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[기독교]홍길동 대학에 가다

세계관의 혼란 속에서 나를 찾아 떠나는 여행-?홍길동, 대학에 가다?를 읽고우리 사회는 다양한 가치의 세계관을 가지고 있다. 서로의 차이점을 따지다보면 여러 가지 면에서 충돌이 발생할 수 있게 된다. 실제로 개인적인 신념과 종교의 차이로 인해 발생한 전쟁을 역사와 세계에서 찾아 볼 수 있다.오늘날처럼 다양한 생각들이 공존하는 개인주의가 만연한 사회 속에 사는 많은 사람들은 서로의 많은 차이점에도 불구하고 평화를 유지할 수 있게 해 주는 방법을 좋아하게 되었고, 이러한 상황 속에서 상대주의가 성장하였다. 상대주의에서는 개인의 신념이나 각 종교의 철학적인 관점들이 진리인지 아닌지를 묻는 것 자체를 근본적으로 거부하고 있다. 어떠한 개인의 생각이나 종교는 신념이지 진리가 아니며, 참도 거짓도 아니라고 말한다.주인공 홍길동은 복음적인 기독교 가정에서 자라나 “그리스도에게 자신을 드렸다”라고 표현할 정도로 신실한 기독교인이다. 홍길동이 대학에 입학하게 되고 그곳에서 접하게 되는 다양한 믿음과 사회에 대해 혼란을 겪게 된다. 이 책은 14장에 걸쳐 홍길동이 대학에 가서 직면한 다양한 믿음들과 사회에 나타나는 개인주의, 상대주의, 다원주의에 대해 설명하고 있으며 우리가 경험할 수 있는 일들을 그리고 자신이 믿는 진리를 찾아 가는 이야기를 담고 있다.이 책에서 상세하게 설명하고 있는 개인주의와 상대주의, 다원주의는 어쩜 우리가 당연하고 옳다고 믿는 가치관으로 대학을 무대로 이야기를 풀어 나가고 있다. 충분히 있을 법한 상황들을 설정하여 가치관에 대해 저자는 그리스도인으로서 이러한 세계관을 비판하고 있다.먼저 제임스 사이어는 현대성의 네 가지 세력인 개인주의와 다원주의, 상대주의, 사생활에 대해 설명하고 비판했다. 혼자서도 충분하다고 생각하는 개인주의에 대해서는 개인주의적 가치를 전적으로 부정하지는 않지만 그 폐해가 적지 않음을 지적하고 교회에도 깊이 들어와 있음을 말하고 있다. 성경에서 말하는 가치관과 현대 나타나는 개인주의와는 다르고 그 대안으로 길동은 경건을 만나 그가 겪은 혼란에 대해 이야기를 하며 자신의 위치를 찾아나간다. 또한 기독학생회라는 공동체를 바탕으로 자신의 길을 찾아가는 길동을 통해 보여주고 있다.무속신앙을 신봉하던 가족에서 갑돌은 도시 아이들과 어울리기 위해 무신론적 입장을 띄고 있다. 하지만 갑돌 역시 대학에서 상대주의로부터 자신의 입장을 지키기 위해 혼란에 빠진다. 길동은 갑돌을 복음 공부에 초대해 하나님에 대한 신앙을 가지게 된다.지은이는 현대사회에 나타나는 세계관 중에서 받아들일 만한 내용인지, 거부해야 마땅한 내용인지를 지적하며 기독교적 관점을 가진 입장에서 세상의 가치관을 평가해 볼 수 있도록 도와주고 있다.그럼 기독교적 세계관은 무엇인가. 기독교적 세계관은 단순히 성경내용을 체계화한 것이 아니라 체계화된 진리에 대한 성령의 조명이 요구된다. 기독교 세계관의 정의도 시대에 따라, 사람에 따라 다양하다. 그러나 다양한 정의가 존재하더라도 원리적으로 기독교 세계관은 하나님의 말씀에 대한 한 성령의 조명을 전제하고 있다.올바른 세계관은 모순되는 것 없이 내적인 조화와 일관성이 있어야 한다. 또한 세계관의 내용이 절대화되어 치우치지 않고 개방되어 있어야 한다. 하지만 오늘날 우리들이 갖고 있는 기독교적이라고 생각하는 세계관도 잠정적이며 더 밝은 성령의 조명에 의해 확장, 보완될 수 있도록 열어두어야 하겠다.

독후감/창작| 2005.11.18| 3페이지| 1,000원| 조회(496)

공동체, 기독교적 세계관, 제임스 사이어

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[세계화]문화의 세계화 - 장 피에르

를 펼치기 전 저자(著者) 장 피에르는 “우리에게 지구는 진정 ‘한 마을’이 되었는가.” 라는 질문을 던진다. 한 마을, 지구화, 세계화(世界化). 대부분의 사람들은 의심치 않고 예스라고 답할 것이다. 세계화(世界化)는 산업화(産業化)를 통한 대량생산(大量生産)과 제국주의(帝國主義) 전쟁(戰爭)으로 패권국(覇權國)의 이익(利益)을 위한 것이 그 시발(始發)점이라고 볼 수 있다. 경제(經濟) 정치(政治) 사회 문화(文化)적으로 세계화(世界化)는 국가적(國家的) 조직(組織)뿐만 아니라 초(超)국적 기업이 세계화의 주도적(主導的) 행위(行爲)자로 나서고 있으며, 현재(現在)의 세계화는 피할 수 없는 존재(存在)로 우리에게 다가왔다. 또한 우리는 인터넷과 미디어를 통한 공유(共有)로 인해 시시각각(時時刻刻) 변하는 세계화(世界化)의 정보(情報)를 접하고, 그것을 우리가 꼭 인지(印紙)하고 받아들여 대처하고 행하고 있다. 저자 장 피에르는 세계화(世界化) 중 “문화(文化)”라는 이슈에 대해 우리의 자각(自覺)을 환기(喚起)시키고자 했다.에서는 9장으로 나뉘어 현대(現代)의 문화(文化) 모습과 문화(文化)로서의 산업(産業)을 관찰(觀察)하고, 문화산업(文化産業)의 기원(基源)과 전 분야(分野)에 걸쳐 나타나는 세계화(世界化)의 모습에 대해 우리가 문화(文化)에 대한 올바른 인식(認識)을 통해 진정한 세계화(世界化)를 추구(追求)하도록 하고 있다. 또한 문화정책(文化政策)을 통해서 특수한 문화(文化)의 침식(寢息)을 막고 주체적(主體的) 문화(文化)의 생산(生産)과 정체(政體)성을 확립(確立)하도록 요구(要求)한다.저자(著者)는 문화(文化)의 세계화(世界化)가 문화(文化)의 개념(槪念)에 대한 오해(誤解)에서 비롯한다고 보았다. 문화(文化)는 사회의 구성원(構成員)으로 인간(人間)이 획득(獲得)하는 지식(知識), 기술(技術), 방법(方法), 그리고 모든 습관(習慣)으로 정의되며, 그 문화(文化) 속에서 자라난 사람들이 정체(正體)성을 가진 사회적 주체(主體)로 성장(成長)하도록 원한다. 하지만 현대(現代)의 문화(文化)에 대한 인식(認識)은 문화산업(文化産業)과 문화(文化)를 혼동(混同)하고 있다는 것이다. 코카콜라와 햄버거를 먹으며, 헐리우드 영화와 스타에 열광(烈光)하고, 스타벅스의 커피가 최고라는 식의 문화산업(文化産業)을 자칫 자기가 얻은 위치나 습관(習慣)으로 문화라고 착각(着角)하고 있다는 것이다. 세계화(世界化)라는 명목아래 국경(國境)이 없어지고, 수많은 문화(文化)상품들이 전 세계에서 동시(同時)에 소비(巢脾)되고 있다. 이것이 전 세계인들이 동일한 문화(文化)를 공유(共有)하는 것처럼 보고, 문화(文化)의 세계화(世界化)는 동일한 문화를 동시에 소비하는 문화상품의 세계화를 통해 실현되었다고 본다는 것이다. 하지만 결코 문화의 세계화가 문화산업(文化産業)으로의 세계적 통합(統合)을 말하는 것이 아니라는 것이다.문화(文化)란 지역(地域)마다 오랜 숙성(夙成)의 시간(時間)의 걸쳐 형성(形成)된 것으로 각각의 특수성(特殊性)의 지니고 있다. 반면 문화상품은 소비(巢脾)를 위해 생산(生産) 판매(販賣)되는 것으로 최대(最大)의 이익(利益)을 위해 수송(輸送)과 커뮤니케이션 수단(手段)의 발달(發達)을 기반(基盤)으로 세계시장(世界市場)에서 가능한 많은 소비(巢脾)를 창출(創出)하고자 하는 것이다. 하지만 이렇게 유통(流通)되는 문화상품이 지역의 특수적(特殊的) 문화와 충돌(衝突)해서 지역문화의 파괴(破壞) 현상을 유발(乳鉢)하고 있으며, 그것이 선진국(先進國)의 거대한 산업자본(産業資本)에 의한 문화상품들에 의해 많은 국가들의 특수한 문화들이 침식(浸蝕)당하고 있다고 본다. 이러한 현상에 대해 장 피에르는 국가의 능력(能力)을 통해 문화정책(文化政策)을 구체화(具體化)함으로써 자국(自國)의 문화적 특수성을 보호(保護)해 나가야 한다고 주장(主張)하며 교육(敎育), 언어(言語), 문화재(文化財) 보호(保護)정책, 문화산업(文化産業)의 육성정책 등을 제시하고 있다. 그리고 문화산업의 소비는 세계시장을 공략(攻掠)하지만 지역마다 소비의 차이(差異)가 나타나기 마련이다. 문화상품의 세계화를 세계 문화의 동질화로 판단(判斷)하는 것을 비판(批判)하며, 실제 소비자(消費者)는 필요(必要)충분(充分)의 요건(要件)에 따라 문화상품을 소비하며 문화적 특성에 맞게 재조정(再調整)을 해서 받아들인다는 것이다. 즉, 장 피에르는 문화의 세계화에 따르는 문화와 문화상품에 대한 올바른 인식(認識)과 문화가 가지는 특수성(特殊性)을 전제로 문화의 재생산(再生産)을 촉구(促求)했다.문화란 더 빠르게 상호간의 정보교환(情報交換)이 이루어지면 문화 간의 격차(格差)가 발생(發生)하기 마련이다. 세계화의 변화(變化)에 발맞추기 위한 각국(各國)의 과학기술(科學技術)의 개발(開發)은 박차(拍車)를 가하지만 경제(經濟), 정치적(政治的) 힘의 격차에 의해 상하관계(上下關係)가 성립(成立)되기 마련이며, 갈등(葛藤)과 파괴(破壞)를 초래(招來)할 수도 있다. 그리고 상위 그룹의 문화상품의 침투(浸透)에 자국의 문화가 급속(急速)히 파괴될 수 있는데 문화정책에 의해 지역의 문화를 보호(保護) 할 수 있다. 그러나 지역적(地域的) 문화의 생명력(生命力)은 그리 길지 않으며, 또 다른 결과(缺課)를 가져 올 수 있어 어째보면 양면적(兩面的) 입장을 가진다. 쌀 개방(開放)에 따르는 농민(農民)의 입장에서 개방을 분명 좋은 일만은 아니지만 국가적(國家的) 정책 상황에 따르면 개방(開放)을 막을 수만은 없는 것이다. 큰 이익(利益)을 위해서 작은 것을 버릴 줄 아는 미덕(美德)이 필요(必要)하다는 것으로 보인다.우리의 국가의 질을 높이는 투자(投刺)를 통해 성장(成長)을 이루어야 할 것이고, 국제적(國際的)으로 문화들 간(間)의 차이(差異)를 인정(仁政)하면서 동질화를 막고 다양한 문화가 막힘없이 교류(交流)할 수 있는 국제적(國際的) 기구(機構)가 필요하다. 국제기구(國際機構)를 통해 문화상품의 유통(流通)과 문화적 교류(交流), 문화재(文化財)에 대한 보호(保護)가 이루어지고, 공정(公廷)하고 균형(均衡) 잡힌 규칙이 우리에게 절실(切實)하다고 생각한다. 정치적(政治的) 경제적(經濟的) 상하관계(上下關係)에서 벗어나 문화의 생산(生産)에 제약(制弱)이 따르지 않고 공정한 문화교류(文化交流)가 가능해 져야 할 것이다.최근 마이크로소프트사의 한국 시장(市長) 철수(撤收) 파문(波文)이 있었다. 이것은 윈도우 프로그램에 메신저와 미디어 플레이어를 끼워 파는데 대한 공정거래(公正去來)위원회(委員會)의 압박(壓迫)으로 인해 한국에서 윈도우를 철수 할 수 있다는 가능성(可能性)을 제기(提起)한 것이다. MS사는 한국시장의 점유율(占有率) 98.8%로 독점(獨占)하고 있으며 마치 MS가 표준(標準)인냥 대부분의 유저들이 사용하고 있다. 유리(有利)한 입지로 소비자(消費者)에게 다가가 타(他) 프로그램의 경쟁(競爭)사에게 심각한 타격(打擊)을 주고 있다. 이러한 상황(商況)에서의 철수(撤收)는 엄청난 파장(把掌)을 일으킬 수 있으며, 과학(科學) 기술(奇術)의 격차(格差)에 따른 종속적(從屬的)인 지배(地排)관계의 단면(單面)을 볼 수 있었던 상황이었다. 파문에 불과하기는 했지만 우리에게 리눅스 운영체계 개발(開發)에 더욱 박차(拍車)를 가해 MS 철폐(撤廢)를 수용(收用)한다, 길들여진 윈도우를 버리지 못한다는 입장(入丈)차이(差異)의 의견(意見)이 분분(芬芬)하였다. 은행, 정부기관의 프로그램, 게임과 싸이트 등의 많은 분야(分野)에서 윈도우에 맞추어 개발만을 했기에 철수 파문에 불과해도 벌벌 떨었다는 표현(表現)이 맞았다고 본다. 윈도우를 그저 받아들이기만 하고 그에 따르는 문화적(文化的) 산물(産物)을 가지치기해 나가기만 급급(汲汲)했지 새로운 문화의 창출(創出)을 시도(試圖)나 재생산(再生産)이 이루어 지지 못했다. 장 피에르의 의견(意見)에 따라 왜 우리는 윈도우를 우리의 특수성(特殊性)에 맞게 재구성(再構成)해서 문화를 흡수(吸收)하지 못했는지 아쉬움이 따른다.

독후감/창작| 2005.11.18| 3페이지| 1,500원| 조회(619)

세계화, 문화, 문화상품, 문화의 세계화, 장 피에르

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[사회학]거대한 체스판

지금 우리에게 필요(必要)한 것, 국가전력(國家全力)- 거대한 체스판 을 읽고나는 남들보다 투철(透徹)하거나, 또는 미천(微賤)한 조국애(祖國愛)를 가진 사람은 아니다. 소위 냄비근성(根性)으로 월드컵을 보면서 확 달아올랐다, 힘없는 약소국(弱小國)이라는 것을 느끼게 되면 가라 않고는 한다. 처음 과제를 받고선 ‘거대한 체스판, 미국(美國)은 킹이고, 우리나라는 뭐지?’라는 생각을 했다. 딱히 미국(美國)이란 나라에 호감(好感)이라기보다 못가진자의 질투(嫉妬)를 느끼고 있었다. 하지만 거대한 체스판 을 읽고선 내가 너무 갇혀 살았다는 생각을 했으며, 브레진스키의 시선(視線)과 통찰력(洞察力)에 놀라움을 금지 못했다. 책을 읽으면서 브레진스키는 나에게 세계지도를 펼치게 만들었다. 그는 세계정세(世界情勢)를 꽤 뚫는 시각(視覺)을 가지고 있으며 출판한지 5년이라는 시간이 지났음에도 국제사회학(國際社會學) 분야(分野)의 필수(必修) 서적(書籍)으로 읽히고 있다. 이 책을 충분히 이해(理解)를 한다면 현재 세계(世界)의 흐름, 미국(美國)의 주도권(主導權)을 파악(把握)하는데 도움을 얻을 수 있을 것이다. 뿐만 아니라 우리나라와 미국(美國)에 대한 관계(關係)를 이해(理解)하고 국제관계(國際關係)라는 미로(迷路) 속에서 바른 방향을 찾는데 도움을 줄 것이라 생각한다. 하지만 미국의 눈으로 미국을 읽어 공감(共感)하는 부분도 있지만 더러는 거부(拒否)감을 주었다. 책을 펼치면서 마주하는 “미래에 세계를 이끌어 나갈 학생들에게 이 책을 바친다.”라는 문구(文句)를 보면서 브레진스키라는 인재(人才)가 존재하는 미국이라는 나라가 부럽기도 했다.국제관계(國際關係)를 보는 시각은 현실주의(現實主義), 이상주의(理想主義), 합리주의(合理主義)로 나뉠 수 있는데 브레진스키는 주권국가(主權國家)가 없는 정글에서 국익(國益)을 최대(最大)화하기 위해 각축(角逐)을 벌인다는 현실주의(現實主義) 관점(觀點)에서 미국과 세계를 바라보고 있다. 체스판은 세계를 나타내고, 체스를 두는 자는 오로지 미국뿐이다. 그리고 체스말은 동맹국(同盟國)이나 적대국(敵對國)으로 체스의 승부(勝負)를 내기 위한 수로만 존재할 뿐이라고 말하고 있다.거대한 체스판 은 칠(七)장으로 나뉘어져 있는데 첫 장은“새로운 형태(形態)의 헤게모니”이다. 헤게모니는 힘으로써 상대방을 지배하는 것이 아닌 제도(制度)나 사회관계(社會關係), 관념(觀念)을 통해 상대방의 자발(自發)적인 동의를 얻어내는 것이라고 볼 수 있다고 한다. 로마, 중국, 몽고 제국 등의 예를 들어 역사 속 나라와 미국을 비교한다. 로마제국과 중국은 문화적(文化的) 우월(優越)감에 의해 지속된 나라고 말하고, 몽고제국은 큰 영토로 인해 통치제도(統治制度)가 역부족(力不足)이었고, 열등(劣等)한 문화로 인해 쉽게 무너졌다고 설명하고 있다. 하지만 미국은 과거 제국들에서는 불 수 없었던 군사적인 힘과 첨단(尖端) 기술 능력 보유, 경제(經濟)적, 문화(文化)적으로 세계를 주도하고 있다고 말한다. 특히 브레진스키는 지금 미국만이 가진 ‘문화(文化)’라는 것을 강조하고 있다. 그 문화(文化)는 자율(自律)과 다양성(多樣性)을 존중(尊重)하며, 그것으로 인해 미국은 세계강대국을 유지할 수 있으며, 합리화(合理化)하고 있다. 즉 미국이 세계 일등국가가 될 수밖에 없음을 역사(歷史)와 현실(現實)을 조율(調律)하여 말하고 있다.첫 장이 미국의 우월감(優越感)을 말하는 것이라면, 둘째 장은“유라시아를 지배(支配)하는 나라는 전 세계에서 가장 선진(先進)적이고 경제(經濟)적 생산성(生産性)이 높은 세 지역 중 두 지역을 장악(掌握)하게 된다.”라고 노골적(露骨的)으로 표현(表現)하고 있다. 이것은 미국이 유일한 세계 강국이 되었다는 점을 시사(示唆)하고 유라시아가 세계 중심 무대라 표현함으로써 잠재적(潛在的) 도전(挑戰)국으로 보고 있다. 지정 전략(戰略)을 구사함으로써 국제적 역학(力學) 관계(關係)에 파급효과(波及效果)가 있는 국가를 변별(辨別)함과 각국의 대외정책(對外政策)을 읽어내고 내편이 되거나 중용(中庸)한 지정학적(地政學的) 국가(國家)를 지목(指目)하라는 브레진스키의 주장(主張)이다. 즉 미국의 이익(利益)을 가장 우선시 하고 있으며 힘에 의한 통제(統制)와 포섭(包攝)을 뜻하고 있다.셋째 장“민주적(民主的) 교두보(橋頭堡)”에서는 영국, 프랑스, 독일과의 관계에서 정치체제(政治體制)와 종교(宗敎), 정체(正體)성이 유사한 유럽과의 동맹(同盟)을 강화(强化)하도록 권하고 있으며, 넷째 장“블랙홀”에서는 소련의 붕괴(崩壞)와 신생(新生)독립국가(獨立國家)간의 대립 속에서 미국의 위치(位置)를 그리고 있다. 다섯째 장에서는“유라시아의 발칸”은 발칸 주변을 면밀(綿密)하게 분석하고 있다. 중동에게는 친미적 국가인 터키에 대한 배려를 권유(勸諭)하고, 터키의 이익(利益)을 위해서는 인근 코카서스 지방의 국가들의 이익을 등한시 할 수 있다고 말하며, 이를 기반으로 중동을 안정화(安定化)시켜야 한다고 한다.구소련에게 지원이 끊긴 후 개발(開發)을 위해 선진국(先進國)의 도움이 필요한 국가인 인도를 지원해 미국의 잠재적(潛在的) 적국(敵國)인 중국을 견제(牽制)하고, 중앙아시아를 견제하는데 유용하다고 지적했다.여섯째 장에서는 중국, 일본, 한반도에 대한 이야기를 한다. 미국의 가장 곤혹(困惑)스러워하는 상대인 중국은 적대(敵對)시하지 않는 것이 최선(最先)이나 최악(最惡)의 경우라 하더라고 중국-러시아-이란 간의 ‘반 미국패권(覇權) 동맹(同盟)’이 결성되는 것만큼은 막아야 한다고 주장했다.일본의 경우는 미일동맹을 통해 중국의 패권(覇權)을 견제(牽制)할 수 있는 수단으로 보고 있다. 이를 위해 일본에게 적당한 힘을 실어 줄 것을 주장하지만 자칫 일본의 지역패권 시도로 이어지지 않도록 적절한 통제(統制)도 이루어져야 한다고 한다.통일(統一)가능성이 한층 고조되고 있는 가운데 한국은 반일, 반미(反美)감정으로 인해 친중적 국가가 될 가능성이 높다고 판단하고 있다. 이는 중국에게 최선일지 몰라도, 미국에게는 한-미-일 삼각동맹(三角同盟)을 통해 중국을 견제하는 것이 최선의 수(手)이다. 따라서 미국의 일본과 한국의 화해(和解)를 유도하고, 한국에서의 반일(反日)감정을 완화(緩和)시켜야 한다고 말한다. 또 가능하다면 통일(統一) 이후에도 미군을 한반도(韓半島)주둔(駐屯)을 권장(勸?)하고 있다.세계 정황(情況)에 대해 브레진스키는 미국의 이익(利益)을 수호(守護)하기 위한 구체적인 전략을 제시하고 있다. 정체(政體)체제(體制)와 종교(宗敎), 정체성이 유사한 유럽과의 동맹(同盟)을 강화하고, 이를 기반(基盤)으로 껄끄러우나 적(敵)으로 삼기 또한 거북한 러시아를 점진적(漸進的)으로 동맹(同盟)의 품으로 끌어들여 이들 지역 내에서의 미국의 입지를 굳히고자한다. 그리고 미국이 중심에 서서 국가 간의 체제(體制) 정비(整備)와 안정화(安定化) 방안(方案)을 제시하고 있다.

독후감/창작| 2005.10.16| 4페이지| 1,000원| 조회(323)

미국, 국제관계, 거대한체스판, 브레진스키

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[동물실험] Gene Transfer to Mammalian cells

Gene Transfer to Mammalian cells★실험목표★plasmid DNA를 cell line(BJAB)내로 유입시켜 세포 내에서 발현되도록 하는 것이 transfection의 목적이다. 동물세포는 세포벽이 없어서 electroporation을 이용해 transfection하기 적절하다. transfection이 제대로 되었는지 확인하기 위해 Reporter system을 사용하여 확인한다.★실험이론★(1) Transfection의 종류- Calcium phosphate precipitation : 세포의 endocytosis 기능을 이용하여 유전자 도입- Lipofectamine-mediated : liposome이라는 인공의 membrane vesicles로 유전물질을둘러싸서 세포 내로 도입- DEAD-dextran or Polybrene-mediated- Electroporation(전기천공법) : 고압의 전압으로 세포를 자극하여 세포막의 조성을 순간적 으로 변화시켜 유전물질이 직접 세포 내로 유입되도록 하는 방법- Microinjection(미세주입법) : 미세침을 이용하여 세포의 핵 내에 유전물질을 삽입(2) Reporter system의 종류1. 원리특정 유전자의 promoter 혹은 regulatory element를 reporter gene의 5' region (upstream)에 cloning하여 reporter vector를 제작한다. 이를 적절한 세포 (E. coli에서 mammalian cell에 이르기까지)에 도입시킨 후, 여러 가지 처리(transcription factor를 발현하는 vector의 동시 도입, 유효 화합물의 처리 등등)한 후, promoter의 활성변화에 의해 전사-번역된 reporter enzyme의 활성을 측정.2. 널리 사용되는 reporter gene: luciferase, renilla luciferase, β-galactosidase, chloramphenicol acetyltransferaserivatives, GUS등이 있다.- CAT : reporter gene으로서 CAT(chloramphenicol acetyl transferase)을 사용한다. 이 유전자는 prokaryote에서만 발현하는 효소로서 항생제인 Chloramphenicol에 acetyl기를 붙여 antibiotic resistance를 갖게한다. CAT 효소가 14C로 표지된 Chloramphenicol를 acetylation시킨다. Acetylation된 정도는 크로마토그래피의 전개도 차이를 이용해 확인한다. Acetylation 된 정도를 정량화 해서 CAT 유전자의 발현 정도를 확인한다.- Luciferase : reporter gene으로서 반딧불이의 유전자인 luciferase를 이용한다. mammalian expression vector에 luciferase를 삽입하여 mammalian cell에서 발현시킨 후 발색정도를 luminometer로 측정하여 유전자의 발현 정도를 확인한다. luciferase는 다른 어떤 reporter enzyme보다 linearinity가 좋고 민감하여 특히 많이 사용된다.- -galactosidase : lac operon에서 만들어지는 mRNA양의 측정하기 위해 -gal이 이용된다. 기질인 ONPG(colorless)가 ONP(yellow color)로 바뀔 때 yellow color의 정도를 spectrophotometer로 측정하면 -galactosidase의 activity 측정되고 --> mRNA 양 측정 --> lac operon의 transcription activity를 확인할 수 있다.(3) Protein 정량일반적으로 단백질을 정량하는데는 4가지의 spectroscopic 방법이 이용된다- 단백질의 UV흡수에 따른 측정법- Bradford dye assay- the Lowry assay- the Smith copper/bicinchoninic assay이번 실험에 사용한 기법인 The Bradford Assay에나 aromatic residues(arg, trp, tyr, his, phr)에 결합시 흡광도의 변화를 측정한다.- anionic(bound form)이 최대 흡광 파장이 595nm이고, cationic form(unbound form) 은 최대 흡광 파장이 470nm이다- 강한 산성 상태에서는 dye는 doubly-protonated red form으로 가장 안정한 형이고, 단 백질에 결합시에 dye는 unprotonated, blue form이 가장 안정한 형이다.{free dye(cationic) bound dye(anionic)Red Green Blue Blue-Protein(470 nm) (650 nm) (590 nm) (595 nm)2. 측정범위1-20ug(microassay), 20-200ug(macroassay)3. 장점- 빠르고(10분) 저렴하다.- 단백질에 매우 특이적이다(Highly specific )- 높은 감도를 가진다(sensitive)- 다양한 단백질에 이용가능하다.- dye-complex는 약 1시간동안 안정하다.4. 단점- 넓은 범위에 걸친 standard curve의 경우 non-linear하다- 각각의 단백질의 대한 반응이 다양할 수 있으므로 standard의 선택이 중요하다.- 사용되는 단백질은 비가역적으로 변성된다- 2개의 Coomassie Brilliant Blue G-250 species 의 흡광도가 부분적으로 겹치므로 standard curve를 만드는 것이 매우 중요하다.(non-linear curve 형성)5. 주의사항- dye는 tyr,trp, his,phe보다 arg에 약 8배는 많이 반응한다- CBBG dye는 quartz cuvette에 강하게 결합하므로 glass나 plastic cuvette를 사용한다.- dye color는 약 5분후 완전히 단백질과 반응하고, 10-15분후에는 침전하기 시작한다.- BSA는 2.5ug-15ug에서 linear curve를 보인다★실험방법★Transfection과free)로 washing4) 다시 centrifuge(1000rpm, 5min, 4℃)한다.5) 8ml R-10을 6-well plate에 aliquot6) centrifuge(1000rpm, 5min, 4℃)7) 6ml RPMI1640을 넣어 resuspend8) 1ml씩 E-tube에 정제한다.9) centrifuge(1200rpm, 1min, RT)하고 상등액을 suction해서 제거한다.10) DNA mixture 30㎛에 RPMI1640을 넣고 모두 따서 centrifuge(1200rpm, 1min, RT) ☞여기에는 total 300㎛가 되는데 이는 electroporator가 작동하기 위해 전해질 역할 도 하고 적정한 volume을 맞춰 transfection 확률을 높이기 위한 것이다.11) cuvett에 옮겨 electroporator을 다양한 voltage와 96㎌로 맞추어 값을 측정하고 기록한다.12) 6-well plate에 넣어 37℃ CO2 incubator에서 24hr동안 배양시킨다.Reporter system과정1) 6-well plate의 sample을 resuspend하고 15ml culture tube에 옮겨 담는다.2) centrifuge(1000rpm, 5min, 4℃) 한 후 suction3) 1ml PBS로 washing하고 inciferase용 E-tube로 옮겨 담는다.4) centrifuge(1200rpm, 1min, RT)하고 suction5) 1ml PBS로 washing해서 resuspend6) centrifuge(1200rpm, 1min, RT) 한 후 suction7) reporter lysis buffer을 첨가해서 resuspend8) ice에 15min 저장한다.9) -gal용 E-tube에 다음을 정량대로 넣는다.- 214ul 0.1M sodium phosphate buffer과- 66ul ONPG (4mg/ml)- 10)step이 종료되기전에, add to 3ul 100mMgCl2/5M 2-Me 섞이기 위해 vortex12) 37℃ 20min water bath에서 incubate13) 500ul 1M Na2CO3 첨가 ☞반응을 종료하기 위해14) OD값 측정15) 10~15sec vortex16) 12000g, centrifuge(2min, 4℃)하고 sup용 E-tube를 ice에 박아둔다.17) supernatant의 끝에서부터 천천히 따내어 16)의 E-tube에 넣는다.★결과 및 토의★{190v210v230v250v270vOD(595nm)0.270.2120.6910.0730.012Protein양2.72.16.90.70.1B-gal(410nm)0.0070.0220.0670.1480.17OD(595nm) ; Brad-ford정량을 위한 파장으로 이 파장에서 Protein에 대한 정량이 가능하게 된다.OD(410nm) ; reporter gene assay중의 하나인 -galactosidase의 activity를 알 수 있는 파장이다.230v에서 OD(595nm)값이 가장 크게 측정되었으며, protein양과 -gal의 값을 유추해 볼 때 transfection하기 적당한 voltage는 230v라고 생각한다. cell에 plasmid가 삽입되어 transfection이 이루어졌기 때문에 Brad-ford정량을 위한 파장인 OD(595nm)는 protein과 bound되어 transfection을 확인할 수 있었다. 또한 각 voltge에 따른 OD값이 달라 transfection하기 적당한 voltage를 측정할 수 있었다. 그리고 Reporter gene assay의 -gal은 transfection된 plasmid DNA가 cell에서 발현하여 lac operon에서 만들어지는 mRNA양의 측정하기 위해 사용되었다. 기질인 ONPG(colorless)가 ONP(yellow color)로 바뀔 때 yellow color의 정도를 눈으로 확인할 수 있었다. spectrophotometer로 측정하면 -galactosidase의 activity가있었다.

자연과학| 2004.11.28| 5페이지| 1,500원| 조회(1,011)

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[미생물] Vitamin과 관련된 coenzyme의 구조와 기능

(미생물 생리학)Vitamin과 관련된 coenzyme의구조와 기능★☆ enzyme과 coenzyme ☆★Enzyme이 작용하기 위해서는 효소 단백질과 기질 이외에 제 3의 물질을 필요로 하는 경우가 있다. 이런 경우, 제3의 물질은 유기화합물로 효소반응에 불가결이며, 그 반응계의 일부를 이루는 것을 coenzyme이라 한다. Coenzyme은 그 반응기구상에 있어서 기질의 어는 chemical 또는 원자의 carrier로서 작용하는 것이다. 효소반응에 불가결이기는 하나. 무기이온과 같이 간단한 물질로 효소를 활성화시키는 것을 activator라고 한다.Coenzyme은 효소와 해리될 수 있는 상태로 결합하여 있으며. 단독으로는 반응을 일으킬 수 없고, apoenzyme와 coenzyme가 결합하여 holoenzyme으로 되어 효소작용을 한다.효소에는 단순단백질형의 효소와 복합단백질형의 효소가 있다. 산화환원효소나 전이효소는 아미노산 이외의 저분자 유기화합물이나 금속 등의 coenzyme을 갖는 복합단백질형의 효소이다. 즉 coenzyme이 일정한 양식으로 특정의 apoenzyme과 결합하여 holoenzyme을 형성하고 있다. 반응용액 내에서 apoenzyme에서 가역적으로 해리하여 평형상태를 유지하는 coenzyme을 좁은 의미의 coenzyme이라 부른다. NAD+, NADP+등의 nucleotide등은 이 형태의 coenzyme이다. 또한 수용성 비타민은 대부분의 coenzyme로서의 역할을 하는 것이 밝혀지게 되었다.★☆vitamin과 coenzyme☆★여러 가지 apoenzyme에 vitamin B군이나 그 외의 vitamin류가 coenzyme형이 되어 공유결합 또는 가역적으로 결합하여 holoenzyme이 되어야 비로소 효소활성이 나타나게 된다. 다음 표에 vitamin과 관련된 coenzyme의 기능을 나타내었다.VitaminCoenzymeHoloenzyme전이원자단Thiamin(B1)thiamin pyrophosphate(TPP)transkexylaseCO2Folic acidtetrahydrofolic acid(FH4)formyl transferase,synthetase,hydroxymethyl transferase,formimino transferaseformyl-,methenyl-,methylene-,methyl-,formimino-vitamin B12adenosylcobalamin(methyl cobalamin)mutase, reductase,dehydratase수소원자,methyl-ubiquinoneubiquinoneoxidase,reductase,dehydrogenase전자,수소원자lipoic acidlipoic aciddihydrolipoamide,acyl transferaseacetyl-,succinyl-비타민 B1(thiamin)비타민 B1(thiamin)은 항각기인자, 항신경염인자로 알려져 있는 수용성 비타민이다. 생체내에는 대부분이 thiamin pyrophosphate(TPP)로 존재하고 그 외에 유리 thiamin, thiamin monophosphate(TMP), thiamin triphosphate(TTP), 그리고 근육 중에 hydroxyethylthiamin(HET)으로 존재하며 TMP나 TTP는 coenzyme 기능이 없다.Thiamin과 그 유도체 R = -HR = -PiR = -PiPiR = -PiPiPi thiaminthiamin monophosphate(TMP)thiamin pyrophosphate(TPP)thiamin triphosphate(TTP)Thiamin pyrophosphate는 체내에서 Mg2+와 복합체를 형성하여 당질대사에 관련된 여러 가지 효소의 coenzyme로 작용한다. 즉 pyruvate dehydrogenase와 α-ketoglutarate dehydrogenase의 산화적 탈탄산반응과 transketolase 반응 등에서 coenzyme로 작용한다. 또 분지아미노산에서 생성된 α-케토산의 산화적 탈탄산반응에도 관여하며 미생물에서는 py, 당뇨병, 하수체질환 등으로 비타민 B2 결핍증이 나타나는 경우가 있다. 그 원인은 약제와 복합체 형성, 장내세균군의 합성 저하, 흡수불량, coenzyme합성억제, 체내 소비증가, 아포효소 생성 장해, 효소반응 저해 등이다.Niacin(비타민 B3)Niacin은 항펠라그라인자로 nicotinic acid라고도 하며 동물조직 중에서는 대부분 nicotinamide 형으로 존재한다. 그러나 동물에서 유리형은 미량이고 대부분이 NAD(nicotinamide adenine dinucleotide)나 NADP(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate)로 되어 coenzyme으로 작용한다.생리작용으로는 여러 가지 탈수소효소의 coenzyme로서 작용하여 기질로부터 수소나 전자를 수용하는 작용을 하며 NAD가 환원형인 NADH로 되는 것에 의해 기질을 산화한다. 생성된 NADH는 다른 반응에서 수소 및 전자의 공여체가 된다. 세포질이나 mitochondria의 전자전달계에서 NADH는 산화되며 NADPH는 transhydrogenase에 의해 NAD를 환원시킨다. 그리고 NAD는 염색질(chromatin)의 고차구조 형성, DNA 합성 및 회복(repair), 세포의 분화나 암화에 관여하며 대장균(Escherichia coli)의 DNA ligase 반응에도 관여한다. 또 관절염이나 류머티스의 치료에도 효과가 있는 것으로 생각되고 있다.비타민 B6군비타민 B6군(pyridoxine, pyridoxal, pyridoxamine)은 항피부염인자로 알려져 있다. Pyridoxal은 아미노산대사에 관계하는 효소단백질의 lysine 잔기의 ε-아미노기와 Shiff 염기로 결합하고 있으며 aminotransferase, amino acid carboxylase, amino acid dehydrogenase, amino acid aldolase, racemase 등의 coenzyme로서 각종 아미노산의 대사에 관여하고 있다.비타민 B6 의존성의.Pantothenic acid가 부족하면 보효소 Coenzyme A의 부족에 의한 체중감소, 피부염, 탈모, 각종 기능장해(말초신경, 부신, 소화관, 항체생산, 생식), 알레르기 발작, 류머티스성 관절염, 코르사코프증후군(Korsakoff's syndrome) 등이 나타난다.비타민 H(biotin)비타민 H는 항난백장해인자, 효모증식인자로 알려져 있다. Biotin은 apoenzyme의 lysine의 ε-amino기와 공유결합하여 biotin 효소를 형성하고, 이 효소의 활성기가 되어 이산화탄소(CO2)의 전이에 관여한다. Biotin 효소는 ATP와 Mg2+를 필요로 하고 지방산, 아미노산, α-케토산의 대사에 관계한다.엽산(folic acid)Folacin(엽산군)은 pteroyl glutamic acid, pteroyl triglutamic acid, pteroyl heptaglutamic acid를 말하며 항빈혈인자로 알려져 있다. 이것은 젖산균의 증식인자로 시금치의 자기 소화액 내에서 발견되었으며, 그 후 간에서도 결정상태로 분리되었다. 천연에는 5, 6, 7, 8-tetrahydrofolate의 poly-γ-glutamate 유도체형으로 존재한다.Tetrahydrofolate(FH4)는 formate나 formaldehyde에서 유래하는 C1 단위의 formyl-, methenyl-, methylene-, methyl-, formimino- 등의 원자단을 전이하는 반응에 관계하는 효소의 coenzym이 되며, purine 염기나 pyrimidine 염기의 대사, glycine, serine, histidine, methionine 등과 같은 아미노산의 대사, 단백질합성 개시 등에 관여하고 있다.비타민 B12 (cyanocobalamin)비타민 B12는 항악성빈혈인자로서 간에서 발견된 코발트(Co)를 함유한 cobalamin으로 협의로는 cyanocobalamin을 말한다. 음식물 중의 비타민 B12는 위점막에서 당단백질인 내인자(Castle's f(tetrahydrofolate methyl transferase)에 의한 L-methionine의 합성이 알려져 있다. 이것은 methyl기 전이를 동반하는 반응으로 methylcobalamin은 methyl기 운반체로 작용한다.비타민 B12 결핍증은 섭취가 부족하거나 비타민 B12를 coenzyme으로 전환하는 과정에 장해가 있거나 아포효소의 선천적 이상에 의해 일어나다.비타민 C (ascorbic acid)비타민 C는 ascorbic acid라고도 하며 항괴혈병인자로 알려져 있다. 인간, 원숭이, 몰모트, 코끼리, 과실성 박쥐, 일부의 열대조류 이외의 동물에서는 L-gulono-γ-lactone oxidase를 가져 D-glucuronate에서 L-gulono-γ-lactone을 거쳐 합성할 수 있다. 인체에서 비타민 C의 농도가 가장 높은 곳은 부신과 뇌하수체이며 과잉의 것은 요 중으로 그대로 배설된다.Ascorbic acid는 수소원자를 1개 또는 2개 방출하는 것에 의해 강력한 환원력을 가져 collagen 전구체(tropocollagen) 중의 proline을 hydroxyproline으로 lysine을hydroxylysine으로 변화시킨다. Hydroxyproline은 collagen의 3중 나선구조를 안정화하는데 필수적이다.또 Dopamine도 ascorbic acid가 관여하는 hydroxylase에 의해 산화되어 L-norepinephrine이 되며 이외에도 몇 가지 hydroxylase가 ascorbic acid를 보조인자로 이용한다. 비타민 C의 여러 가지 생리적 특성 중 일부는 ascorbic acid의 환원력과 dehydroascorbic acid의 산화력에 의한 것이다.Ascorbic acid는 면역계에 대한 작용으로 cytochrome P-450의 증가나 전자전달계의 철이나 구리의 환원 등을 통하여 생체 이물질의 대사를 촉진한다. 그리고 항체인 면역글로불린 G(IgG) 및 M(IgM)의 생산을 증가시키고 보체 C1-esterase.

자연과학| 2003.09.24| 11페이지| 1,000원| 조회(359)

비타민, coenzyme, holoenzyme

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