◈목적 & Introduction최근에는 synthetic peptide를 이용하는 subunit vaccine 개발이 이루어지고 있다. subunit vaccine의 장점은 많은 양을 안전하고 저렴하게 만들 수 있고, 순수한 immunogen만을 쉽게 얻을 수 있다는 점이다. 또한 원하는 면역반응만을 일으키게 하기 위해서 그 반응에 해당하는 epitope만을 selection할 수 있어 독성이나 면역 억제, 자가 면역 같은 원치 않는 반응을 일으키지 않을 수 있다. 반대로 synthetic peptide vaccine을 사람에게 이용할 때의 단점은 면역반응을 일으키는 능력이 약하다는 점이다. 따라서 이런 면역 반응을 일으키는 능력만 향상시킨다면 synthetic peptide의 실질적인 가치를 높일 수 있을 것이다. 그 방법 중의 하나로 Antigen-presenting cell(APC)의 surface에 Ag-MHC complex가 많이 display되는 immunogenic peptide의 양을 늘리는 어떤 technique을 쓴다면 더 효율적인 Ag presentation과 vaccination을 유도할 수 있다. 이런 관점에서 이 사람들은 synthetic peptide의 immunogenicity를 증가시키고자 HIV-1 gp120의 epitope과 human APC에 display되어 있는 surface IgD(sIgD)나 MHC class Ⅱ에 대한 Ab로 chimera를 만들었다. gene level에서 이런 chimera를 만들면 Ab와 epitope을 원하는 대로 조합할 수 있어 편리하다.◈실험 방법1) HIV-1의 epitope인 P18(HIV-1 gp120의 V3 loop중 315∼329amino acid 의 15개 residue)과 T1(HIV-1 gp120의 428∼443 residue)이 expression 되는 chimeric Fab를 만들기 위해서 phagemid vector인 Pcomb3를 사용 하였다. 이 vector에서 M13 phage의 PⅢ sequence 대신 P18과 T1 sequence를 넣는다. 그래서 이 plasmid가 transcription, translation, processing을 거치게 되면 HIV-1의 eipitope인 P18과 T1이 expression 되는 chimeric Fab가 만들어지게 된다. 그리고 phage의 surface에는 Fab library가 display된다. 이 phage display library에서 target Ag인 human HLA-DR(MHC complex Ⅱ) 또는 sIgD에 binding하는 clone을 selection하기 위해서 panning을 수행하였다.2) chimeric Fab의 biological activity를 in vitro에서 test하기 위해서 E.coli 에서 monovalent Fab fragment로 발현시킨 후 Fab fragment만을 purify했다. Ag인 HLA-DR과 sIgD을 well에 coating시켜 놓고 chimeric Fab를 넣어 ELISA를 수행한 결과 각각의 chimeric Fab가 Ag인 HLA-DR과 sIgD에 specific하게 binding함을 확인하였다.3) 다음엔 chimeric Fab가 in vivo에서 target cell 표면으로 targeting이 되 는지 알아보기 위해 human PBL(periperal blood lymphocyte)과 monkey splenocyte를 가지고 FACS를 수행하였다.4) 실제로 in vivo에서 이런 chimeric Fab가 면역 반응을 일으킬 수 있는지 알아보기 위해 무작위로 HIV-1 negative인 사람과 HIV-1 positive인 사 람을 골라 이 사람들의 PBMC(periperal blood mononuclear cell)를 이용 하였다. PBMC에 chimeric Fab를 넣어주면 chimeric Fab가 immunogen 으로 작용하게 되어 T cell이 activation된다. T cell의 activation 정도는 TH cell에 의해 유도된 IL-2의 양으로 알 수 있다.◈결과 및 결론이들이 만든 이런 chimeric Ab가 APC에 binding 할 수 있고, Ab 뒤에 expression된 peptide가 APC에 display 될 수 있음을 실험을 통해서 밝혔다. 그리고 원래 의도하였던 바대로 이런 chimeric Ab가 다른 Ag과 비교하여 specific하게 좀더 면역 반응을 잘 일으킬 수 있었다고 밝혔다. 이런 immunotargeted chimeric construct는 gene level에서 만들어졌기 때문에 epitope을 expression시킬 site를 조절할 수 있고, copy number도 조절할 수 있다. 하지만 이런 immunotargeting vaccine을 만드는데 있어서 monovalent Fab를 이용했는데 bivalent한 Ab가 면역 반응을 더 잘 일으킬 수 있다. bivalent Ab는 targeted cell surface의 molecule을 더 잘 cross-linking 시킬 수 있기 때문이다.
![[생명공학] recombinant Ab](https://image4.happycampus.com/Production/thumbnail/2001/11/14/data1052510-0001.jpg)
