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실험동물의 이용과 발전방향 평가A좋아요

목 차서 론Ⅰ. 실험동물이란?1. 실험동물의 정의 ............. 22. 실험동물의 유래 ............. 23. 실험동물의 가치 ............. 24. 실험동물의 선정 ............. 45. 실험동물의 분류 ............. 66. 실험동물의 특징 ............. 77. 실험동물의 한계점 .......... 7본 론Ⅱ. 실험동물의 이용1. 종류 및 특징 . 92. 질환모델동물 28Ⅲ. 실험동물의 관리1. 실험동물의 품질관리 ..... 292. 실험동물의 위생관리 ....... 323. 사고대책 ...... 324. 실험동물의 관리와 사용에 관한 경우 차대와의 교배는 양친 중 후대쪽과 행할 것. 단, 형매교배와 친자교배는 혼용해서는 안 됨.폐쇄군(Closed colony)5년 이상 외부로부터 종축동물(seed animal)을 도입함이 없이 일정한 집단 내에서만 번식을 계속하여 상시 실험공시동물의 생산이 이루어지고 있는 군, 혹은 원래는 근교계 유래이나 근친교배를 중지한 군변이종(Mutant strain)유전자 기호로 표시할 수 있는 유전자형을 특성으로 하고 있는 계통 및 유전자 기호로 명시할 수 없어도 도태선발에 의해 특정의 유전자 형질을 유지할 수 있는 계통교잡군(Hybrid colony)계통 혹은 품종간의 잡종으로 실험동물은 주로 F1 hybrid가 사용된다.잡 종(Mongrel)유전적인 컨트롤이 고려되지 않은 동물로서 야생동물이나 개, 고양이 등이 이에 속한다.(2) 미생물학적 요인에 의한 분류군정의비고미생물의 상태작출방법유지무균동물(Germ free animal)무균 처리하여 얻어진 또는 검출해 낼 수 있는 모든 미생물, 기생충을 가지지 않은 동물검출 가능한 미생물이 없다.원래는 제왕절개자궁절단 유래Isolator정착균 동물 (Gnotobiote)특수하게 사육되어 보유하고 있는 모든 종류의 미생물들을 인위적으로 정착시킨 동물갖고 있는 미생물이 명확하다.무균동물에 명확히 동정된 미생물을 정착시킨다.Isolator특정병원체 부재동물 (Specific pathogen free animal)미생물을 보유하고 있으나 특별히 지정된 병원성 미생물이나 기생충이 없는 동물갖고 있지 않은 미생물이 명확하다.무균동물정착균물에 미생물 자연정착Barrier system일반동물 (Conventional animal)미생물 컨트롤이 전혀 되지 않는 동물미생물상태 불명Convent-ional room6. 실험동물의 특징동물실험이나 생물검정은 물리화학실험, 물리화학검정과는 내용면에서 매우 다르다. 즉 동물실험이나 생물검정은 실험이나 검정의 수단으로서 생명을 유지하면서 먹고, 마시고, 움직이는, 즉 모든 동물의 생활을 해가고르몬은 암컷에서 에스트로겐과 프로게스테 론, 수컷에서 안드로겐의 분비를 촉진한다. 프로락틴은 임신기간동안 비유와 난소발육을 촉진한다. 암 컷에서는 질개구 때 질 상피의 각화와 같은 estrogen-dependent changes가 빠르면 24~28일에 일 어날 수 있으며 수컷은 성성숙이 약간(약 2주) 늦다.b. 발정주기마우스는 다발정동물로 주기는 4~5일이다. 질구의 개구와 외음부의 팽윤은 발정전기와 발정기의 징후이다. 나이가 들어감에 따라 발정주기가 일정치 않아지며, 계절과 영양적 요소, 그리고 유전적 배 경도 발정주기에 영향을 준다. 마우스에서 후분만 발정은 출산 후 약 14~24시간 정도 보인다.배란이 매 발정마다 수반되지는 않으며 발정과 배란이 매번 일치하지는 않는다. 왜냐하면 발정은 gonadal hormones에 영향을 받고 배란은 gonadotropin의 영향을 받는다. 발정과 배란의 주기성은 광주기의 주간리듬(diurnal rhythm)의 지배를 받는다. 교배, 발정, 배란은 보통 야간에 일어난다.발정은 그룹사육에 의해 동기화(synchronized)되며 짝지은 후 3일에 대부분의 암컷이 발정이 일어 나고 다음 발정은 11일에 일어난다. 후분만 발정을 이용하지 않을 경우 발정주기는 이유 후 2~5일 후에 시작된다.c. 교배교배의 확인은 질전(vaginal plug)의 유무로 판정할 수 있다. 질전은 질구의 경부로부터 외음까지 차 있게 되며 24시간까지 지속된다.d. 임신기간임신기간은 통상 21일이나 후분만발정, 수유 등의 이유로 인해 늘어날 수도 있다, 수유는 착상지 연을 유도하기 때문이다. 계통에 따라 12~13일가지 연장되기도 한다. 암컷의 가임기간은 통상 1년 정도이며 산자수는 10~12마리 정도이다.e. 생후 발달 및 이유수유기간은 약 3주(21일;10 ~12g)이며, 유즙 생산량은 출산 후 12일까지 증가하다가 그 이후부터 는 감소한다. 하렘교배(harem mating)의 경우 새끼들은 여러 마리의 암컷으로부터 젖을 먹기도 한다.새끼 0g이며 생시체중 75~150g이며집단 생활을 한다. Cage에서는 구석에 모여 있거나 중앙 및 벽 주변에 도는 일이 많다. 배설물도 Cage의 양 구석에 쌓아 올리는 경향이 강하며 피모가 잘 빠진다.특히 행동에 제제를 가하면 그 제제에 대한 서로 다른 반응 소리를 지른다b. 기니픽 보정특별히 알레르기 체질을 가진 동물이므로 실험 및 사육 시 알레르기 체질을 가진 사람은 실험복과 1회용 장갑을 착용하여 보정하여야 한다.어린 경우에는 양손으로 감싸듯이 하여 들어 올린다 성숙한 경우에는 왼손에 덮어씌우듯이 하여 엄지와 나머지 네 손가락으로 감싸 집어 올린다c. 사육 환경기니픽 케이지는 체중 350g 한 마리당 바닥면적이 적어도 651.45㎠ 이하, 높이는17.8㎝는 되어야 한다. 케이지 재질은 스텐레스, FRP등이 이용된다. 기니픽 케이지는 상당히 비싸고 적당한 케이지는 없어 어릴 경우에는 일반 Rat케이지에 사육하고 큰 경우에는 토끼 케이지를 이용하고 있다.온도는 18~26℃이며 평균 22±2℃, 습도는 64~79% 사이에 들어야 한다.기니픽은 깨끗하고 영양가 있는 물과 사료를 자유급이하며 하루에 사료 20~30g/일과 물 80~145ml 를 먹는다.d. 해부 생리학적 특징기니픽 큰 특징은 비타민C가 체내합성이 안되므로 폐사하는 경우가 많아 실험동물 시설에서 사육 시에는 괴혈병이 발증하므로 따로 비타민 제제( 야채이나 비타민 C 제제)를 급이 해야 한다.다. 번식a. 성성숙성숙기는 ♂ 60~70일 ♀ 40~50일 되며 다른 설치류에 비하여 현저히 길다. 특히 암컷의 경우에는 성성숙이 빨라 암컷은 생후 20일 정도에 교미하는 경우가 있어 20일령에 이유와 동시에 암수 구별 하여 나누어 사육해야 한다. 발정주기는 13~20일 정도(평균 16일)로서 길다. 비발정기에는 질이 닫 혀 있으며 발정기는 야간의 약 15시간으로 발정개시 후 약 10시간 후 배란이 일어난다.b. 교미기니픽은 다른 설치류에 비해 발정주기가 길고, 야간에 약 15시간 정도로 한정되어 있으며 후분만며 우측반 점막면의 약 2/3를 차지하고 유문선부가 여기에 연속되어있으며. 속 이 비여 있는 위에서는 분문선부, 위저선부의 경계는 위의 외면에서 보아도 각각 대만에서 소만으로 향하는 얕은 홈이 나타난다. 돼지의 신장중 좌신은 약간 전방에 위치하며 이동성이 풍부하므로 때 로는 훨씬 뒷쪽으로 후퇴하여 골반강 입구 근처에 있는 경우도 있고 드물게 전혀 좌신이 없는 수도 있다. 우신은 간장과 접촉하지 않으므로 간장 미상엽에 신압흔이 나타나지 않는다.다른 가축에서는 돼지의 경우와 반대로 좌신이 우신보다 조금 후방에 위치한다. 생식기를 보면 수 돼지 생식기 중 고환은 퍽 큰 편이며 타원형이고, 정관은 뚜렷한 팽대부를 형성하지 않으며, 전립선은 전립선체와 전파부로 구성되어 있다. 요도구선은 대단히 크고 치밀하며 약간 타원형으로서 골반뇨도 후위 2/3부에 위치한다.라. 번식a. 성성숙일반암퇘지의 성성숙월령은 5-7개월이며, 이때 생식기의 변화가 일어나는데, 자궁무게는 72%, 길 이는 58%, 난소무게는 32%, 난관길이는 11%, 질의길이는 9% 증가한다. 그리고 수퇘지의 성성숙 월령은 5-8개월이며 성성숙에 영향을 미치는 유전, 환경, 영양요인 중 고환발육에 적정한 온도는 약20℃이다. 그러나 Miniature pig의 성성숙월령은 4개월로 다소 빠르다.b. 발정주기돼지의 발정주기는 19-20일로 ,발정전기(preestrus), 발정기(estrus) 발정후기 (metestrus), 발정휴 지기(diestrus)로 나뉘며 발정증후로는 외음부가 붓고, 불안, 초조해하는 행동으로 귀를 쫑긋 쫑긋 뒤 로 눕히고 무질서하게 삭뇨한다. 이때 채식량도 감소한다. Miniature pig의 발정주기는 21일이다.c. 임신기간일반 암퇘지나 Ministure pig 모두 임신기간은 114일이며, 이 시기의 암퇘지는 성질이 온순해지고, 식욕이 왕성해진다. 또 배가 팽만해지면서 요각부위가 음푹 들어가고, 유두 끝이 외측으로 벌어지는 현상들이 나타난다.마. 계통별 특성a. 버크셔(Berkshi 한다.

자연과학| 2003.11.26| 37페이지| 3,000원| 조회(1,710)

생명공학, 동물, 실험동물

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[극예술 감상문] 판소리 심청가 감상문 평가A좋아요

판소리 완창. 솔직히 난 완창이 무엇인지 잘 몰랐다. 상식이 부족한 것도 있고, 그동안 국악에 무관심했던 것도 사실이다. 예전에 교양수업 시간에 국악공연을 보러 갔었던 것이 처음이었다. 우리의 것인데도 그동안 무관심했었다는 것은 참으로 부끄러운 일이 아닐 수 없다. 공연을 보러 가기 전부터 얼마나 오래할까, 지겹지는 않을까, 행여 졸지는 안을까 등등 부끄러운 생각들을 가지고 갔었다. 또 공연장에 도착했을 때 자리가 많이 비지 않을까 걱정을 했었다. 그러나 그것은 기우였다. 많은 사람들이 우리의 소리를 들으러 온 것이다. 보통 판소리하면 으레 나이가 많으신 분들만 오시는 줄 알고 있었는데, 할아버지들뿐만 아니라 교복을 입은 어린 학생들도 여럿 있었다. 또다시 그동안 나의 우리 것에 대한 무관심을 반성했다. 오늘 공연의 제목은‘심청가’였다. 심청가는 효가 그 주제이지만, 그 이면에는 유.불교의 틈바구니에서 고민하는 인간상을 부각시키고 있는 작품이라고 고등학교 수업시간에 배운 기억이 난다. 관람석에 앉아서 팜플렛을 읽어보았다. 심청가 전문이 나왔는데 정말 많은 분량이었다. 이것을 다 어떻게 외웠을까하는 어리석은 생각이 들게 할 정도로 많은 분량이었다. 심청가 내용이야 익히 알고 있었지만 판소리로는 어떨까 매우 기대감에 부풀어 있었다.드디어 공연이 시작되었다. 무대로 해설자 한 분이 나오셔서 오늘의 공연 제목인 심청가와 연창자, 고수분들을 소개해 주셨다. 그 중에서 재미있는 일화가 있었다. 연창자분은 원래 가야금을 전공하셨다고 했다. 그러나 대회에 참가했다 낙방을 했는데 판소리 부문에 출전했다가 낙방한 사람들에게는 힘내라는 위로의 말이 무척 많이 있었는데, 가야금을 전공한 자신에게는 한마디 위로를 해주는 사람이 없어서 어린 마음에 상처를 받아 판소리로 전공을 바꾸었다고 했다. 나를 포함한 관객들 모두 이 말을 듣고 박장대소했다. 정말 특이한 계기로 판소리를 시작했구나하는 하는 생각이 들었다. 처음에는 목소리가 가늘고 성량 또한 부족해서 많은 어려움을 겪었다고 했다. 그러나 꾸준한 노력으로 그것을 극복했다고 하는 말을 들으니, 절로 존경심이 생겨났고 나는 어떤가 반성하는 계기가 되었다. 마지막으로 함께 추임새를 연습했다. 다른 공연도 마찬가지이겠지만, 판소리도 관객들이 호응을 해주어야 연창자도 흥이 나서 더욱 감정에 몰입할 수 있을 것이다. 처음으로 해보는 추임새에 약간은 멋쩍은 감이 있어서 쉽게 소리가 나오지 않았다. 그러나 계속 연습을 하니 어느 정도 비슷하게 나왔고 자심감도 생겼다. 드디어 공연이 시작되었다. 무대에는 조그마한 상과 술병처럼 생긴 것과 그릇이 있었고, 뒤로는 병풍이 둘러져 있었다. 은은한 조명과 함께 참으로 포근한 느낌이 들었다. 연창자분은 예상외로 젊은 분이었고 가냘프게 보여 과연 3시간 이상 되는 이 완창공연을 끝까지 할 수 있을까 의구심이 생길 정도였다. 그러나 공연이 시작되고 나서 바로 그 생각은 사라졌고 그분의 힘있는 소리에 귀를 기울이게 되었다. 그 성량은 관객을 앞도 하기에 충분하였다. 약간은 쉰 듯한, 가라앉은 목소리로 아니리를 시작했다. 심봉사의 내력과 곽씨 부인이 봉사 가장(家長)을 돌보기 위해 고생을 하는 대목까지 아니리를 하더니 갑자기 엄청나게 힘이 있는 목소리 '품파는 대목'을 부르는데, 매우 박력 있고 몸짓도 컸고 팔의 놀림이나 손짓, 표정 등 모든 부분에서 나의 마음을 빼앗았다. 공연이 진행되면서 객석 중간중간에서‘그렇지’‘잘한다’‘얼쑤’‘좋다’등의 소리가 터져 나왔다. 객석의 청중들이 추임새를 넣는 것이었다. 물론 나도 분위기에 휩쓸려 같이 추임새를 했다. 연창자와 다른 관객과 내가 모두 하나가 되는 기분을 느꼈다. 심청이를 갖는 태몽을 풀이하는 대목과 심청이 태어날 때의 기쁜 장면에서는 중중모리의 빠른 박자로 연창자의 신나는 소리에 관객 모두가 즐거워하더니, 곽씨 부인이 산후별증(産後別症)으로 죽는 대목에 가서는 진양조의 슬픈 느낌이 그대로 전해져왔다. 또한 심봉사가 땅에 주저앉아서 대성통곡하는 대목에서는 연창자가 똑같이 땅에 주저앉아 대성통곡을 하는데, 객석은 숙연해지고 나의 마음도 약간은 무거워졌다. 심봉사가 젖동냥해서 키운 심청이 자라 심봉사를 봉양하고 장승상댁 양녀로 들어갔다. 심청이 장승댁에서 돌아오지 않자 걱정이 된 심봉사가 마중을 나갔다가 물에 빠져 허우적거리고 있던 것을 중이 구해주었다. 그 중이 심봉사에게 공양미 3백석을 시주하여 부처님께 불공을 드리면 눈을 뜬다는 말에 무턱대고 약속을 해버리는 대목에서는 성급한 심봉사를 원망하기도 했다. 이 말은 들은 효성 지극한 심청이 뱃사공들에게 팔려가 인당수에 빠지는데 계속 분위기가 무거웠다. 슬픈 대목들만 나오다가 심청이가 용궁에서 연꽃으로 환생해서 황후가 되는 대목에서는 나를 포함한 관객들의 마음이 조금씩 풀리는 것 같더니, 뺑덕어멈이 나오면서부터 갑자기 분위기가 밝아졌다. 특히 뺑덕어멈의 행실을 소개하는 잦은모리 부분에서는 나를 포함해 모든 관객들이 정말 파안대소를 했다. 절로 어깨춤이 나는 부분이었다. 또한 뺑덕어멈과 맹인잔치에 가는 과정에서 생기는, 예를 들면 주막에서 잠을 자는데 뺑덕어멈과 황봉사가 야반도주를 하는 부분 등 정말 많은 웃음을 자아냈다. 마지막에 심황후가 벌린 맹인잔치에서 심봉사와 심청의 만남과 함께 눈을 뜨게되는 대목에서는 환호성과 함께 모두들 웃게되고 기뻐하였다. 특히 모든 맹인들도 함께 눈을 뜨는데 오직 한사람만이 눈을 뜨지 못했다. 바로 뺑덕어멈과 야반도주를 한 황봉사였다. 그 부분은 정말 압권이었다. 도저히 나오는 웃음을 참을 수 없었다. 이렇게 해피엔딩으로 심청가는 막을 내렸다. 관객들 모두 일제히 우레와 같은 박수를 보냈다. 정말 기대 이상의 공연이었다. 공연도중 연창자가 목이 마른지 소품인줄로만 생각했던 상 위에 있던 술병에서 물을 따라 마시는 광경도 여러 차례 있었다. 쉬지 않고 계속 소리를 하려면 정말 힘이 들 것이다. 그럴 때마다 우리들은 박수로써 격려해주었다. 힘내라고‘파이팅’하고 외치는 사람도 있어서 모든 이의 웃음을 자아내기도 했다. 1부가 끝나고 잠깐 쉬는 시간이 있었는데 2부가 시작되고서도 들어오지 않은 사람들이 여럿 있었다. 그냥 가버린 것이다. 연창자분도 웃으시면서 가신 분들이 계신 것 같다고 말을 할 땐, 기분이 씁쓸했고 내가 간 것도 아닌데 열심히 공연을 하고 계신 연창자분과 고수분께 미안한 마음이 들었다. 이것이 만약 유명한 대중가수의 콘서트였다면 과연 도중에 갔을까 하는 생각도 들었다. 처음으로 들은 판소리 완창이었지만 무척 즐거운 시간이었고 우리 것의 소중함을 새삼 깨닫는 계기가 되었던 것 같다. 추임새도 20회 가량 한 것 같다. 비록 많이 하지는 못했다. 다음에 또 기회가 된다면 오늘보다 더욱 적극적으로 추임새를 할 수 있을 것 같다. 사실 오늘 처음 해보는 것이라 어색했던 것이 사실이다. 그러나 추임새를 통하여 모두 하나가 된 느낌은 정말 잊을 수 없을 것이다.

독후감/창작| 2001.12.30| 2페이지| 1,000원| 조회(1,049)

판소리, 국악, 심청가, 완창

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SDS-PAGE

SDS-PAGE1. Principle전기영동법이란 하전된 단백질의 전장 내에서의 이동에 기초한 방법으로 단백질을 분리하는 중요한 방법이다. 장점은 단백질이 분리될 뿐 아니라 눈으로 볼 수 있으므로, 혼합물 중의 단백질의 수 또는 특정 단백질의 조제 순도를 연구자가 재빨리 예견할 수 있는 것이다.전기영동에 있어서 전기장에서의 단백질의 이동 속도(v)는 전기장의 세기(E), 단백질의 실전하(z), 그리고 마찰계수(f) 등에 좌우된다. 즉 v = {{Ez} over {f}·····(1)순도와 분자량을 추정하는데 일반적으로 이용되는 전기영동법은 계면활성제인 SDS(sodium dodecylsulfate)를 사용한다. SDS는 대부분의 단백질과 아미노산 2개의 잔기당 약 1분자의 SDS의 비율로 단백질의 분자량과 거의 비례하는 양으로 결합한다. 결합한 SDS는 큰 (-)net charge를 띠게 되면, 단백질 고유의 전하를 의미없게 한다. 또한 SDS가 결합을 하면 단백질이 본래의 고차원구조가 변화되어 대부분의 단백질은 매우 비슷한 형으로 되며, 매우 유사한 질량 당의 전하비를 가지게 된다. SDS-단백질 복합체의 음전하는 대부분 SDS에 기인하며, 단백질의 크기에 비례하여 전하량과 마찰계수가 동시에 증가하므로 (1)식에 의해전기이동도는 거의 동일하다. 그러나 겔의 체효과에 의해서 단백질은 크기 증가에 따라 전기이동속도가 감소한다. 따라서 SDS 존재 하에서의 전기영동은 보다 작은 폴리펩티드를 보다 빠르게 이동시키도록 원래의 질량에 의해서 단백질을 분리하는 것이다. 전기영동을 한 후에 단백질은 젤 자체에는 결합을 하지 않고, 단백질에 결합하는 쿠마시 블루와 같은 색소로 염색해서 볼 수 있게 한다. 이러한 처리를 하면 띠들이 나타나는데 방사능으로 표지된 단백질은 겔 위에다 한 장의 X-선 필름을 얹어 놓음으로써 자동방사선사진법으로 검출할 수 있다. 이미 알고 있는 분자량을 가지고 있는 단백질이 겔 내에서 이동하는 위치와 비교할 때 알지 못하는 단백질의 위치는 그 분자량의 대단히 좋은 척도가 된다. SDS-PAGE는 신속하고 예민하여 분리력이 매우 크며 전기이동을 시작해서 착색하는 데까지 하루쯤 걸린다.2. Apparatus & Reagent1)sample(sarcoplasmic protein, myofibrillar protein 각 2개)- buffer(브로모페놀블루, SDS, glycerol 함유) 첨가{6-3(sarco) 2.58㎕6-4(s) 2.12㎕1-9(s, 정상육) 3.49㎕7-15(s, PSE육) 4.21㎕6-3(myo) 5.58㎕6-4(m) 6.85㎕1-9(m, 정상육) 4.49㎕7-15(m, PSE육) 6.00㎕2)평판 겔 전기이동 기구3)직류공급 장치4)micropipette5)Polyacrylamide monomer solution6)Tris buffer(pH 8.8, pH 6.8)7)10% SDS8)Ammonium Persulfate9)증류수10)TEMED(Tetramethyl Ethylenediamine)11)Coomasie blue3. Procedure & Method1)유리판을 alcohol로 닦고 spacer에 바세린을 바른 후 평판 겔 전기영동기구의 두 유리판 사이의 양쪽 가장자리에 spacer를 끼우고, 유리판 사이의 아래 틈새는 parafilm을 부착한다.2)Separating gel의 성분들을 섞어서 유리판 사이에 부을 수 있는 적당한 부피의 혼합액을 만든다.10% Separating gel(12ml)(Polyacrylamide)monomer solution 4mlTris buffer(pH 8.8) 3ml10% SDS 0.12mlDW 4.8mlAmmonium Persulfate 80㎕TEMED 6㎕3)혼합하는 즉시 유리판 상단으로부터 2cm 가량만 남겨 놓고 유리판 사이의 공간을 Separating gel 용액을 채운 후 comb을 꽂는다. Separating gel의 중합이 완료된 후에 겔 상층에 남은 용액을 제거한다.4)다음의 용액들을 섞어서 Stacking gel을 만든다.(Polyacrylamide)monomer solution 4mlTris buffer(pH 8.8) 3ml10% SDS 0.12mlDW 4.8mlAmmonium Persulfate 80㎕TEMED 6㎕5)혼합후 즉시 Stacking gel을 Separating gel 위에 흘려 붓는다.6)upper buffer chamber 위에 glass를 고정하고 lower buffer chamber에 끼운다.7)Stacking gel의 중합이 완료된 후에 comb을 서서히 잡아당겨 뽑고, well을 증류수로 씻어서 남아있는 (Polyacrylamide)monomer solution을 제거한다.8)전류가 잘 통하도록 electrophoresis buffer를 유리판 사이에 채운다.9)comb이 있던 자리를 확인하기 위해 sample buffer를 소량 넣은 후 electrophoresis buffer를 넣어서 세척한다.10)sample buffer 1.5㎕을 각각 넣는다.11)upper buffer chamber와 lower buffer chamber에 electrophoresis buffer를 채운다.12)직류공급 장치의 음극을 upper buffer chamber에, 양극을 lower buffer chamber에 각각 연결한 다음, 10mA의 전류를 흘려주고 염료가 겔 하단에 도달하였을 때 전원을 끈다.13)유리판을 전기이동장치 본체에서 분리한 다음, 한 쪽 유리판을 겔에서 떼어낸다. 겔을 Coomasie blue 용액에서 흔들어주면서 30분간 착색시키면 단백질들의 band가 보이게 된다.14)출발점으로부터 각 단백질 band까지의 거리를 재어서 분자량의 대수값을 표준단백질들의 이동거리에 대해서 작도한다.15)미지 단백질의 분자량을 구한다.4.Discussion전기영동에 사용되는 겔은 그 농도가 높을수록 더욱 작은 분자량의 단백질을 분리할 수 있다고 한다. 또한 겔을 유리판 사이에 넣을 때 거품이 생기지 않도록 주의를 해야 한다.

자연과학| 2001.11.22| 3페이지| 1,000원| 조회(1,602)

전기영동, SDS, SDSPAGE

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지방산패도측정(TBA method) 평가A+최고예요

지방 산패도 측정- TBA Method1. Principle지방의 산패 : 유지의 불포화 지방산이 열이나 광선, 금속, 미생물 등에 의해 산화되어 저급의 알데히드, 케톤, 알코올, 탄화수소 등을 생성하여 악취를 발생하여 맛과 냄새의 저하, 다량 섭취 시 노화, 발암작용 등의 중독현상을 일으킨다..TBA method유지나 유지식품에 있어 산화시 생성되는 carbonyl화합물 중 malonaldehyde의 양을 나타내는 수치로서 지방의 산패도를 측정하는 척도이다. 특히 육류의 지방질의 산패 여부 판정에 이용된다. 이외에 유지의 산패도를 측정하는 것은 carbonyl value, POV(peroxide value)가 있다.2. Apparatus & Reagents1) 시료 (등심 : 도축 후 냉장보관 21일 후 냉장해동과 실온해동, 햄 : 6개월 동안 -50℃ 에서 냉동보관 하던 것을 냉장해동과 실온해동)2) TBA(2-thiobarbituric acid) 용액3) PCA(Perchloric acid) 용액4) BHA 용액5) 균질기(polytron)6) Spetrophotometer7) chemical balance8) 비이커, 삼각플라스크, 깔때기9) pipette, 여과지10) 증류수3. Procedure & Methods1) 비이커에 PCA 용액 18㎖ 넣음2) BHA 용액 200㎕ 첨가3) 시료 2g 첨가4) 균질 - 5초씩 3회5) 균질시킨 용액을 filtering6) TBA 용액(2㎖)과 반응(TBA가 malonaldehyde와 반응하여 발색)7) incubation8) 17hr 후 흡광도 측정(531nm)4. Results{구 분Optical Density (O·D 값)햄(실온 해동)0.17510.17050.4343등심(냉장 해동)0.30440.23090.2516※냉장 해동시킨 햄과 실온 해동시킨 등심은 filtering하는 과정에서 PCA용액의 농도가높아 거름종이에 구멍이 뚫려 시료가 삼각플라스크 안으로 떨어져 실험에서 제외하였다.5. Discuss째 샘플을 filtering하는 과정에서 시료의 일부가 삼각플라스크 안으로 떨어져 O.D값이 높게 나온 것 같다. 혹은 흡광도를 측정하는 과정에서 세 번째 샘플을 spectrophotometer에 넣는 과정에서 지문이 묻었을 경우도 생각해 볼 수 있다. 햄의 경우 가공식품이기 때문에 6개월 동안 냉동 보관했음에도 불구하고 MA값이 4.0이하로 나와 식품으로써의 가치가 있었다. 여기서 우린 가공 육제품의 유통기한이 상당히 길다는 것을 알 수 있었고 육제품의 유통기한을 연장할 수 있는 방법 중의 하나가 가공하는 것이란 것을 알 수 있다. 만약 냉장 해동시킨 햄의 실험결과를 추측해본다면 그 결과는 실온 해동의 MA값보다 낮게 나왔을 것으로 생각된다. 그 이유는 실온에서보다 냉장보관상태가 음식물이 산패되는 정도가 더 느리기 때문이다.냉장 해동시킨 등심의 경우 모든 샘플의 MA값이 4.0이상으로 나와 식품으로써의 가치가 없었다. 비록 냉장 보관했을지라도 그 기간이 21일로 길었기 때문에 결국 산패되었다. 신선육의 경우는 가공제품의 경우와는 달리 산패되는 시간이 매우 짧기 때문에 냉장보관에도 한계가 있다. 또한 실온 해동 등심의 결과를 추측해보면 냉장 해동시킨 경우의 MA값보다 높게 나왔을 것이다. 왜냐하면 냉장 보관하는 것보다 실온에서 보관하는 것이 산패되는 정도가 더 빠르기 때문이다.위 실험의 결과를 우리의 실생활과 관련지어 생각해 보면 우리들의 어머님들은 냉장고에 음식물을 보관하면 그 음식물은 절대로 부패하지 않는다고 생각하시는 분들이 계실 것이다. 위 실험에서 보면 냉동보관 할지라도 분명 그 음식물은 언젠가는 부패할 것이라는 것이다. 하물며 냉장 보관하는 음식물은 부패하는 정도가 훨씬 더 빠를 것이다. 그러므로 구입한 제품은 되도록 빨리 소비하는 것이 현명하다고 할 수 있다.☞ LipidLipid는 비극성 유기용매의 추출에 의해 세포나 조직으로부터 분리되며 자연계에 존재하는 유기분자이다. Lipid는 일반적으로 두 가지 형태로 분류된다. 가수분해가 가능한 에스테르는 밀접한 관계가 있다. 화학적으로 지방과 기름은 트리아실글리세롤(triacylglycerol, TAG's, triglyceride라고도 부른다)이며 세 개의 긴 사슬 카르복시산과 glycerol의 트리에스테르(triester)이다. 따라서 지방과 기름은 NaOH 수용액으로 가수분해되면 glycerol과 지방산(fatty acid) 세 개가 생성된다.Wax는 사슬이 긴 카르복시산과 긴 사슬 알코올 사이의 에스테르 혼합물이다. 일반적으로 카르복시산은 16개에서 36개까지의 짝수 개 탄소를 가지고 있는 반면에 알코올은 24개에서 36개의 짝수 탄소를 가지고 있다.Steroid는 특징적인 네고리계 탄소 뼈대를 갖는 식물과 동물의 lipid이다. 신체조직에 넓게 분포되어 있고 크고 다양한 생리활성을 갖는다. 사람에게 있어서 대부분의 스테로이드는 선(gland)에 의해 분비되고 목표로 하는 조직에 혈류를 통해 운반되는 화학적 전달체인 호르몬(hormone)으로써 작용한다. 스테로이드는 테르펜과 밀접한 관계가 있고 triterpene의 선구물질인 lanosterol로부터 생합성적으로 얻어진다. 그 다음에 lanosterol은 비고리 탄화수소인 squalene의 고리화로부터 얻어진다.☞ 지방의 산화지방이 산화되려면 먼저 가수분해되어 지방산과 글리세롤이 되어야 한다. 이러한 가수분해는 주로 지방저장조직에서 일어난다. 가수분해되어 형성된 글리세롤은 수용성이기 때문에 쉽게 흡수되고 유리지방산은 각 조직에 운반되어 미토콘드리아에 들어가서 β-산화(β-oxidation)를 받는다. 지방산이 미토콘드리아로 들어가서 산화되기 전에 ATP와의 반응에 의해서 활성중간체(fatty acyl-CoA)로 바꿔져야 한다. 즉 ATP의 에너지를 이용해서 지방산은 CoA의 -SH기와 티오에스테르(thioester) 결합을 만든다. 이 반응은 아실-CoA 합성효소(acyl-CoA synthetaes)에 의해서 촉매되며 지방산은 ATP와 CoA의 존재하에서 활성지방산인 지방산 아실-CoA가 된다. 이 다. 왜냐하면 긴 사슬의 아실-CoA는 미토콘드리아 안으로 들어 갈 수 없다. 아실기가 미토콘드리아 내막을 통과하기 위해서는 카르니틴이란 아실기를 운반하는 운반체가 필요한 것이다. 즉 아실-CoA의 아실기는 CoA의 아실기는 CoA로부터 카르니틴으로 옮겨지는 새로운 지방산의 에스테르인 아실-카르니틴(acyl carnitine)을 만든다. 미토콘드리아 내막의 안팎에는 CoA와 카르니틴 사이에서 지방산을 주고 받는 효소로는 카르니틴 팔미토일 전이효소 Ⅰ(carnitine palmitori transferase Ⅰ), 카르니틴 팔미토일 전이효소 Ⅱ, 카르니틴 아실카르니틴 자리옮김효소(carnitine acycarnitine translocase) 등이 있다.포화지방산의 효소적 산화는 다음과 같이 4단계로 이루어진다.1) 제 1의 탈수소 반응미토콘드리아 안으로 들어온 긴 사슬의 포화지방산-CoA는 아실-CoA 탈수소효소(acyl-CoA dehydrogenase)에 의해 2번과 3번 탄소로부터 2개의 수소원자를 제거하여 트란스형의 이중결합을 만들어 α, β 불포화 또는 트란스 Δ2 불포화 아실-CoA를 만든다. 이때 탈수소효소의 수용체로는 보결분자로 FAD를 갖고 있는 플라빈 단백질(flavoprotein, FP)이다.Fatty acyl-S-CoA + E-FAD → trans-Δ2-enoyl-S-CoA + E-FADH22) 수화반응지방산 산화의 제 2단계는 트랜스형 이중결합의 화합물(Δ2-trans enoyl-CoA)에 물이 부가되어 β-히드록시아실-CoA(β-hydroxyacyl-CoA)의 L-입체이성질체를 생성한다. 이 반응은 Δ2-에노일-CoA 수화효소(Δ2-enoyl-CoA hydrotase)에 의해서 촉매된다.trans-Δ2-enoyl-S-CoA + H2O → L-3-hyroxyacyl-S-CoA3) 제 2의 탈수소 반응지방산 산화의 제 3단계는 L-3-히드록시아실-CoA가 3-히드록시아실-CoA 탈수소효소(3-hydroxy-CoA dehydrogenase)에(thiolase)에 의해서 촉매되는 반응으로, 이것은 3-케토아실-CoA와 유리의 CoA-SH가 반응하여 원래의 지방산의 카르복시 말단 2-탄소 단편이 분해되어 아세틸-CoA로 되고, 또 하나의 생성물로서 원래의 지방산보다 2-탄소원자만큼 짧은 지방산의 CoA에스테르를 생성하게 된다. 이것은 다시 아실 CoA 탈수소효소에 의해서 효소적 산화가 다시 시작되고 산화, 수화, 산화, 티올분해반응을 반복해서 결국 짝수 탄소와 포화지방산은 모두 아세틸 CoA(C2)가 된다.3 Ketoacyl-S-CoA-SH → shortened fatty acyl-S-CoA + acetyl-S-CoA이와 같이 해서 만들어진 아세틸 CoA는 시트르산 회로에 들어가서 완전 산화되며 또는 필요한 생체물질을 합성하는데 사용된다.불포화 지방산의 산화에는 다시 엔오일-CoA 이성질화효소(enoyl-CoA isomerase)와 2,4-디엔오일-CoA 환원효소(2,4-dienoyl-CoA reductase)의 2가지 효소작용이 더 필요하게 된다. 홀수 탄소 지방산은 짝수의 지방산과 같은 경로로 산화되는데, 마지막에 프로피오닐-CoA(propionyl-CoA)를 1분자 생성한다. 프로피오닐-CoA는 메틸말로닐-CoA(methylmalonyl-CoA)로 카르복시화 되고, 메틸말로닐-CoA 자리옮김효소(methylmalonyl-CoA mutase)에 의해 촉매되는 반응을 통해 숙시닐-CoA로 이성질화 된다. 이 효소는 코린 고리 안에 코발트 이온을 가지고 있는 복잡한 보조인자인 코엔짐 B12(coenzyme B12)를 필요로 한다. 코엔짐 B12는 수소원자와 그 인접한 탄소에 결합되어 있는 기능 기와의 교환을 촉매하는 몇몇 효소의 반응에 관여한다.☞산패(酸敗; rancidity)유지(油脂)를 공기 속에 오래 방치해 두었을 때 산성이 되어 불쾌한 냄새가 나고, 맛이 나빠지거나 빛깔이 변하는 일. 변패(變敗)라고도 한다. 기름의 열화현상(劣化現象)이며, 이것은 공기 속의 산소 ·빛 ·열 ·세균 ·효소 ·습다.

자연과학| 2001.11.22| 7페이지| 1,000원| 조회(2,460)

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