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2005 국민건강영양조사 분석

2005년 국민건강영양조사 분석Ⅰ. 조사개요1. 조사목적국민건강영양조사의 검진조사는 국민의 주요 생체지표(신장, 체중, 체질량지수, 허리둘레, 혈압, 혈당, 혈중지질, 헤모글로빈)의 분포와 만성질환 유병률(비만, 고혈압, 당뇨병, 고지혈증, B형간염, 빈혈, 대사증후군) 및 관리지표(인지율, 치료율, 조절율)를 파악하고자 하였다.2. 조사대상조사대상은 전국단위 표본으로 추출된 4,000가구의 전체 가구원 중 만 1세이상이었다.만 10세미만 대상자는 신체계측만 실시하였고, 만 10세이상 대상자는 신체계측, 혈압 및 맥박 측정, 혈액 및 소변검사를 실시하였다.3. 조사방법20개의 검진조사팀(검진조사팀장, 검진조사원, 보건소 간호사, 보건소 임상병리사로 구성)이 조사지역의 검진장소에서 2005년 4월 13일부터 6월 18일까지 10주 동안 조사를 진행하였다. 검진조사는 접수, 조사 참여 동의, 채뇨, 혈압 및 맥박 측정, 신체계측, 채혈, 보충설문조사, 점검 및 추후일정 안내 등의 순서로 진행하였다.4. 조사완료율조사대상자 10,816명(조사대상자 현황표 기준) 중 7,597명이 검진조사에 참여하여 검진 조사 완료율은 70.2%였다. 10세미만의 대상자 1,334명 중 1,087명(81.5%), 10세이상의 대상자 9,482명 중 6,510명(68.7%)이 조사를 완료하였다. 10세이상의 조사완료자 6,510명 중 신체계측은 6,469명(99.4%), 혈압측정은 6,493명(99.7%), 임상검사는 6,412명(98.5%)이 조사에 참여하였다.Ⅱ. 조사결과1. 비만○ 평균 체질량지수(20세이상)는 남자 24.0㎏/㎡, 여자 23.3㎏/㎡였으며, 남자는 40대와 50대에서 가장 높은 반면, 여자는 연령이 증가함에 따라 60대까지 증가하다가 이후 감소함○ 비만 유병률(20세이상)은 남자 35.2%, 여자 28.3%였으며, 남자는 40대와 50대에서 높았고 여자는 50대와 60대에서 높았음○ 저체중 비율(20세이상)은 남자 3.6%, 여자 5.7%였으며, 20～29세 여 남자 109.0㎎/㎗, 여자 111.2㎎/㎗였으며,남자는 40대까지 증가하다가 이후 감소하였고 여자는 50대까지 증가 추세를 보이다가 이후 비슷한 양상을 보임○ 고LDL-콜레스테롤혈증 유병률(30세이상)은 남자 8.0%, 여자 8.6%로 여자가 높았으며, 특히 60대 이후에서 여자가 남자보다 2배정도 높았음(4) 중성지방○ 평균 중성지방(10세이상) 수준은 남자 145.1㎎/㎗, 여자 108.6㎎/㎗였으며, 남녀 모두연령이 높을수록 증가함. 40대의 중성지방 수준이 남녀 각각 183.3㎎/㎗, 112.4㎎/㎗로 성별에 따른 차이가 컸으며, 이후 남자가 60대부터 감소하면서 여자와 비슷한 수준을 보임○ 고중성지방혈증 유병률(30세이상)은 남자 23.7%, 여자 10.7%로 남자가 높았으며, 남자는 40대와 50대의 유병률이 높았고, 여자는 50대와 60대의 유병률이 높았음4. 당뇨병○ 평균 공복혈당(10세이상) 수준은 남자 94.3㎎/㎗, 여자 91.6㎎/㎗였으며, 남녀 모두 50대까지 계속 증가하다가, 남자는 60대부터 감소한 반면 여자는 70대까지 증가 추세임.○ 당뇨병 유병률(30세이상)은 남자 9.0%, 여자 7.2%였으며 남자는 50대까지 증가하다가 감소 추세인 반면, 여자는 연령이 높을수록 증가하는 추세임.○ 당뇨병 인지율(30세이상)은 남자 58.0%, 여자 66.5%, 치료율은 남자 48.6%, 여자 59.3%로 인지율과 치료율이 여자가 더 높았고, 당뇨병 치료자 중 혈당조절율은 남자 26.2%, 여자 19.4%로 남자가 더 높았음.5. 대사증후군○ 대사증후군 유병률(30세이상)은 남자 32.9%, 여자 31.8%로 성별에 따른 차이가 크지않음○ 남자는 50대까지 계속 증가하다가 이후 감소한 반면, 여자는 연령이 높을수록 뚜렷하게 증가하여 특히 70대 여자의 유병률은 63.4%로 남자 34.1%에 비해 거의 2배 정도 높은 경향을 보임6. 빈혈○ 평균 헤모글로빈 수준(10세이상)은 남자 15.1g/㎗, 여자 12.9g/㎗였고, 남자는 20대 이후140mmHg미만이고이완기혈압이 90mmHg미만인 경우로 정의하였다.3. 당뇨병공복시 혈당이 126㎎/㎗이상이거나 경구혈당강하제 복용 또는 인슐린 주사 투여 등의 당뇨병 치료를 하고 있는 경우를 당뇨병이라 정의하였으며, 공복시혈당이 110～125㎎/㎗인 경우를 공복혈당장애로 정의하였다.인지율은 당뇨병 유병자 중 의사로부터 당뇨병 진단을 받았다고 응답한 대상자로 정의하였으며, 치료율은 당뇨병 유병자 중 경구혈당강하제를 복용하거나 인슐린 주사를 투여한다고 응답한 대상자로 정의하였고, 조절율은 당뇨병 유병자 중 당화혈색소가 6.5%미만인경우와 당뇨병 치료자(혈당강하제 복용자 또는 인슐린 주사 투여자) 중 당화혈색소가6.5%미만인 대상자로 정의하였다.4. 고지혈증다음의 기준에 의해 고지혈증을 정의하였다.- 고콜레스테롤혈증 : 총콜레스테롤 240㎎/㎗이상 또는 콜레스테롤 강하제 복용- 저HDL-콜레스테롤혈증 : HDL-콜레스테롤 40㎎/㎗미만- 고중성지방혈증 : 중성지방 200㎎/㎗이상- 고LDL-콜레스테롤혈증 : LDL-콜레스테롤 160㎎/㎗이상 또는 콜레스테롤 강하제 복용5. 빈혈헤모글로빈 및 헤마토크리트가 다음의 기준에 모두 해당하는 경우를 빈혈로 정의하였다.6) 대사증후군아래에서 세 개 이상이 기준에 해당하는 경우9)를 대사증후군이라고 정의하였다.Ⅳ. 분석1. 비만: 20세이상 대상자의 평균 체질량지수는 남자 24.0㎏/㎡, 여자 23.3㎏/㎡로 남자가 여자보다 높았다. 연령별 비교시, 남자의 경우는 40대～50대에서 가장 높은 수준을 보인 반면, 여자는 연령이 증가함에 따라 60대까지 증가하다가 그 이후 감소하였다. 또한 남자는 소득이 높은 경우의 평균 체질량지수가 높은 경향을 보였으나 여자는 가구소득 및 교육수준이 낮은 경우의 평균 체질량지수가 더 높았다.20세이상 대상자의 비만 유병률은 남자 35.2%, 여자 28.3%였으며, 연령별 비교시 남자는 40대와 50대의 유병률이 높은 반면, 여자는 50대와 60대의 유병률이 높았다. 또한 남녀 모두에서 읍면지역의 주요한 위험요인으로 보고되고 있으며, 고콜레스테롤혈증, 저HDL-콜레스테롤혈증 및 고중성지방혈증으로 나눌 수 있다. 고지혈증에 영향을 미치는 요인으로는 성별, 당질, 섬유소, 지방산, 항산화비타민 등의 식사 요인, 비만, 흡연, 음주, 가족력, 스트레스 등이 알려져 있으며 고지혈증의 예방과 치료를 위해 이들 요인들의 적절한 관리가 필요하다.2005년 국민건강영양조사 결과, 30세이상의 고콜레스테롤혈증은 남자 7.5%, 여자 8.8%,저HDL-콜레스테롤혈증은 남자 47.9%, 여자 26.0%, 고LDL-콜레스테롤혈증은 남자 8.0%,여자 8.6%, 고중성지방혈증은 남자 23.7%, 여자 10.7%였다.성별 비교시 고콜레스테롤혈증과 고LDL-콜레스테롤혈증은 여자가 약간 높았으나, 고중성지방혈증과 저HDL-콜레스테롤혈증은 남자가 여자에 비해 높은 유병률을 보였다.고지혈증 유병률 (성별, 30대 이상)4. 당뇨병1) 당뇨병 유병률: 30세이상 대상자의 당뇨병 유병률은 남자 9.0%, 여자 7.2%였으며, 연령이 증가함에 따라 유병률이 증가하였다. 50대까지는 남자의 당뇨병 유병률이 여자보다 높았으며 특히 50대 남자의 당뇨병 유병률이 16.6%로 여자 8.1%와 비교시 2배 정도 높았다. 이후 남자의 당뇨병 유병률은 감소한 반면 여자는 증가하여 70대에는 여자의 당뇨병 유병률이 더 높았다.동지역거주자에 비해 읍면지역거주자의 당뇨병 유병률이 높았으며, 남자의 경우 교육수준이 낮을수록, 여자의 경우 교육 및 가구소득수준이 낮을수록 당뇨병 유병률이 높았다.시도별 비교시, 전남, 전북, 경북의 유병률이 높았으며 경기, 울산이 낮은 유병률을 보였다.연도별 비교시, 남자는 1998년에서 2001년에 크게 감소하였다가 2005년에 다시 증가하였고, 여자는 1998년도 이후 지속적으로 감소하는 경향이었다.2) 당뇨병 관리현황: 30세이상 당뇨병 유병자 중 인지율은 남자 58.0%, 여자 66.5%로 여자가 더 높았다. 연령별로 남녀 모두 60대가 각각 73.3%, 81.2%로 연령별로 뚜렷한 경향을 보이지 않았다.10세이상 대상자의 빈혈 유병률은 남자 2.2%, 여자 9.5%로 여자가 남자에 비해 4배이상 높았다. 연령별 비교시, 남자는 40대부터 증가하기 시작하여 70대의 경우 18.9%까지 증가하였으며, 여자는 30대에서 12.1%로 가장 높았고 이후 50대에 5.0%까지 감소하였다가 60대 이후부터는 다시 증가하였다.빈혈 유병률은 남자의 경우 읍면지역거주자, 낮은 교육수준, 농어업종사자에서 높은 반면 여자의 경우 교육수준, 직업별, 가구소득수준별로 남자에 비해 큰 차이는 없었다.시도별 비교시, 전북이 6.6%로 가장 높고 대전이 4.9%로 가장 낮았으나, 전반적으로 지역간 빈혈 유병률은 큰 차이가 없었다.연도별 비교시, 남녀모두 1998년도 이후 지속적으로 감소하는 추세를 보였다.7. B형간염: 10세이상 대상자의 B형간염 표면항원 양성률은 남자 4.4%, 여자 3.0%로, 남자가 여자에 비해 높았다. 연령별 비교시, 남자의 경우 20～50대, 여자 50대의 양성률이 5～6%로 높았으며, 남녀 모두 10대와 70대의 유병률이 낮았다(그림 60). B형간염 표면항원 양성률은 남녀모두 동지역 거주자에서 높았으며, 직업별로는 남자의 경우 사무직 종사자가 6.6%, 여자의 경우 기능단순노무직 종사자가 5.3%로 다른 직업에 비해서 높았다.시도별 비교시, 서울이 4.1%로 높고 충남이 3.1%로 낮았으나, 전반적으로 지역별 차이는 크지 않았다.연도별 비교시, 유병률은 1998년과 2001년이 비슷하였고 2005년도에는 감소하였다. 성별로는 남자의 경우 1998년 이후 약간씩 감소하였으며 여자의 경우 2001년에 약간 증가하였다가 2005년에 다시 감소하였다.Ⅴ. 나아가야 할 방향1. 총평: 고령화 및 생활습관의 변화로 비만, 고혈압, 당뇨병, 고지혈증등심?뇌혈관질환의 선행질환이 증가하고 있으며 심?뇌혈관질환은 건강위험행태 및 선행질환의 조기발견 및 관리를 통하여 예방가능하다고 알려져 있다.2005년 국민건강영양조사결과 비만유병률(20세

자연과학| 2008.04.21| 13페이지| 2,000원| 조회(1,298)

국민건강, 2005, 영양조사, 국민건강영양조사, 영양조사분석

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Salmonela 분리 및 배양

ExperimentalTitleSalmonela 분리 및 배양Worker NamePrinciple◎ 목표 및 원리: 식품에는 식중독을 일으킬 수 있는 균이 많이 존재한다. 그 중에 닭에서 직접 salmonella 균을 검출해 보고 그 균이 salmonella인지 확인한다.Material,Regents &Apparatus① 배지 : BPW, TT broth, RV broth, XLD Agar, TSI Agar② 재료 : 생닭③ 기구 : petri dish, 멸균 pipette, whirl-pak, autoclave, incubator, 백금 이, clean bench, vortex, balance, 균질기, 멸균백, 시험관, 알콜램프Procedure1) 증균배양① 하루 전에 생닭을 미리 사서 balance에 whirl-pak을 넣고, 토막 난 생닭의 무게를재고(약 66g), 여기에 미리 만들어 둔 배지인 BPW를 저울의 무게를 보고 넣는다.(약 554g). 그리고 이것을 37℃에서 18~24시간 배양한다.② 배양 후 ①의 것을 취해서 10㎖의 TT broth가 들어있는 시험관에 1㎖ 분주하고RV broth가 들어있는 시험관에 0.1㎖ 분주한 후 37℃에서 20~24시간 배양한다.2) 분리 배양TT broth, RV broth에 증균배양된 배양액을 XLD Agar 배지에 도말(Streak)한 후 37℃ 에서 20~24시간 배양한다. 배양 후 평판별로 의심되는 집락(XLD에서 colony가 생성되면가 많아져 XLD에 있는 Fe과 결합해 검은 색이 된다.)을 선택하여 집락표면의 중심 부로부터 3개 이상을 취해 특성검사를 실시한다.3) 확인시험검은색 집락이 형성되면 중심부분을 백금선으로 취하여 TSI Agar(Slant)에 천자하여 37℃에서 20~24시간 배양한다.(조원 각자) E-coli 역시 사면배지에 천자한다.(조별로 1 개씩)Result &CalauationXLD 배지에 salmonella로 의심되는 검은색의 colony 가 나타났다.확인시험으로 TSI 사면배지에 접종 배양했는데 가스를 형성한 것을 볼 수가 있었다.그리고 검은색으로 변한 것을 보아가 철과 결합한 것을 확인할 수 있다.E.coli를 보면 대장균 같은 경우는 배지의 색이 노란색으로 변한 것을 확인할 수 있었 고 살모넬라와 마찬가지로 가스를 형성하는 것을 볼 수 있다.DiscussionSalmonella spp.살모넬라균은 사람, 동물에 감염되며 또한 환경에도 흔히 존재할 수 있는 병원균으로서 식중독에 관련되는 주요 혈청형은 Salmonella typhimurium 및 S. enteritidis등이다. 유럽 및 미국등에서 1984년이후 살모넬라에 의한 식중독의 발생빈도가 증가하기 시작하였고, 1988년 이후로 전세계적으로 Salmonella enteritidis에 의한 식중독의 폭발적인 발생으로 살모넬라식중독에 대한 관심이 크게 고조되어 왔다.1) 균분리 및 동정(1) 증균배양시료액 25㎖(g)에 225㎖( 또는 90㎖)의 BPW를 첨가하여 36 1℃에서 18∼24시간 배양한 후 이 배양액을 2종류의 증균배지, 즉 10㎖의 TT broth 또는 SC broth에 1㎖를 첨가함과 동시에 10㎖의 RV broth에 0.1㎖를 첨가하여 각각 36 1℃ 및 42 0.5℃에서 20∼24시간동안 증균배양한다.(2) 분리배양각각의 증균배양액을 BS agar 및 XLD agar (또는 DCA, HE agar, BGSA)배지에 도말한 후 36 1℃에서 20∼24시간 배양한다. 평판별로 의심되는 집락(유당 비분해(무색) 및 황화수소(H2S) 산생으로 검은색)을 선택하여 집락표면의 중심부로 부터 3개이상을 취하여 특성검사를 실시한다.(3) 확인시험의심스러운 집락에 대해 TSI agar 또는 LIA 사면배지에 천자하여 37 1℃에서 20∼24시간 배양한다. TSI 및 LIA 검사결과 살모넬라균으로 추정되는 균에 대해서는 그람음성의 간균임을 확인하고, Indol(-), MR(+), VP(-), Citrate(+), Urease(-), Lysine(+), KCN(-), malonate(-) 시험등의 생화학적 검사를 실시한다.생화학적으로 확인된 살모넬라균은 혈청학적 검사(O항원 및 H 항원 응집반응)를 실시한다. 살모넬라진단용 항혈청을 사용한 응집반응 결과에 따라 균종을 결정한다. 먼저 살모넬라 O혼합혈청시험으로서 다가 O항혈청을 사용하여 슬라이드 응집반응검사를 실시한후 살모넬라 O인자 혈청시험 즉 A, B, C, D, E군의 항혈청을 사용하여 슬라이드 응집반응을 실시하여 O혈청형을 결정한다. H인자 혈청시험은 편모(H)항혈청 즉 a, b, c, d, e, h, g, k, l , r, y, 1.2, 1.3, 1.5, 1.6 등에 대한 시험관법으로 응집반응을 실시하여 결정한다.2) 혈청학적 검사Salmonella균의 혈청형동정은 somatic(O) antisera와 flagella(H) antisera와의 각각의 응집 여부로써 분류된다.Salmonella로 의심되는 균은 먼저 Salmonella O Poly antisera A. B. C1. C2. D. E.등을 사용하여 슬라이드상에서 혈청학적 검사를 한다. 1분이내 응집을 보아 Poly group를 결정하고 Factor antisera로 검사한다. H 항혈청은 tube agglutination technique에 의해 검사하여 최종 혈청형을 동정한다.먼저 살모넬라 O혼합혈청시험으로서 다가 O항혈청을 사용하여 슬라이드 응집반응검사를 실시한 후 살모넬라 O인자 혈청시험 O 2, O 4, O 5, O 6, O, 7, O 9 등의 인자항혈청을 사용하여 슬라이드 응집반응을 실시하여 O혈청형을 결정한다. H인자 혈청시험은 편모(H)항혈청 즉 a, b, c, d, e, h, g, k, l , r, y, 1.2, 1.3, 1.5, 1.6 등에 대한 시험관법으로 응집반응을 실시하여 결정한다.(1) O 응집반응국립수의과학검역원 및 항혈청제조회사(Difco, Denka등)의 지시대로 항혈청을 이용하여 평판에서 응집반응을 실시한다. TSI 또는 선택배지에서 자란 균을 이용하되 멸균식염수로 자가응집유무를 먼저 확인한 후 자가응집이 일어나지 않은 균을 항혈청에 응집하는지를 확인한다. 만약 자가응집이 일어나면 생화학성상시험을 거쳐 smooth type을 선택하여 검사한다. 분리균이 B group에 응집하였다면 이 그룹에 속해있는 S. typhimurium의 O항원 구조는 1, 4, 5, 12 이므로 4 및 5 factor serum으로 응집유무를 확인해야 하며, D group에 응집하는 균은 S. enteritidis를 확인하기 위하여 factor 9 serum으로 응집반응을 실사한다. O 항혈청에 응집이 일어나는 균은 H 시험관응집시험을 실시한다.(2) H 응집반응tryptic soy broth 또는 M(manose) broth에 시험할 균을 접종하여 37℃, 24시간동안 배양하여 MacFarland No. 3정도 되도록 조정한다. 0.6% formalin-saline을 동량 첨가하여 실온에 1시간 방치한다. 시험관에 제조 균액 1ml씩 분주하고 의심되는 H 항혈청을 선택하여 제조회사의 지시대로 항혈청을 희석한 후 첨가한다. 대조군으로 다른 시험관에 제조한 균액 1ml와 식염수를 혼합하여 자가 응집유무를 관찰한다. 시험관을 48-50℃ 항온수조에 1시간 방치한 후 응집유무를 관찰한다.3) 신속검출기법살모넬라를 검출하기 위한 간접적인 여러 가지 방법이 AOAC에 의해 공인되어 있다. 그 AOAC 공인방법으로는 Hydrophobic grid membrane filter(ISO-GRID), DNA hybridization(Gene-Trak), Fluorogenic and Colorimetric enzyme immunoassay를 이용하는 방법으로는 TECRA visual immunoassay(Bioenterprises Pty Ltd.), Salmonella-Tek(Organon Teknika Corp.), Assurance Salmonella EIA kit(Biocontrol systems Inc.), Automated conductance(Mathus system)등이 있으며, 이외에도 Q-Trol Salmonella Detection kit (Dynatech Laboratories Inc.) Immunodifusion(Biocontrol 1-2 test), VIDAS(bioMerieux), PCR(polymerase chain reaction)등의 방법이 알려져 있다.

자연과학| 2007.12.13| 4페이지| 1,500원| 조회(922)

살모넬라, Salmonella, 증균배양, 황화철, 닭의미생물

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환경 중의 미생물 배양

ExperimentalTitle환경 중의 미생물 배양Worker NamePrinciple◎ 목적 : 환경중의 미생물을 배양하여 멸균과 무균조작의 중요성을 알도록 한다.◎ 환경 및 식품중의 미생물: 인간이 생활하는 환경에는 많은 종류와 양의 미생물이 존재하고 있다. 이러한 종류와 양은 인간의 생활전체로부터 모든 미생물을 배제하는 것이 불가능할 정도로 많다. 또한 미생물은 토양, 물, 공기, 많은 생물 중에서 활발하게 증식을 반복하며, 지구상의 생물체에 대해 매우 중요한 역할을 담당하고 있다. 이러한 환경 중에서 생산되는 식품에는 당연히 미생물이 존재한다. 일반적으로 시판되고 있는 일상식품에 항상 존재하는 평균 생균수는 1g당 103-105개, 많은 것에는 107개에 달하고 있다. 이러한 일반 식품에는 일정량까지의 미생물이 존재하는 것이 보통이며, 존재가 극히 적은 것은 특수한 가공 조건하에서 제조된 것, 예를 들면, 살균한 통조림 등으로 제한된다.미생물은 적당한 조건하에서 증식하며, 무리를 지어 생존한다. 이러한 군생을 미생물군(Microflora)라고 부른다. 식품 중에 존재하는 미생물은 당연히 식품과 함께 섭취된다. 따라서 식품 중에 존재하는 종류와 양이 일상적으로 존재하는 수준으로 존재한다면 문제는 발생하지 않는다. 대부분은 위내의 염산에 의해 불활성화 되기 때문이다. 또한 위산에 저항성을 가지는 것도 있지만 이들은 십이지장에서 담즙산에 의해 증식이 저지되며 그 후 소장에 이른다. 여기에서는 장내 세균의 미생물군이 존재하고 있어 이들에 의해 제거될 수도 있다. 결국, 식품중의 미생물은 살균되어 제거된다. 따라서 식품중의 미생물이 증식 발현할 가능성은 대단히 적다. 그러나 식품중의 미생물의 양이 일정량을 초과하면 식품은 변질된다. 이 변질예방을 목적으로 식품가공을 행하고 있으며, 발효식품의 제조가 이러한 목적으로 행해지고 있다. 발효가 목적이 아닌 경우에는 과량의 미생물에 의한 부패 등으로 인해 식용 불가능하게 변질되며, 병원미생물이 혼입, 증식한 경우는 식중독의 원인이 된다.Material,Regents &Apparatus○ 평판배지 (Sabouraud dextrose agar, nutrient agar)○ 인큐베이터○ 알코올, 알코올램프, 집게 등Procedure1. 시료 채취 장소를 선택하여 petri dish 뚜껑을 열어 평판배지를 공기 중에 30~60분 간 방치한다.2. 멸균 생리식염수를 적신 솜으로 실험대 등의 표면을 닦아 평판배지 표면에 묻힌다.3. 신체(머리카락, 손 등)로부터 시료를 평판배지 위에 놓는다.4. 신체의 일부를 멸균 생리식염수를 적신 솜으로 닦아 평판배지 표면에 묻힌다.Result &Calauation발톱 다리털=> 발톱을 배지에 넣을 때 바로 묻지 못하고 다른 곳을 찔렀었는데 그곳에도 세균이 증식해 있었다. 또한 다리털을 넣었던 배지에는 약간 노란빛이 나는 세균이 증식해 있었다.세균의 양은 발톱이 훨씬 많았고, 다리털에는 약간 노란빛의 세균이 자란 것이 특징이었다.Discussion☞ 이번 실험은 두 가지를 하였는데 공기 중의 미생물을 배양하는 것과 신체의 일부를 이용해 배지에 미생물을 배양하는 것이었다. 나는 그 중에 신체의 일부를 취하여 배지에 미생물을 배양하였는데 발톱과 다리털을 실험에 이용하였다. 실험재료 선정의 이유는 나의 생활습관 때문에 하반신은 하루에 한번 저녁에 샤워 할 때만 씻기 때문에 하반신의 일부에 얼마나 많은 세균이 자라는지가 궁금하였고, 특히 신발은 자주 빨지 않고 발같은 경우 신발에서 지내는 시간이 많기 때문에 세균이 얼마나 많을지가 궁금하였기 때문이다. 그리고 결과는 역시 나의 예상대로 많은 세균이 나온 것을 알 수가 있었다. 예전에 hand printing 을 하였을 때보다 면적당 세균 집락수나 집락의 크기가 더 컷다.세균이 많은 이유는 위에서 말한 것과 같이 나의 생활패턴이 하반신은 하루에 한번 씻는데 전날 저녁에 씻은 이후로 씻지 않고 학교에서 수업을 받고 그러던 중에 취한 발톱과 다리털이기에 세균이 많이 있었을 것이다. 게다가 신발과 바지는 잘 빨지 않고 오래 입는 경우가 대부분이기에 바지와 신발에서 많은 세균이 있을 것이다. 그렇기 때문에 이러한 세균들이 내 신체에 옮겨져 오게 되고, 그로인해 이번실험의 결과를 얻을 수 있었다.앞으로 이번 학기동안 계속 미생물실험을 하게 되는데 이렇듯 나의 신체에 많은 세균이 있다는 것을 알고 나니 다른 실험을 하는 동안 나의 신체 일부가 배지에 스치거나 공기 중에 오래 방치해둘 경우 상당한 오차가 발생할 것이라는 것을 알 수 있게 해준 실험이었던 것 같다. 또한 내가 생활을 하면서도 그러한 세균들을 내가 먹을 수도 있을 것이라는 생각에 앞으로 내 몸의 위생관리에도 신경을 써야 할 것이다.▷ 미생물의 종류와 특성○ 세균(Bacteria): 세균은 분열에 의해 증식하는 분열균류이다. 병원미생물 대부분이 세균이며 식품위생상 가장 중요하다. 이들은 살아있는 단세포 미생물로서 여러 환경에 의하여 식품에 오염될 수 있다. 세균은 환경 중에 다량 존재하며 2차 오염 등 점차적으로 증식하면서 오염된다.식품의 위해요소 중에서 세균을 중요하게 취급하는 이유는 세균들 중에는 인체에 섭취되어 경구전염병, 감염형 식중독 등 감염증을 나타내는 것도 있고, 식품에 증식하여 독소를 생성하는 것도 있기 때문이다.세균은 형태에 따라서 구균(coccus), 간균(bacillus), 나선균(spirillum)으로 분류한다. 구균은 종류에 따라 세포의 배열상태가 특이하므로 그 배열상태에 따라 단구균, 쌍구균, 4연구균, 8연구균, 연쇄상구균, 포도상구균으로 분류된다. 간균은 구균처럼 여러 가지 특이한 배열을 하지 않는다, 가끔 쌍을 이루거나 연쇄상으로 배열하는 경우가 있는데 이것을 연쇄상간균(streptobacillus)이라 하며 디프테리아균에서 볼 수 있다. 간균은 길이가 폭의 2배 이상인 것을 장간균, 그 이하인 것을 단간균이라 한다. 나선균에는 나선의 정도가 불안정하여 마치 짧은 콤마처럼 생긴 호균과 S자형으로 된 spirillum, 여러번 구부러진 spirohaeta가 있다.○ 곰팡이(Molds): 곰팡이는 분류학상 진균류에 속하며 포자가 발아한 후 실 모양의 균체세포를 형성하여 균사상으로 발육하는 사상균으로 광합성능이 없고 진핵세포를 가진 다세포 미생물이다. 배지면에 착생한 균사는 분지하고 신장하며 균사체총이라 한다. 곰팡이는 주로 자실체에 만들어진 무성포자에 의해 번식한다. 이 포자가 공기 중에 비산하고, 수분이나 영양 등이 적당한 환경에서 발아하여 균사체로 발육한다. 곰팡이는 무성포자 외에 유성포자를 만드는 것도 있다.곰팡이가 식품에 증식되었을 때 육안으로도 쉽게 확인할 수 있다. 식품에 곰팡이가 증식되면 식품이 변패되며, 때로는 독소가 생성되어 사람에게 질병, 감염, 알레르기 반응 등을 나타낸다.곰팡이는 낮은 온도에서 뿐만 아니라 습하든지 건조하든지, pH가 높든지 낮든지, 삼투압등 어떤 조건에서도 대부분의 식품에서 증식할 수 있다. 냉동은 곰팡이의 증식을 억제하지만 이미 존재하는 곰팡이를 죽이지는 못한다. 곰팡이 독은 대개 가열조리에 의하여 파괴되지 않는다. 곰팡이로 인한 위해를 방지하는 중요한 방법은 곰팡이가 비정상적으로 핀 식품은 버리는 것이다.○ 효모(Yeast): 효모는 진핵세포로 된 고등미생물로서 주로 출아에 의하여 증식하는 진균류를 총칭한다. 알코올 발효능이 강한 균종이 askg아서 예부터 주류의 양조, 알콜 제조, 제빵 등에 이용되어 왔다. 그리고 식,사료용 단백질, 비타민, 핵산관련물질 등의 생산에도 큰 역할을 하고 있다.

자연과학| 2007.12.13| 5페이지| 1,000원| 조회(393)

식품, 평판, 무균, 병원미생물, 환경미생물

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혼합희석평판배양법

ExperimentalTitle혼합희석평판배양법Worker NamePrinciple◎ 목표 : 혼합희석평판배양법을 이용하여 생균수를 측정하여 생균수 측정방법을 익힌다.◎ 배양액 중에 무수히 많이 존재하는 미생물도 이것을 적절히 희석하면 하나의 평판에 소수의 독립된 큰 colony를 형성시킬 수 있고 평판배양 위에 독립된 하나의 colony는 거의 대부분인 경우 1개의 미생물이 번식하여 육안으로 볼 수 있을 정도의 집단으로 증식된 것이라 생각할 수 있다. 이 경우 모든 균을 확인할 수 있는 것과 같은 colony를 만들 것, 그리고 한 개의 균이 하나의 colony를 만드는 것을 전제로 하고 있기 때문에 배지, 배양조건의 선택과 배양액의 희석도가 중요하다.colony수를 계산하는 데에는 Petri dish의 뒷면으로부터 육안 또는 확대경을 사용하여 계산한다. 계산한 것은 펜 등으로 표시하여 중복되지 않도록 한다. Colony counter를 사용하면 용이하다. 30～300개 정도의 colony를 전부 count한다. 많을 때에는 Wolffhugel 계산반(1㎠의 구획으로 나누어져 있음)등의 기기를 사용하고 30구획 정도의 colony를 count하여 면적비로부터 전체 colony를 계산한다. 최종 균 농도를 맞추기 위해서는 희석농도를 정확히 하여야하기 때문에 희석이 중요하다. 희석을 할 때 용량을 정확히 취해서 최대한 균수 측정의 오차를 줄여야 한다.Material,Regents &Apparatus재료 : 우유, 멸균 생리식염수, Plat count agar기구 : petri dish, pipette, vortex, 알코올램프Procedure◎ 효모액 희석 → 분주 → 배지응고 →1~3일 배양 →colony 수 세기(1) 우유를 멸균 생리식염수에 희석하여 준비한다.희석배수가 10-4 ~ 10-6인 희석균액을 만든다.(2) 각각의 희석액 1㎖을 취하여 petri dish에 분주한다.(3) 멸균된 YM한천배지를 적당히 식혀 희석액이 들어있는 petri dish에 넣고 회전시켜 고르게 편 후 배지를 응고시킨다.(4) petri dish의 배지가 응고하면 incubator에서 1~3일간 거꾸로 배양한다.(5) Colony가 형성된 Petri dish에서 나타난 Colony수를 센다.▶ 주의할점어떤 세균은 사슬 형태나 덩어리 형태처럼 여러개의 세포가 모여 있는 상태로 존재한 다는 점이다. 따라서 집락을 형성하는 단위가 한 개의 세포가 아닌 여러 개의 세포일 수 있다는 점이다. 그러므로 평판배양에서 사용하는 단위는 세균수가 아닌 집락형성 단위(colony forming unit : CFU)이다.Result &Calauation10-6 colony수 각각 2개, 3개10-5 colony수 각각 4개, 4개10-4 colony수 각각 15개, 17개=> 이번 실험은 집락수가 30~300인 것이 하나도 나오지 않았다. 그래서 이번 실험은 우리가 dilution의 선택이 잘 못되었다는 것을 알 수 있었다. 그래도 가장 가까운 값을 가진 시료로 집락수를 산정해 보았다.시료중의 세균 = 집락수(colony) × 희석배수= {(15+17)/2} × 104 = 1.6×105 CFU/mlDiscussion◎ 이번 실험은 우유의 생균수를 측정하는 실험이었는데 실험 시작전에 우유의 생균수가 약 105∼106 정도가 될 것이라는 예상치를 가지고 실험에 적용할 dilution을 정하였다. 실험조교의 말에 의하면 E-coli를 배양하여 우유에 첨가하였으며, 약간의 상온에서의 시간이 지났으므로 예상치 정도에서 약간 높을 수도 있을 것이라는 말을 들었다. 그래서 우리조는 dilution을 104∼106로 설정을 하고 희석을 시작하였다. 하지만 실험을 하고 결과를 확인해 보니 예상치보다 세균의 수가 적었다는 것을 알 수 있었다. 그래서 우리조는 생균수 측정에 적합한 colony수를 얻지 못하였다.다른 조의 실험 결과를 보았을 때 약 103의 dilution에서 155개의 colony가 얻어졌다는 것을 보았다. 즉 세균의 수는 예상치보다 적은 약 1.55×105정도로 추정이 된다.이번 실험에서 우리조는 정확한 값을 얻지 못하였지만 생균수 측정법에 대해 배우는 실험이 되었고, 생균수 측정법에 대해 간략히 조사를 하여보았다.▶ 생균수 측정법: 생균수는 대상으로 하는 식품 중의 총 생균수라는 뜻은 아니며 일정한 조성의 배지에서 일정 온도로 유지하여 일정 시간 후에 한천 평판 위에 형성된 호기성균의 colony 수를 나타낸 것이다. 생균수 측정에 가장 많이 사용되는 방법은 시료를 적당히 희석하여 한천배지에서 배양한 다음 colony를 형성하는 균의 수를 측정하는 평판계수법(plate count)이다. 생균수 측정에 의하여 얻어진 균의 수는 집락 형성단위(cfu/ml 또는 cfu/g) 로 표시하는데 이것은 각각의 colony는 한 개의 단일 세표에서 유래되기도 하지만 세포 집단으로부터 얻어질 수도 있기 때문이다. 평판계수법에는 혼합희석평판배양법과 평판도말배양법 등이 있다.→ 혼합희석평판배양법시료가 고체나 반유동체의 경우에는 시료의 1g 또는 10g 정도를 무균적으로 채취 칭량하여서 10배량의 멸균 생리식염수를 첨가하고 blender를 이용하여 균질화한다. 이것은 원액으로 하여 10배씩 단계적으로 적당한 배수로 희석하여 평판배지 1개에 30~300개의 colony가 형성되도록 한다. 1ml의 시료액 또는 각 단계 희석 시료액 을 멸균 petri dish 2~5장씩에 넣는다. 미리 멸균하여 굳지 않은 정도(45~50℃)로 식혀둔 한천배지를 15~20ml씩 무균적으로 주입하고, petri dish 뚜껑에 배지가 붇 지 않도록 주의하면서 시료와 배지를 잘 혼합하여 평판배지를 만들고 배양한다. 적 정 기간 배양한 후 곧 30~300개의 colony가 발생한 평판배지의 colony 수를 측정 하고 희석 배수가 동일한 평판배지의 colony 수를 평균한 값에 그 평판배지의 희석 배수를 곱하여 시료 1g 또는 1ml 중의 세균수를 산출한다.→ 평판도말배양법미리 petri dish 내에 한천배지의 평판배지를 만들어 건조시켜 두고 평판배지 위에 적당히 희석한 시료를 0.1ml 접종한 후 멸균 conradi봉(spreader)으로 평판배지 표 면에 골고루 펴서 분산시킨 다음, 배양하여 나타난 colony 수로부터 균수를 계산한 다.▶ 표준한천평판배양법에 의한 생균수 측정의 참고규약 항목1. 확산집락 없이 30~300개의 집락이 발생한 평판을 선택하여 총 집락수를 센다.2. 연속 희석단계에서 30~300개 범위의 집락이 얻어지는 경우에는 각 희석단계와 함께 집락수에 희석배수를 곱하여 균수를 산출한 후, 그 비율에 따라 다음의 방 법으로 세균수를 계산한다.

자연과학| 2007.12.13| 4페이지| 1,000원| 조회(2,332)

colony, 평판배양법, 집락, 혼합희석, 효모액

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항생제 감수성 시험

ExperimentalTitle항생제 감수성 시험Worker NamePrinciple◎ 목표 및 원리: 여러 항생제를 이용하여 특정세균에 대한 감수성 평가를 해봄으로써 각 항생제에 대해 알아보고 임상적으로 적절한 항생제를 사용함으로써 항생제 오용 및 남용을 막을 수 있는 기술을 익힌다.◎ 항생제항생제는 일정한 간격으로 지속적으로 복용하여 균을 죽일 수 있는 최소의 혈중 농도를 항상 유지해 주어야 한다. 그리고 증세가 완전히 없어진 후에도 2∼3일은 더 사용해야 한다. 증세가 없어졌다고 해도 몸 안에 균이 남아 있을 수 있기 때문에 이럴 때 항생제의 사용을 중단하면 남아 있던 균들이 내성균으로 변할 수 있기 때문이다. 내성균은 다른 균에도 내성을 전이시켜서 내성균이 계속 늘어나게 하기 때문에 내성이 생기면 항균력이 더 강한 항생제를 사용하든지 다른 계열의 항생제로 바꾸어야 한다. 항생제는 다음과 같이 분류할 수 있다.① 페니실린(penicillin)류 : 세균의 세포벽 합성을 억제함으로써 항균작용을 한다. 경구투여했을 때 일반적으로 잘 흡수되지만 초기제제들은 위산에 의해 불활성화한다. 화농성구균 등 대부분의 그람양성균과 임균·매독균 등에 강력한 효과가 있다. 페니실린에 감수성이 없는 세균감염증과 페니실린의 남용으로 생긴 내성균에 사용해서는 안된다. 부작용은 적은 편이지만 알레르기 반응에 의한 과민반응은 치명적이므로 투여하기 전에 피부반응 시험을 하는 것이 좋다.② 세팔로스포린(cephalosporin)류 : 병원균의 세포벽 합성을 억제하여 살균작용을 한다. 페니실린에 저항성이 생긴 포도상구균 등의 그람음성균뿐 아니라 프로테우스(proteus), 세라티아(serratia), 엔테로박테르(enterobacter) 등에도 효과가 있다. 경구투여를 하면 흡수가 잘 되지 않기 때문에 근육 또는 정맥주사를 사용한다. 부작용은 알레르기 반응 외에는 별로 없지만 발진, 설사, 백혈구 감소, 간 기능 이상 등이 올 수 있다.③ 아미노글리코사이드(aminoglycoside)류 :을 억제하며 항균범위가 비교적 넓다. 정맥 또는 근육주사로 투여한다. 부작용은 제8뇌신경에 독작용을 나타내어 청각 및 평형장애를 일으키는 이독성과 신장독성이 있으며 신경근 차단을 일으킬 수 있다.④ 테트라사이클린(tetracycline)류 : 화학적으로 테트라사이클린핵을 가지고 있으며 미생물의 리보솜에서 t-RNA의 전사를 방해하여 단백질합성을 억제함으로써 항균작용을 한다. 그람양성균에 효과가 있지만 페니실린보다는 약하다. 살모넬라, 프로테우스 등의 그람음성균의 감염, 서혜림프육아종증, 연성하감 등에 효과가 있다. 부작용으로 오심·구토·설사·구내염·소장결장염을 일으키고 균교대현상에 의해 장내 정상 세균총의 변화로 칸디다증을 일으켜 소화관 및 점막의 손상을 일으킨다. 투여 후 광선과민증으로 홍반이나 부종을 일으키며 대량으로 투여했을 경우 간장장애를 일으킬 수 있다. 임산부·신생아·소아에게 신중히 투여해야 하는데 태아의 골격 발육을 지연시켜 기형아가 태어날 수 있으며 유즙으로 약물이 배출될 수 있다.⑤ 클로람페니콜(chloramphenicol) : 그람양성균, 장티푸스균·변형균 등의 그람음성균, 리케차 및 대형 바이러스, 다른 항생제에 저항성이 있는 감수성균 감염에 효과가 있다. 경구투여 및 정맥 내 주사한다. 알레르기성 급·만성결막염, 결막염 등에 점안액으로도 투여하고 세균성 질염에는 좌약으로도 사용한다. 부작용으로 위장장애, 설염, 피부발진, 균교대 현상이 일어나고 특히 신생아의 경우 대사를 못하므로 복부팽창, 불규칙호흡, 신경성허탈, 혼수 및 사망까지 초래한다. 수유기의 유아, 소아, 임산부에게는 투약하지 않는 것이 좋다.⑥ 폴리펩티드(polypeptide) 항생제 : 인체의 세포막에 작용하여 전신에 투여했을 때 신장 독성을 나타내므로 거의 사용하지 않지만 국소투여용으로 사용한다.⑦ 퀴놀론(quinolone)류 : 광범위 항생제이다. 세균 DNA를 초코일(supercoil)로 압축하는 효소인 DNA 선회효소를 억제한다. 그람양성균과 특히 녹농균, 살모넬라 등현저한 항균력을 나타낸다. 경구로 잘 흡수되어 조직 및 세포로 잘 침투하며 대부분은 신장으로 배설된다. 부작용은 드물지만 오심·구토·발진·현기증·두통 등이 일어날 수 있다. 항진균제와 항바이러스제도 항생제에 속한다.Material,Regents &Apparatus① 배지 : Muller Hinton Broth, Muller Hinton Agar② 균주 : Salmonella enteritidis③ 기구 : petri dish, 멸균면봉, autoclave, incubator, vortex, 시험관, 알콜램프④ 항생제 디스크 : Tetracycline, Ampicillin, VancomycinProcedure① Salmonella enteritidis를 미리 Muller Hinton Broth에 접종하여 35℃에서 2~6시간배양한다.② 배양한 후 배양액을 Muller Hinton Agar에 멸균면봉을 이용하여 고르게 도포한다.③ 평판을 3~5분간 말리고 15분 이내에 항생제 디스크를 배지 위에 접종한다.④ 내성 여부는 35℃ 배양기에서 16~18시간 배양 후 균 억제대의 크기를 기록하여판정한다.Result &Calauation< 항생제 시험 결과 >=> 항생제로 Tetracycline, Ampicillin, Vancomycin 을 사용하였는데 Vancomycin 에서는 항생제의 효과가 거의 없었고, Ampicillin에서 19mm, Tetracycline 에서는 26mm 의 지름을 측정할 수 있었다. 실험 결과만으로 보면 Vancomycin에서는 내성을 가지고 있고 Tetracycline와 Ampicillin에서만 감수성을 보인 것으로 결과를 정리할 수 있다. 그에 대한 기준은 아래와 같다.AntimicrobialAgentCodeDisc PotencyZone DiameterInterpretive Standards(mm)E-coli ATCC25922Resis-tantInter-mediateSuscep-tibleAmpicillin AM-10 10㎍Enterobact V.cholerae≤1314~16≥1716~22Tetracycline Te-30 30㎍Enterobacteriaceae≤1415~18≥1918~25Vancomycin Va-30 30㎍≤1415~16≥17Discussion이번 실험은 세균에 대한 항생제 감수성 검사를 해보는 것이었다. 요즘 항생제의 오?남용에 의해 사용 할 수 있는 항생제의 수가 줄어들고 잇는 실정이다. 따라서 항생제 감수성 평가를 통해 어떤 균이 어떠한 항생제에 내성이 있는지, 어떤 개체가 그 항생제에 내성을 나타내는지 알아봄으로써 적절한 항생제를 사용할 필요가 있다.또한 항생제 감수성 시험방법에는 디스크평판법만 있는 것이 아니기에 이점에 대해 조사를 하여 보았다.◎ 항생제 감수성 시험 종류(1) 액체배지 희석법 (broth dilution method)기초배지로 Muller-Hinton 한천이 흔히 사용된다. 균주는 Steers replicator로 접종한다. 한꺼번에 균주 30주 이상의 감수성을 시험할 수 있다. 집락의 증식 상태를 눈으로 확인할 수 있기 때문에 다른 세균에 의한 오염을 배제할 수 있는 장점이 있다. 그러나 이 방법은 통상적인 감수성 시험에 사용하기에는 너무 번거롭고, 비용이 많이 드는 단점이 있으며, 흔히 연구용으로 사용된다.(2) 한천배지 희석법 (agar dilution method)액체배지를 기초배지로 사용한다. 항균제 농도마다 1mL 이상의 액제배지를 사용하면 macrobroth 희석법, 0.05-0.1mL를 사용하면 microbroth 희석법이라 부른다. MIC 뿐 아니라 최소살균농도 (minimal bactericidal concentration, MBC)도 측정할 수 있는 장점이 있다. 그러나 집락의 증식 상태를 눈으로 확인할 수 없기 때문에 다른 세균에 의한 오염을 배제할 수 없는 단점이 있다. Microscan, Vitek 등 자동화된 장비는 microbroth 희석법으로 균주의 MIC를 측정하며, 많은 미생물 검사실에서 이들 자동화 장비를 이용해서 편리험을 하고 있다. 그러나 이들 자동화 장비는 감수성, 중간내성 및 내성을 구분하는 breakpoint 만 시험할 수 있는 경우가 많으며, 따라서 진정한 의미의 MIC 시험이라고 하기는 어렵다. 또한 항균제의 MIC 보고가 감수성 양상 (감수성, 중간내성 및 내성)만 보고하는 것보다 치료에 더 도움이 된다는 증거도 없다.(3) 디스크 확산법 (disk diffusion method)기초배지로 Muller-Hinton agar 배지가 흔히 사용된다. 한천의 표면에 면봉으로 시험균주의 균액을 고르게 접종하고, 그 위에 항균제 디스크를 놓는다. 배양시간 동안 디스크의 항균제는 주위의 한천으로 확산하므로, 디스크 바로 주변의 한천에는 항균제가 고농도로 분포하지만, 디스크에서 먼 곳의 한천에는 항균제가 낮은 농도로 분포한다. 이와 같은 한천의 항균제 농도경사에 의해서 세균 증식의 억제대가 형성된다. 즉, 디스크와 일정 거리에 있는 한천의 항균제 농도는 시험균주에 대한 MIC가 되며, 이 point보다 안쪽의 한천에서는 균주가 증식을 못 하지만, 이 point 밖에서는 균주가 증식한다. 디스크 확산법에서는 이 억제대의 지름을 측정해서 균주의 시험항균제에 대한 감수성 양상을 결정한다.디스크 확산법으로는 MIC를 측정할 수 없다. 또한 증식이 느린 세균, 혐기성 세균 등의 항균제 감수성을 측정할 수 없는 단점이 있다. 그러나 이 방법은 시험이 간단하고, 비용이 적게들며, 시험항균제를 수시로 바꿀 수 있는 장점이 있다. 우리나라의 미생물 검사실 대부분은 이 방법을 이용해서 항균제 감수성 시험을 하고 있다. 최근 일본에서는 디스크 억제대의 크기가 MIC와 비례하는 점을 이용해서 디스크 확산법으로 MIC를 추정하는 방법도 개발되었다.- Kirby-Bauer disk diffusion method를 가장 많이 사용함① 균 접종액의 준비a. 순수 배양된 평판 배지에서 잘 분리된 집락 4-5개를 선별하여 백금이로 증균용 배지에 접종한다.b. 37℃ 부란기에서 표준탁도액의 농도 이상으로 양한다.

자연과학| 2007.12.13| 6페이지| 1,500원| 조회(930)

항생제, 감수성, 내성, 디스크확산법, 액체배지희석법

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