용합니다. 다만 측정 전 기기 보정, 표준물질의 선택, 샘플 전처리 등이 정확하게 수행되어야 하며, 측정값의 해석 시 배경 흡광도 제거 등 적절한 보정이 필요합니다.

• 3. 연속희석 실험 방법

  연속희석 실험은 항산화 물질의 농도-반응 관계를 파악하는 중요한 방법입니다. 이 방법을 통해 IC50 값(50% 억제 농도)을 결정할 수 있으며, 이는 항산화 물질의 효능을 비교하는 표준 지표로 사용됩니다. 연속희석을 통해 넓은 농도 범위에서 데이터를 수집하면 용량-반응 곡선을 작성할 수 있어 물질의 특성을 더 정확히 이해할 수 있습니다. 다만 희석 배수, 희석 횟수, 각 단계에서의 정확한 부피 측정이 중요하며, 희석 오차가 누적될 수 있으므로 신중한 조작이 필요합니다. 또한 매우 낮은 농도에서는 측정 오차가 커질 수 있으므로 적절한 측정 범위 설정이 필수적입니다.

• 4. 항산화 물질의 특성 비교

  다양한 항산화 물질의 특성을 비교하는 것은 효과적인 항산화제 개발과 선택에 필수적입니다. 각 물질의 DPPH 소거능, ABTS 소거능, 환원력 등 여러 지표를 종합적으로 평가하면 더 정확한 비교가 가능합니다. 항산화 물질의 구조, 극성, 용해도 등의 화학적 특성이 그 활성에 영향을 미치므로 이러한 요소들을 함께 고려해야 합니다. 천연 항산화제와 합성 항산화제, 또는 서로 다른 식물 추출물 간의 비교를 통해 최적의 항산화제를 선별할 수 있습니다. 다만 단일 방법만으로는 완전한 비교가 어려우므로, 여러 평가 방법을 병행하고 생체 내 효과까지 검증하는 것이 바람직합니다.