* 역사란 무엇인가 제 1장 끝부분에 나오는 ‘역사’에 대한 카의 유명한 정의, 곧 “역사란 사실과 역사가 사이의 그리고 과거와 현재 사이의 끊임없는 대화”라는 정의의 의미가 무엇인지 ‘사실(fact)'에 대한 그의 이해에 비추어서 설명할 것.카는 역사에 대해 “역사란 사실과 역사가 사이의 그리고 과거와 현재 사이의 끊임업는 대화”라는 정의를 내리고, 의미를 사실과 기록이라는 두가지 개념을 이용하여 풀어가고 있다.텍스트에서 “역사란 현재의 눈을 통해서 현재의 문제에 비추어 과거를 보는것에 성립하는 것이다. 역사가의 주임무는 기록이 아니라 평가하는 일이니, 역사가가 평가하지 않는다면 기록할 만한 가치가 있는것이 무엇인지 어떻게 알수 있겠는가 하는 뜻이다.” 이런 글이 나온다. 즉 역사가의 임무를 서술하고 있는데, 역사가는 당시 일어난 사건에 대해 현재의 눈을 통해 역사가 자신의 소신에 맞게 해석하고 그 에피소드가 가치있는것이라 판단되면, 그것은 기록되어 역사가 된다고 설명하고 있다. “역사가가 연구하는 과거는 죽은 과거가 아니라, 어떤의미에서는 아직도 현실속에 살아있는 과거이다. ”라고 설명하고 콜링우드의 말을 이용하여 “역사란 역사가의 경험이다. 역사는 오직 ‘역사가’만이 만든다. 즉 역사를 기록하는것은 역사를 만드는 유일한 방법이라고 서술하고 있다.그럼 사실과 기록의 문제로 다시 돌아가보자. 카는 순수한 형식의 사실은 존재할수 었으며, 랑케가 주장한 사실로서의 역사(정확한 사실을 기술하는 객관적 의미로서의 역사)를 역사기록에서의 이상향으로 삼긴 하지만 인간이란 존재는 여러환경에 영향을 받는 존재이기 때문에 역사기술에 있어서 완전한 객관성을 띄기 어렵다고 했다. 또 콜링우드에 의하면 “역사가가 그 등장인물의 마음속의 움직임을 사상속에 재현해야 한다면, 독자는 독자대로 역사가의 마음속 움직임을 재현해야 하기 때문이다.” 이것은 즉 역사가가 다루고 있는 사실에 대한 연구를 시작하기 전에 그 역사가에 대해 연구해야 한다고 강조한다. 즉 기록된 역사는 기록자의 마음을 통해 기록되기 때문에 우리가 역사책을 읽을때 역사적 사실 이전에 기록한 역사가에 대해 관심을 가져야 한다는 것이다.
* 과학혁명의 구조- 과학적 진리란 영원히 변하지 않는 불변의 진리인가? 쿤의 입장에서 평가해볼 것.결론부터 말하자면 “과학적 진리는 변한다” 이다. 하지만 쿤은 주장을 하면서 수수께끼가 아닌 문제에 대해서는(예를 들어 암치료) 과학적 진리가 있을수도 있다고 말한다. 과학혁명의 구조는 패러다임이라는 용어를 써서 과학의 발전을 설명하고 있는데, 여기서 패러다임의 국어사전적 정의는 ‘어떤 한 시대 사람들의 견해나 사고를 근본적으로 규정하고 있는 테두리로서의 인식의 체계. 또는 사물에 대한 이론적인 틀이나 체계. ’를 말하는데 쿤이 설명한 패러다임또한 비슷한 의미로 쓰였다.인류역사상 패러다임 변화는 수없이 많이 일어나고 있다. 그중 잘 알려진 예로는 코페르니쿠스 갈릴레이의 천동설 지동설을 들수 있는데, 그 당시 천문학을 연구하던 학자들뿐만 아니라 인류는 ‘세상은 지구를 중심으로 하여 돌고있다’는 천동설을 믿었다. 하지만 현재의 인류는 지동설을 믿고 살고 있다. 그렇다고 천동설이 비과학적이라는 판단은 쉽게 내릴수 없다. 단지 그것은 시대에 쳐진 이론으로서 과학의 진보에 기여하는 누적의 과정을 거치느냐, 폐기의 길을 걷느냐의 차이일 뿐이다. 쿤은 양립될수 없는 천동설, 지동설의 예와 같이 한때 높이 기리던 과학적 이론은 점차 한계를 들어내고 새로운 이론의 발발을 초래하게 되고, 양립될수 없는 두이론사이의 새 이론이 받아들여지게 되는 변화를 맞이하게 되는데 이를 ‘과학혁명’이라 보고 있다.그럼 패러다임으로 설명되는 과학적 진리는 어쩌면 폐기될 수도 있는 불완전한 이론으로 생각될수 있는데, 텍스트는 ‘패러다임의 연구는 과학도를 그가 나중에 실제에 몸담게 될 특정한 과학 사회에서의 구성원이 되도록 준비시켜 주는 기둥이 된다.’라고 하며 패러다임 연구의 중요성을 강조한다. 쿤은 과학의 발달양식은 패러다임의 여러 변환으로 패러다임의 혁명을 거쳐 계속 전이, 결국 새롭거나 더욱 발달된 과학으로 이르게 되는것을 전형적인 과학발달양식으로 보고있다.하지만 패러다임이 모든 개념, 현상, 기술의 전반에 걸쳐 설명을 할수 없는 위기를 맞게 됫다 해도 그것에 대해 모든 설명할 필요는 없다 고 말한다. 즉 패러다임 내지 패러다임 후보들로 인해 과학이 발달될수 있고, 이런 패러다임의 위기없이 나타날 수 있는 현상들은 그저 모두 비슷하게 보이는 현상들로 패러다임의 변화를 초래할수 없기 때문이다.쿤은 과학적진리( 진리:명제가 사실에 정확하게 들어맞음. 또는 논리의 법칙에 모순되지 아니하는 바른 판단. 형식적 의미로 사유의 법칙에 맞는다는 의미에서의 사고의 정당함을 의미한다. )를 다른용어로 바꿔 언급하는데, ‘정상과학’이라는 용어가 등장한다. 텍스트에 ‘정상과학의 연구는 패러다임이 이미 제공한 그런 현상과 이론을 명료하게 표현하는 쪽으로 진행된다.’ 라고 설명하는데 이말은 일단 패러다임이 실험에 의해 확실해진 다음에 그 분야의 실험은 그 패러다임에 의존하게 된다는 것을 의미한다. 이 정상과학은 패러다임의 새로운 응용과 이전실험의 정확성을 높이기 위해 필수사항으로 작용한다. 정확성의 문제는 의 방법에 의해 끊임없이 진행되어 왔다. 정상과학은 사실이나 새롭고 신기한것을 겨냥하지 않기 때문이다.1.중요한 사실의 결정2.사실을 이론과 일치시키는것3.이론의 명료한 정련따라서 패러다임을 정련하기 위해서는 문제유형을 가다듬고 이론과 사실의 일치를 통해 정확성을 증진시킬 수밖에 없었다. 따라서 이론에의 미결된 허점이나, 장치에 분석되지 않은 요소로 인해 증명이 완결되지 못하면 그 분야의 연구자들은 아무것도 측정하지 않았다고 결론지어진다. 이에 실험결과가 이론과 명료하게 상관관계를 갖도록 장치를 다시 구성해야 했다.쿤은 과학자들의 임무는 ‘세상을 이해하려 하고, 또 세상이 규칙적으로 이루어진 그런 정밀성과 범주를 확장시키기 위해 애써야만 한다’고 주장하고 있다. 이러는 동안 불규칙성들이 나타나면 과학자는 자기의 관찰기술을 새로이 정련시키거나, 또는 이론을 뚜렷하게 명시해야 하는 도전을 받게될 뿐이다.다시 서론의 내용으로 돌아가 천동설과 지동설의 예처럼 지금은 과학혁명의 이름아래 지동설이라는 패러다임으로 살아가고 있는것처럼 지동설을 대체할만한 패러다임이 나오면 인류는 이 대체패러다임을 믿고 살아갈 것이다. 이처럼 과학의 진리가 불완전한것은 문제의 유형이 불완전하기 때문이다. 누구도 지구가 태양주위를 도는지, 태양이 지구주위를 도는지 우주밖에서 관찰하지 않는이상 그것을 알수 없다. 개개의 사실(즉 실험이나 일어나는 자연현상)을 통해 그것을 포함하는 이론 그 현상을 설명할수 있는 이론을 만드는 귀납법적인 과학법은 수수께끼를 푸는것처럼(천동설과 지동설에서는 회전축을 어디로 잡느냐에따라 달라질수 있는문제) 답이 대체될수 있는 논지를 제공할지도 모른다. 한가지 예로 ∏(파이값) 계산을 들수 있다. 과거부터 수학과학자들은 파이값풀이에 대해 연구해 왔고 풀어내려고 노력했다. 파이값은 계산해보니 ‘비순환소수다’ 라는 귀납법적 추리로 파이값은 비순환소수라는 현재의 패러다임이 정련됫다고 생각한다. 하지만 미래에 더 뛰어난 슈퍼컴퓨터가 나와 파이값을 풀어내 순환소수임을 증멸할수 있을지도 모른다. 이렇게 되면 과학혁명, 즉 패러다임의 변화가 일어날것이다.
1. Experimetal title :Enumeration of LAB in kimchi2. Principle일정 부피내에 존재하는 세균수의 측정법에는 1)혈구 측정기(haemacytometer)등을 이용하여 현미경하에서 세균수를 직접 측정하는 방법과, 2)적절히 희석한 시료를 배지에 접종하여 형성되는 콜로니의 수를 측정하는 법, 3)시료 또는 배양액의 탁도를 측정하여 세균수를 계산하는 방법등이 있다.이번 실험에서는 분산평판법이 사용되었다. BCP plate count agar의 CaCO3는 젓산균이 자라면서 halo가 생겨 미생물 counting할 때 도움이 된다.3. Materials & method재료 :1. 9.9ml 희석관 2개2. 9.0ml 희석관 1개3. 멸균된 페트리접시4. 멸균된 1ml피펫 4개5. BCP plate couunt agar 2개6. 하키스틱(spreading) 2개7. 알콜램프, clean bench실험방법■ 시료를 vortex mixer로 믹싱한다.■ 시료를 1.0ml 피펫으로 적당히 끌어올린다음 첫 번째 9.9ml 시험관에 주입한다.■ 시험관을 vortex mixer로 믹싱한다.■ 10ml가 된 시험관에서 다시 0.1ml을 두 번째 시험관에 주입한다.■ 시험관을 vortex mixer로 믹싱한다.■ 세 번째 시험관은 피펫을 1.0ml까지 채운후 1.0ml를 모두 주입한다. (시료가 끝까지 나오지 않으므로 마지막은 입으루 불어서 처리한다.)■ 믹싱한 희석액에서 0.1ml를 채취하여 플라스크에 주입한다. (2개)■ 에탄올에 담겨있는 하키스틱을 꺼내 알콜램프 불꽃에 에탄올을 태운다.(이때 에탄올과 알콜램프에서 뜨거운 열이 나오기 때문에 다치지 않도록 조심한다.)■ 하키스틱으로 플라스크 한쪽 귀퉁이를 찍어 식힌후 골고루 plate에 도말한다.■ 도말한후 plate를 뒤집어서 잘 밀봉한후 37℃ incubator에 두고 48시간동안 배양한다.첫 번째에서 x100 두 번째 x100 세 번째 x10 마지막 x10 으로 x106배 희석되었다.4. Remarks브로모 크레졸 퍼플[ 英 Bromocresol Pulple , 獨 Bromkresolpurpur ]C21H16Br2O5S=540제법 : o-술포벤조산의 무수물을 o-크레졸과 130~135℃로 가열하여 얻어지는 화합물을 아세트산에 용해하고 브롬을 작용시킨다.성질 : 적색결정용도 : ①산염기지시약 : 변색역은 pH 5.2~6.8 산성액은 황색, 염기성색은 보라색, 알칼리 용액은 광2색성을 나타낸다. 층이 얇으면 청색으로, 두꺼우면 적색으로 보인다.②흡착지시약 : 티오시안산이온의 은적정으로 사용된다. 약한 산성 용액중에서 침전에 흡착되면 청록색이 된다.BCP plate count agar의 조성Yeast Extract 2.5gPeptone 5.0gDextrose 1.0gTween 80 1.0gL Cysteine 0.1gAgar 15.0g5. Result우측의 플레이트는 14개의 개체가 나왔다.48시간 배양후에는 다음과 같은 결과가 나왔다. 좌측의 플레이트는 보라색이 주로 보이고 우측은 밝은 노란색을 띄고 있다. Bromocresol purple는 pH indicator로 젓산균이 lactic acid를 생산함에 따라 purple → yellow로 바뀌어야 하지만 좌측은 결과가 변하지 않았다. purple이 남아있는것은 젓산균 증식이 이루어지지않았다는 것을 의미하는데, 아마 오류의 원인은 배지의 오염이나, 하키스틱을 너무 달구어서 아니면 37℃에서 인큐베이팅 하는 동안에 균들이 죽어버린것 같다. 또 플레이트를 밀봉하는 과정에서 틈이 생겨 다른균의 침입이 생겼다고 생각한다. 이같은 오차는 voltex믹싱하는 도중에도 생길수 있다고 생각한다. 우측 플레이트에서는 14cfu/plate만 나왔는데 희석배수 x106으로 1.4x107 cfu/ml가 있었을 것이라고 생각했다.6. Discussion원래 이 실험은 평균적인 젓산균을 하기 위해 duplicate를 3개를해서 평균을 내는것이 맞지만, 실험인원이 많은 관계로 2개씩 하게 되었다. 다행히 2개중 한 plate는 오염이 안되고 결과가 잘 나와줘서 다행이라고 생각한다. 실험하기전 피펫 사용법을 익혀봤는데, 안전피펫충전기를 끼운 피펫으로 연습하니 어려웠다. 교수님께서 시범보이신대로 입으로 하는 방법으로 실행했다. 입으로 희석된 시료를 끌어올리고 검지손가락의 압력을 이용해 천천히 접종하는 기술이 필요했다. 한번에 많이 빠져나갈까봐 너무 세게 쥐어서 하면 팔에 힘이 많이들어가서 힘들뿐 아니라 정확히 0.1ml만 접종하는것은 힘들었다.
1. Experimetal title : Isolation of LAB from Kimchi2. Principle김치완숙시 LAB의 수는 108~9/ml 가 있다. 이 실험은 젓산균의 single colony1) 를 얻기 위해 dilution을 하는 과정이다. 클린벤치에서 Streaking 을 통해 MRS agar에서 배양하는 과정이다.1)분류학상 식물에 속하기 때문에 colony unit을 사용한다.3. Materials & method재료 : 김치, 루프(텅스텐재질), MRS agar(젓산균 배양에사용), 에탄올(손소독), 알콜램프, Petri dish, Clean bench(헤파필터 존재로 미생물을 걸러준다. 자외선 램프로 미생물소독한다.) ,플라스크(김치를 담기 위한)MRS agar**재료 및 성분 (1 L)**Pancreatic digest of gelatin 10.0 gBeef extract 8.0 gDextrose 20.0 gDipotassium phosphate 2.0 gPolysorbate 80 1.0 gSodium acetate 5.0 gAmmonium citrate 2.0 gMagnesium sulfate 0.2 gManganese sulfate 0.05 g**제조방법**52.3 g의 배지가루를 1 L의 멸균수에 넣고 완전히 섞은 후 녹인다.121℃에서 15분간 고압증기멸균한다.제조 배지의 pH는 25℃에서 6.2±0.2로 맞춘다.single colony를 얻기 위해서는 Dilution 의 작업을 거쳐야 한다. 한번 희석시마다 x101만큼 희석된다.※ 단점 : 시간이 많이 걸린다.① 손 소독 : 실험에서 균의 오염을 방지하기 위해 에탄올로 손 소독한다.② 멸 균 : 루프를 불꽃에 달구어 멸균한다.③ petri dish에 식히기 : 멸균된 루프를 페트리디쉬에 찍어서 식힌다.④ LAB 채취 : 루프를 김치에 찍어 LAB를 채취한다.⑤ 접종 : 접종시에는 루프를 눞혀서 손목의 스냅만을 이용해서 접종한다.⑥ 멸균 : 접종후 루프를 다시한번 멸균한다.⑦ 총 3번의 도말을 실시한다.⑧ 도말한 후 배양기에 넣어 배양한다.이때 주의점은 agar쪽을 위쪽 방향으로 해야한다.응축수가 떨어질수도 있다.4. Resultresult : LAB 접종시 주의점은 루프를 너무 세우면 MRS agar가 찟어지고, 모양이 움푹 들어가는것을 보았다. 또 아무리 clean banch가 무균상태라도 LAB의 접종시 잡균의 침입을 방지하기 위해 petri dish를 조금만 열어놓고 작업을 하고, 무엇보다 빠른시간내에 접종하는것이 중요하다고 생각한다.5. Discussiondisscussion : 이번 실험은 일부러 거의 마지막에 했다. 실험방법이 좀 어려워 보이기도 했고, 다른사람들이 하면서 생기는 시행착오들을 관찰했다. 손 소독시에 알콜을 너무 많이 뿌리면 미끄러워서 잡기가 힘들었고, 루프를 너무 세우면 agar가 움푹 파이는 것을 관찰했다. 평평한 부분으로 해야 배지가 상하지 않고 도말할 수 있었다.
1. Experimetal title :Gram Staining of LAB from Kimchi and Catalasing2. Principle염료(dye)를 사용하여 세균의 형태, 배열 크기등의 관찰로 동정이 가능하다. Gram염색법은 세균의 Identification 의 한 방법으로 Gram(+)균과 Gram(-)균으로 나눌수 있다.실험에서 균배양을 위해 사용한 MRS agar 배지는 젓산균 선택배지가 아니라 증식배지이기 때문에 Identification 이 필요하다.Gram(+)균은 Crystal violet의 자주색이 탈색되지 않고, Gram(-)균은 알콜로 탈색처리후 safranin으로 염식을 시켜보면 분홍색으로 나타나는 특징을 가진다.catalase 검사는 호기성균과 혐기성균을 구별하기 위한 방법으로 과산화수소 10배희석액을 흘려보내거품이 일어나면 양성, 거품이 없으면 음성으로 판별된다.3. Materials & method재료 :1) Sample 균주가 배양된 Test tube 2개2) Test tube rack.3) 백금이, Alcohol Ramp4) Carnet pincette.5) Cover glass, Slide glass. 스포이드6) MicroscopeReagents : Crystal violet, Lugol 액, Safranin 용액, Ethanol(95%), 증류수Mathod(Gram 염색법)①도말 -▶ ②고정 -▶ ③염색(crystal violet) -▶④수세 -▶ ⑤건조 -▶ ⑥염색(iodine) -▶ ⑦수세 -▶⑧건조 -▶ ⑨95%알콜로 탈색 -▶ 수세 -▶ 건조 -▶ 대비염색①도말루프를 알콜램프의 불꽃으로 소독한 다음 증류수로 식힌후에 슬라이드글라스에 증류수를 한방울 떨어뜨린다. 이후 도말을 하는데 도말시 주의할점은 루프로 균을 살짝 눈에 보이지 않을정도만 해야한다는 것이다. 많은 량을 도말시는 현미경관찰시 균들이 뭉쳐져 보이게 된다.또 다른 주의점은 도말한 면을 잘 기억해야 한다. (세척시 지워질 경우가 생길수 있다.)②고정도말을 완료하면 건조시키는 작업을 거친다. 슬라이드를 잡고 알콜램프 불꽃위를 20~30번 정도 왕복시키면 수분들이 증발해서 고정된다.③염색crystal violet용액으로 도말한부위에 한방울정도 떨어뜨린후 30초에서 1분간 염색한다.④수세흐르는 물에 뒤집어서 수세한다. 도말한 면을 수세시키면 균들이 떨어져나가 현미경관찰시 나오지않기 때문에 뒤집어서 수세한다.※너무 많이 수세하여 균을 흘려보내지 않도록 주의한다.⑤건조물기를 휴지로 닦아내고 슬라이드를 공기중에 흔들어 물기를 건조시킨다.⑥염색iodine액으로 30초~1분간 염색한다. iodine액의 사용 이유는 염색액의 세포벽 결합시 결합의 강화목적을 가진다.⑦수세흐르는 물에 뒤집어서 수세한다. 도말한 면을 수세시키면 균들이 떨어져나가 현미경관찰시 나오지않기 때문에 뒤집어서 수세한다.※너무 많이 수세하여 균을 흘려보내지 않도록 주의한다.⑧건조물기를 휴지로 닦아내고 슬라이드를 공기중에 흔들어 물기를 건조시킨다.⑨95%알콜로 탈색알콜로 탈색시킨다. 10~30초사이가 적당하며, 실험에서는 비커에 담가 탈색시켰다. 탈색은 Gram(-)균의 보라색으로 염색된 것을 제거하는 역할을 한다.※너무 오랫동안 탈색시 Gram(+)균의 색도 탈색되어 Gram판정을 할수 없게된다.수세흐르는 물에 뒤집어서 수세한다. 도말한 면을 수세시키면 균들이 떨어져나가 현미경관찰시 나오지않기 때문에 뒤집어서 수세한다.건조물기를 휴지로 닦아내고 슬라이드를 공기중에 흔들어 물기를 건조시킨다.대비염색safranin액으로 대비염색을 시킨다. 이때 Gram(-)균은 분홍색으로 염색된다.젓산균 염색을 마친 슬라이드이다. 가운데 진하게 보이는 부분은 도말을 균이 안보일정도만 해야하는데, 약간 두껍게 돼서 균들이 뭉쳐저 보인다. Gram(+)균인 젓산균을 배양해 Identification 한것이므로 보라색으로 염색되서 보이고 긴 막대기형태인 간균의 형태를 띄고 있다.Mathod(Catalase)Catalase실험은 균이 혐기성균인지 호기성균인지 판별하기 위한 실험이다. 실험방법은 간단하다.① 움푹파인 슬라이드글라스에 도말② 과산화수소 첨가후 거품반응을 관찰한다.-젓산균은 통성혐기성균이기 때문에 반응하지 않았다.4. RemarksGram염색 : 덴마크 의사 Gram에 의하여 창안된 세균 특수 염색법으로 세균의 분류상 주요한 지표가 되고 있다. 이 염색법은 일종의 rosanilin 색소 즉 crystal violet, methyl violet, 혹은 gentian violet으로 염색시켜 옥도로 처리후 acetone 이나 알콜로 탈색시키는 것이다. 탈색도지 않고 청 혹은 청자, 보라색으로 염색되는 것은 Gram양성균이고 탈색되어 neutral red, safranin 또는 carbolic fuchsin등의 대비염색이 되는것은 Gram 음성균이다.Gram 양성균은 ①Neisseria 이외에 대개의 구균 ②포자형성의 대부분의 세균 ③방사선균 ④효모등이다. Gram 음성균은 ①대부분의 장내세균(대장균, Salmonella균, 적리균, Chorella균), ② Neisseria ③Spirochaeta ④Protozoa등이다.Gram 염색성은 고정적인 것이 아니고 배양시기와 배지의 pH, 기타 여러조건에 따라 변한다. Gram 양성균은 젊은 세포에서 강하게 염색되고 배양시간이 길어지면 음성에 가까워진다.B. subtilis 는 수시간 배양으로도 Gram 음성을 나타낼 때가 있다. 그러나 Gram 음성이 양성으로 변하는 것은 거의 없다.염색순서세포벽에서의 반응그람양성균그람음성균crystal violet세포가 보라색으로 착색됨세포가 보라색으로 착색됨iodine세포벽이 요오드 복합체를 형성함알콜세척세포벽 복합체를 알코올이 투과하지 못하므로 보라색이 유실됨세포벽에서 지방질이 추출되면서 복합체가 씻겨져 나와서, 착색된 것이 유실됨사프라닌세포의 보라색이 그대로 유지됨세포벽이 사프라닌의 붉은색에 의해 착색됨 Gram(+)과 Gram(-)균의 염색시 차이점Gram 염색법의 종류와 방법Huker 의 변법(modification)Kopeloff-Berman의 변법1) 도말, 건조, 고정은 단염색법에서와 같이 한다.※슬라이드를 부분으로 나누어 첫 세 부분에는 세균을 각각 도말하고 마지막 부분에는 세균을 혼합하여 도말한다.2) Hucker crystal violet 액을 도말표본에 떨어뜨려 1분간 염색한 후 물로 씻어낸다.3) Gram`s iodine 액으로 1분간 처리하고 물로 씻어낸다.4) 95% 알코올로 20~30초 탈색한 후 물로 씻어낸다.5) Safranin 액으로 20초간 대조염색(counter-stain)한 후 물로 씻어낸다.6) 공기중에서 말린후 경검한다.1) 도말, 건조, 고정은 단염색법에서와 같이 한다.2) Kopeloff-Bermann gentian violet 으로 5분간 염색하고 염색액을 쏟아버린다.3) Kopeloff-Bermann iodine액으로 2~3번 씻어내고 다시 가득 부어 2분간 둔 후 쏟아버린다.4) 100% acetone으로 약 30초간(염색액이 나타나지 않을 때 까지)간 씻어낸다.5) 그대로 공기 중에서 건조시킨다.6) 대조염색( counter-stain)으로 safranine액을 30초~1분간 처리한후 물로 씻어낸다.7) 공기 중에서 말린후 경검한다.※대조염색(counter-stain)하기 전에는 절대로 물로 씻어서는 안된다.Gram 양성균 vs Gram 음성균그람염색은 각 세균의 세포벽을 이루고 있는 성분과 구조가 다르다.그람양성세균의 경우 세포벽이 두꺼운 peptidoglycan layer와 풍부한 teicoicacid 로 이루어져 있어서 organic decolorizer(탈색제)로 탈색시 쉽게 탈색되지 않으며 따라서 염색액 crystal violet이 계속 세균내에 남아있어 보라색으로 염색된다.그람음성세균은 peptodoglycan layer가 단일층으로 되어 있으며 세포벽이 지방성분이 풍부한 lipopolysaccharide(LPS)로 이루어져 있어 organic decolorizer(탈색제)에 의해 crystal violet이 쉽게 탈색되며 따라서 대조 염색액인 safranin O로 염색되어 붉은색을 나타낸다.현미경의 구조와 사용법** 현미경의 검경법일반검경법1)자연광선을 사용할 때에는 직사광선을 피한다. 북향창 밑에 현미경을 놓고 보는것이 좋다. 인공광선을 사용할 때에는 엷은 필터를 광원앞에 삽입한다.2)경통의 신장관이 있는 현미경은 신장관을 빼서 그 현미경이 지정하는 표준경통 길이로 맞춘다.3)접안렌즈와 대물렌즈는 처음에 저배율의 것으로 맞춘다.4)현미경을 들여다 보면서 반사경을 돌려 시야의 전면에 균일하게 밝도록 조절한다. 반사경은 저배율이면 평면경을, 고배율이면 오목면경을 각각 사용한다. condensor를 사용하는 보통의 경우에는 평면경을 사용한다.5)condensor는 끝까지 올려서 사용하는것이 원칙이다.6)현미경 표본은 재물대 위에 놓고 렌즈 중앙에 피검체가 오도록 맡춘다.7)재물대 옆으로 들여다 보면서 대물렌즈가 cover glass에 닿지 않도록 조심하여 될수 있는대로 경통을 내려 접근시킨다음 접안렌즈를 들여다 보면서 반대로 경통을 내리면서 피검체상을 찾게 되면 대물렌즈와 표본을 파손하는 수가 많으므로 절대로 반대 조작을 해서는 안된다.8)유침하여 쓸때에는 경통을 올린다음 표본의 cover glass위에 cender oil을 한방울 떨어뜨려 7)번의 조작을 한다. 피검체상이 나타나면 미동나사를 돌려서 명확한 상을 맺게 한다.* 현미경의 구조와 취급법1) 현미경은 보통 나무상자에 넣어서 습기나 먼지를 피하여 보관한다2) 현미경은 오른손으로 경구를 잡고 왼손으로 경각을 받쳐서 운반한다. 현미경을 책상위와 실험대 위에 놓을 때에는 경각의 바닥 한쪽을 책상위에 접촉시킨 다음 조용히 놓는다.3) 접안렌즈는 경통 내부에 먼지의 침입을 막기 위하여 현미경을 쓰지 않을 때도 항상 꽃아둔다.4) 경통등의 금속부분이나 렌즈는 붓으로 털어가며 가제로 닦는다.5) 렌즈나 경면에는 직접 손을 대지 않는다.