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Coomassie brilliant blue G250 staining 평가C아쉬워요

Coomassie brilliant blue G250 staining[Fig.1]Coomassie brilliant blue G250 구조식[이용]SDS PAGE를 한 뒤, gel에 부착된 단백질을 푸른색으로 염색하는 시약.[원리]단백질의 Arg, Lys이나 aromatic ring이 있는 아미노산 잔기들(Tyr, Trp, Phe, His)등과 결합하여 염색한다.Coomassie는 6개의 phenyl group들과 2개의 sulfonic acid group들을 통해서 단백질과 결합하는데, 소수성 결합(hydrophobic interaction with Try, Try, His, Phe)과 반데르발스 결합(electrostatic force with Arg and Lys)을 통해 결합한다.Arg에 반응하는 양이 aromatic ring을 가진 아미노산 잔기보다 8배 높다.[G250 vs R250]같은 blue 계열이지만 greenish(G)한 계열과 redish(R)한 계열의 차이이며, sensitivity도 조금 다르다.

자연과학| 2009.02.06| 1페이지| 1,000원| 조회(4,583)

SDS PAGE, Gel staining, Coomassie

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protein의 transport와 sorting

Intracellular Traffic Sorting of proteinsChap . 46 [ text p. 498 ]수의화학 4 조세포 내에서 일어나는 단백질의 수송과 선별 작용세포 내에서 일어나는 단백질의 수송과 선별 작용Signal !! Where? What helps ?Many proteins are targeted by signal sequences to their correct destinations. The mitochondrion both imports synthesizes proteins. Importins exportins are involved in transport of macromolecules in out of the nucleus. Most cases of “Zellweger syndrome” are due to mutations in genes involved in the biogenesis of peroxisomes. The signal hypothesis explains how polyribosomes bind to the endoplasmic reticulum. Proteins follow several routes to be inserted into or attached to the membranes of the endoplasmic reticulum. Proteins move through cellular compartments to specific destination. Chaperones are proteins that prevent faulty folding unproductive interactions of other proteins. Transport vesicles are key players in intracellular protein traffic. The assembly of membranes is complex.Many proteins are targeted by signal sequences to them복합체로 단백질이 전달. Translocation에 필요한 요소 전기화학 전위 : 전자 전달 중에 미토콘드리아 내막을 경계로 형성 Chaperone : 단백질이 미토콘드리아 막을 관통하기 위해 풀어져 있는 구조를 유지해 줌. ATP : polypeptide사슬과 chaperone간의 상호작용이 ATP에 의존적임. internal sequence : 미토콘드리아 단백질이 정확하게 수송된 수 있게 표적함.Importins exportins are involved in transport of macromolecules in out of the nucleus.Importin과 Exportin이 거대분자의 핵 내 외의 수송에 관여한다.Importin과 Exportin이 거대분자의 핵 내 외의 수송에 관여한다.Nuclear import Importin NLS(nuclear localizaion signal)에 의존하여, 수용성 단백질 군과 상호작용하는 cargo 단백질 NPC(nuclear pore complex) 에서 docking Ran Small monomeric GTPase Exportin 핵으로부터 거대 분자를 수송하는 데 관여하는 단백질 NES(muclear export signal)을 가짐. Ran 단백질은 이 과정에도 관여.Importin과 Exportin이 거대분자의 핵 내 외의 수송에 관여한다.Most cases of “Zellweger syndrome” are due to mutations in genes involved in the biogenesis of peroxisomes.“Zellweger syndrom”는 preoxisome의 생합성에 관련된 유전자의 변이에 의해 발생된다.“Zellweger syndrom”는 preoxisome의 생합성에 관련된 유전자의 변이에 의해 발생된다.Peroxisome 지방산과 지질, purine, 아미노산, 과산화수소의 대사에 관여. Pathway of import protein and enzyme Matrixculum.'Signal hypothesis'는 polyribosome이 ER에 결합하는 방법을 설명한다.'Signal hypothesis'는 polyribosome이 ER에 결합하는 방법을 설명한다.Signal hypothesis 막결합 polysome 에서 합성된 단백질은 N- 말단에 signal peptide를 갖고 있음 cotranslational insertion mRNA가 polysome에서 번역될 때, 동시에 ER막내로 단백질의 유입이 일어남. Elongation arrest SRP (signal recognition particle)에 의해 전사가 제어됨. SRP – signal peptide – polysome이 Docking protein (SRP-R)에 결합하기 전에는, SRP – imposed block 은 풀어지지 않음. signal peptidase ER의 내강쪽 면에 위치하며, signal peptide를 가수분해시킴. Retrograde transport ER 내강으로부터 다양한 분자들이 세포질로 이동됨.'Signal hypothesis'는 polyribosome이 ER에 결합하는 방법을 설명한다.Translocon 새로 합성된 단백질이 통과할 ER 막에 있는 protein-conducting channel을 만듦. TRAM : signal sequense 에 결합. Sec61p : ribosome의 heavy subunit에 결합'Signal hypothesis'는 polyribosome이 ER에 결합하는 방법을 설명한다.Proteins follow several routes to be inserted into or attached to the membranes of the endoplasmic reticulum.단백질은 ER의 막 내에 삽입되거나, 막에 부착하는 몇 가지 경로를 따른다.단백질은 ER의 막 내에 삽입되거나, 막에 부착하는 몇 가지 경로를 따른다.A. Contranslational insertion B. SyntheER의 막 내에 삽입되거나, 막에 부착하는 몇 가지 경로를 따른다.Proteins move through cellular compartments to specific destination.단백질은 특수한 목적을 위해 세포구획을 통해 이동한다.단백질은 특수한 목적을 위해 세포구획을 통해 이동한다.ER → 골지체 → 세포막 [ 그림 46-6] Signal에 의해 독립적으로 유입/유출 된다.Chaperones are proteins that prevent faulty folding unproductive interactions of other proteins.Chaperone은 잘못된 단백질의 접힘과, 다른 단백질과의 쓸모없는 결합을 방지하는 역할을 하는 단백질이다.Chaperone은 잘못된 단백질의 접힘과, 다른 단백질과의 쓸모없는 결합을 방지하는 역할을 하는 단백질이다.Molecular chaperone certain proteins play a role assembly or proper folding of other proteins w/o themselves being components of the latter. Important properties : Table 46-5 Exhibit ATPase activity, bind ADP,ATP ADP,ATP-chaperone complex BiP, calnexin, calreticulin ,PDI ,PPITransport vesicles are key players in intracellular protein traffic.수송 소포는 세포내 단백질 수송에서 중요한 역할을 한다.수송 소포는 세포내 단백질 수송에서 중요한 역할을 한다.수송 소포는 세포내 단백질 수송에서 중요한 역할을 한다.단백질 : rER의 ribosome에서 합성 = Golgi or P/M 으로 이동 = Transport vesicles 로 이동 1) Golgi= P/M 의 T/V 는 clathrin 코팅X 2) Endocytosis 의 T/V sicle : trans-golgi network에서 prelysosome으로 가는 수송소포,세포막에서 endosome으로 가는 수송소포 등을 포함. Cargo molecule : 소포의 피복 단백질과의 상호작용Brefeldin은 피복과정을 억제한다.C. Brefeldin A 진균성 대사산물 GTP가 ARF에 결합하는 것을 방해 (guanine nucleotide exchanger저해) → step 1이 일어나지 않음. → 전체의 피복과정을 억제. D. GTP-γ-s GTP의 불수용성 유사물질 피복된 소포에서 피복의 분해가 일어나지 않음. → 소포가 target membrane을 인식하는 과정을 억제. E. Rab-protein family Ras 유사 단백질 Small monomeric GTPase GTP bound state에서 세포막에 geranylgeranyl chain을 통해 결합하여 소포의 발아를 일으킴. Sec 1 : t-SNAREs에 결합해서 v-SNAREs와의 상호작용 막음 Rab protein : sec1 과는 반대작용 → Sec 1 and Rab protein – 소포 형성속도 조절Brefeldin은 피복과정을 억제한다.F. SNARE pin t-SNARE v-SNARE protein이 재구성되어 형성 SNAPs 와 NSF는 SNARE pin 형성을 요구 생리적 온도에서 겉보기에 막 융합을 유도하는 것처럼 보이나, 막 융합에 필요한 최소한의 작용만을 수행. G. Plasma membrane of Neuron Neuron의 형질막과 synaptic vesicle의 융합은 앞 단계와 비슷한 과정을 통해 일어남. Botulinum B toxin : synaptobrevin 에만 작용. : acetylcholine의 분비 저해-치명적 H. 대체로, clathrin-coated 소포와 non-clathrin-coated 소포의 형성 과정은 유사.The assembly of membranes is complex.막 조립은 복잡하다.Asymmetry o}

의/약학| 2009.01.13| 50페이지| 2,000원| 조회(435)

세포, 단백질, Protein, 생화학, 수송

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수의 전염병학 정리본

0. 돼지 오제스키병 ( Psuedorabies, Aujeszky Disease )1. 돼지 콜레라 ( Hog cholera, Classical swine feve )2. 아프리카 돼지 콜레라 ( African swine cholera )3. 글래서씨병 ( Glasser's Disease )정의2종법종전염병, 호흡기?신경증상, 소양증(소)1종, 급성열성, 높은 발병?치사율, 전신출혈증상?패혈증1종, 전신성, 열성, 패혈증 hog cholera, erysipelas와 유사어린 돼지의 다발성 관절염?장막염?뇌수막염, 2차적으로 마이코플라즈에에 의한 기관지 폐렴병원체herpesvirus type 1,α herpesvirus - DNA, CPE, Codry A type 핵내봉입체Flaviviridae, Pestivirus - ssRNA, 배양세포에서 증식 잘 되나 CPE 없음공통항원 - Hog cholera, Border disease virus, BVD, Rubella virussubserotype - H type(강독주인 CPE-주, LPC주(백신주), B type(만성경과 331주)Asfaviridae - DNA, unsatble ag바이러스배양 - primary monocyte, phagocyte, VERO, MS, CV, BHK cell lineHaemophilus parasuis(-), NAD(V factor)만 요구, hemin(X factor)는 불필요, chocholate agar위성현상 - Staphylococcus aureus, 혈액배지, 15가지 혈청형(4, 5, 13이 대부분)발생?역학비말, fomite(개달), 정액, 태반감염, 모유분비물, 배설물에 의한 접촉(수평?수직전파 가능), nantural host, carrier sow syndromvector - soft tick(진드기)reservior - warthog(흑멧돼지), buship(야생돼지)소수사육지역(진드기↔진드기, 진드기↔돼지, 돼지↔진드기)고사육지역(돼지↔돼지(접촉))이유-4역 , 폭발적 발생1주령 미만이면 거의 폐사(100%)주요병변은 융모상피세포(공장,회장)주요병변은 융모상피세포(공장,회장)병리주요병변은 융모상피세포(공장,회장), 소장융모의 심한 위축장관의 비박화, 위장관내 응유, villi : crypt = 1:1수양성 장내용물, 신장에 요산 침착, villi : crypt = 3:1임상증상발열?신경증상 없음주로 겨울에 발생하나 연중발생폐사율 - 2주미만(TGE〉PED), 성돈(TGE〈PED)전파는 TGE보다 느림1일~이유자돈(7~14이령)폐사율 - 2주미만(TGE〉PED), 성돈(TGE〈PED)전파는 TGE보다 빠름수양성설사, 반죽양 설사, 구토대장에 국한, 소장은 정상점액혈액성 변, 성돈에서는 흑리, 디프테리아성 위막 형성폐사율은 높지 않음, 회복한 돼지는 보균돈이 됨진단?예방FA(소장점막의 동결절편), VNIg A를 통한 높은 모체 이행 항체FA, IHCELSA, Latex kit13. 돼지 증식성 장염 ( Porcine proliferative enteopathy )14. 대장균증 ( Colibacillosis )15. 파보바이러스 감염병 ( Porcine Parvovirus Infection )16. 돼지 생식기호흡기 증후군 ( Porcine reproductive and respiratory syndrom, PRRS )정의육성돈, 타르양 혈변, 소장?회장점막의 비후, 급사패혈증(생후2-3일), 설사(포유), 독혈증(이유후)사산?불임증의 번식장애자돈(폐사), 번식돈(번식장애), 육성돈(호흡기증상)병원체Lawsonia intracelluaris(-), 회장의 점막세포내에서 증식, cell culture, chicken eggWarthin-Starry or Ziehl-Neelsen silver satinEscherichia coliAg-K(capsule), O(cell wall or somatic), H(flagellar), F(Fimbriae, Pili→부착 및 유전물 질의 교환 가능, 가장 중요한 질병의 원인)Vir우 - 태반염증은 있으나 유산은 없다수소 - 고환염융모막의 가죽모양 괴사L. hardjo - 임신우?분만우에 한정, 유방염, 유?사산, 태자의 자가융해L. pomona - 용혈성빈혈, 유산, 발열, 혈색소뇨증회복된 후 최소한 2~3개월간 뇨로 균 배출진단?예방Penicilline 이 효과적동물접종 - 기니픽?토끼tuberculin test - 주로 피내반응 이용( Type Ⅳ hypersensitivity )Test & Slaughter(무병소 반응우도 도태)Johnin, CF, ELISA, AGPFA - 유산태아의 위장관내용물, 태반Milk ring test( 농장자체의 감염여부 검사 ) , SAT(serum agglutination test),PA(plate agglutination test) - 확진기타 - Rose bengal test(IgM), Card test(IgM), CF test Coombs testNB. 사람에서의 감염- B. melitensis: 관절염, 골수염, 파상열, 심내막염암시야 현미경, microscopic agglutination test28. 우폐역 ( contagius bovine pleuropneumonia, CBPP )29. 구제역 ( Foot and Mouth disease, FMD )30. 우역 ( Rinderpest, Cattle plaque )31. 소 전염성 비기관염 ( Infectious Bovine Rhinotracheitis, IBR )32. 불루텅 ( Bluetongue )-국내 발새 안함정의1종 만성 호흡기1종, 우제류의 급성1종, 소, 물소의 급성, 소화기 점막 염증 및 괴사로 인한 설사가 특징적2종, 소의 비기관염, 화농성 질염, 결막염, 유산 장염, 수막염1종 소의 점막면 염증, 출혈, 부종병원체Mycoplasma mycoides subspesies mycoides small colonyCapsular galatan- 면역억제, 폐에서 다른 부위로의 전파, 송아지의 관절염Picornaviridae A?사?조산은 드물고 뇌수두증, 소뇌형성부전 NB. 체형이상 없음급성기(혈액, 뇨, 비?유루), 만성기(비장, 골수, 장간막림프절)설사(설사, 소화관 점막), 유산(태자의 갑상선, 타액선)진단?예방모우로부터 바이러스분리 난해, 유산자의 뇌, 태반초유섭취전 신생 자우 혈청, HI, SN, IHA, 바이러스의 분리임신 예정우에 약독화 백신혈액, 비장, 간장3회 계대시 CPE가 없으면 IF, END, interference test / 생바이러스백신은 임신우에 사용하지 않음40. 소백혈병 ( Bovine Leukosis )41. 바베시아 ( Bovine Babesiosis )42. 타일레리아 ( Bovine Theileriosis East Cost Fver )43. 리스테리아증 ( Listeriosis )45. 말전염성 빈혈 ( Equine Infectious Anemia Swap Fever Equine Malarial Fever )정의2종, 주로 양성인 lymphosarcoma, 성우형(bovine enzootic leukosis), 산발형2종 진드기(tick), 적혈구 기생성 원충, 발열, 황달, 혈색소뇨2종 진드기, 림프구?적혈구 기생성, 림프절 종창, 빈혈, 황달, 발열(이장열)소와 면양의 유산, 뇌염, 패혈증2종 말의 급만성, 발열, 빈혈, 출혈, 재발로 종생 치료안됨병원체Retroviridae BLV - ssRNA, 공통유전자(gag, pol, env gene),v-onc 종양발생 BLV는 없다합포체를 형성하나 봉입체, plaue 형성 없음, 면양?마우스 적혈구에 응집B. bigemina, B. bovis - 법정, 기타(B. ovata, B. major, B. divergens)T. pava, T. annulata, T. sergenti - 법정, 기타(T. mutans)Listeria monocytogenes, 겨울과 초봄에 발생Retroviridae Lentivirus EIAV - RNA발생?역학수평전파(모기, 창상)>수직전파(자궁내 감염, 초유)우리원체Coronavirus - RNA, phospholipase 처리시 혈구응집반응chicken embryo 내에 접종시 Dwarfing & stuntingalphahepesvirinae - DNA, 핵내봉입체, CAM 상에서 Pock 형성Paramyxoviridae NDV - RNA, HI, Hemagglutinin, NeuraminidaseOrthomyxovirus - RNA, type A, 혈청형간 교차반응×Birnyaviridae IBDV - ssRNA, 2가지 혈청형(serotype 1이 병원성)발생?역학공기, 난계대×, 혈청형이 많아 제어 난해latent infection, 난계대×formite, 바이러스에 감염된 계란은 거의 부화×,난계대×모든연령, 야생조류에 의해 전파 가능, 사람은 결막염, 혈청형이 한정되어 백신으로 제어 가능난계대○, 주로 칠면조?오리가 문제, 철새가 전파 가능,사람의 인플루엔자와 무관(typeB?C)난계대×, 외부환경에 저항성이 높아 퇴치 난해, 칠면조는 면역저하가 없다3-6주령 닭(F낭왕성하게 성숙시기), 3주령이하는 무증상으로 F낭의 위축만(면역저하)병리초생추 - 기침, 기과수포음, 비루, 신장형은 폐사↑성계 - 산란률저하(50%), 난각이상(비박), 수양성 난백, 2주령이하에서 감염시 종생 난관이상NB. 신장형 - 요결석기관염증, 선위출혈, perivascular cuffinglentogenic - 무증상, 일반적인 백신주mesogenic - 호흡기(star gazer), CNS, 설사, 급작스런 산란률 저하, 이상란(연란)velogenic - 호흡기, 설사, 마비(사경), 고폐사율기관, 기낭에 염증, 결막염두부의 청색증?아면 부종, 벼슬에 궤양?수포, 다리에 탈색, 복부지방?점막에 점상출혈, 선위?근위에 괴사?출혈소견임상증상울혈성 기관염호흡곤란, 각혈, 산란률 저하(간접적 요인)흉선, 비장, 맹장편도도 약간은 영향, 3주후에 임상증상 발현(선위점상출혈, 신장의 부종)신장내 요산염 침착, 수양성 설사, 면역기능 부전에 의하

학교| 2009.01.13| 16페이지| 1,500원| 조회(1,751)

동물, 전염병, 정리, 수의학, 수의 전염병

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[말 관리학]Setaria 기생충에 관한 레포트

1. 말의 강모사상충증(Setariosis)1-1. 강모사상충의 생활사: 대부분의 종에서 필라리아 자충의 정기 출현성이 약하며, 혈중의 자충 밀도도 낮다. 사상충의 발육에는 중간숙주가 필요하다. 지상사상충의 중간숙주는 중국얼룩날개모기(Anopheles sinensis), 큰검정들모기(Armigeres suballbatus) 및 토고숲모기(Aedes togoi)가 알려져 있다. 모기가 흡혈할 때 자충은 모기의 위에서 흡혈 후 24시간에 탈초하여 위벽을 뚫고, 흉부의 근육에 이행한 후 충체는 단축 및 비후되고, 3일 후에는 운동성이 약한 소시지모양으로 발육한다. 흡혈 후 5~7일에 첫 번째 탈피를 하고 제 2기 자충이 된다. 흡혈후 9~10일에 두번째 탈피를 하고 체장이 약 2.5mm인 제3기 자충이 된다. 흡혈 12~13일 후에는 더욱 발육하여 체형이 완성된 자충이 모기의 물초에 이행한다. 제3기 감염자충은 모기가 말에서 흡혈할 때 감염되며, 피하조직 그리고 근막하 등에서 발육하면서 조직사이를 이행하여 감염 후 3~4개월에 복강에 도달한다. 성충의 생존 기간은 1년 수개월로 알려져 있다. 자충이 비고유 숙주인 말에 감염되면 충체는 성숙하지 않고 체장이 1~3cm의 유충 상태로 뇌, 척수, 그리고 전안방에 침입하여 숙주에 여러 가지 장해를 일으킨다. 말사상충의 중간숙주는 토고숲모기와 중국얼룩날개모기로 알려져 있으며, 발육 및 감염방법이 지상사상충에서와 동일하다.순환 혈액 중에 축적하는 사상충의 유충 중에 Dirofilaria immitis를 인정하지 않는 경우에 Setaria equina와 Elaeophora boehmi의 두 가지만 출현하는데, E.boehmi에 형태적 차이가 있고 지역 분포에 제한이 있는 점을 고려하면, S.equina만이 인정된다.1-2. 강모사상충의 병원성: 복강 내 성충은 가벼운 섬유소성 복막염을 일으킬 수 있다고 하나, 거의 병원성이 없다.그러나 말사상충(S. equinia)과 지상사상충(S. digitata)이 병원성이 없다 해도, 종종 맹안, 신경착란, 마비 등의 증상이 나타내기도 한다. 눈과 중추신경계에 병변을 유발하는 강모사상충에는 S. equina, S. digitata, S. cervi 등이 있다. 지상사상충의 유충은 말의 전안방에 침입하여 각막혼탁을 일으켜 실명하게 한다. 또 미숙한 유충은 말과 같은 비고유 숙주의 중추신경계에 침입하여 소위 요마비(腰麻痺)라고 하는 뇌척수사상충증(cerebrospinal filariasis)을 일으킨다. 이 사상충증은 급성 국한성 뇌척수 연화증, 신경세포 변성 그리고 충도(蟲道)에 공동이 나타나는데, 이는 전신 증상이 없이 사지 또는 후지에만 마비가 일어나지만 증상은 충체가 침입한 병소의 위치에 따라 차이가 있다.지상사상충의 비고유 숙주인 말에서 발육기 유충의 비정상적인 유주에 의해 피부병변이 나타나기도 한다.1-3. 강모사상충의 역학: 말사상충(S. equina)의 감염은 영국, 독일, 폴란드, 체코, 슬로바키아, 로마, 불가리아, 이탈리아, 그리스, 터키 등지에서 발견되나 유병율은 높지 않고 대부분은 성충 발견에 의한 것이다. 터키에서 부검 소견 상 S. equina의 유병율은 1~45.5%로 다양하다. 현재는 부검검사보다 혈액 중에 microfilaria(mff)의 농도를 측정하는 방법을 선호하고 있는데, 특히 과거의 Knott technique[혈액 1ml에 대한 sample test]보다는, 유충의 체적도 측정할 수 있는 membrane filtration 방법도 사용하고 있다. 또한 각 종의 AP(acid phosphatase)의 염색성의 차이를 이용한 상품[Leucognost-SP)이 판매되고 있어, Knott test와 함께 이용되고 있다.우리나라에서의 발생에 대한 정보도 부족하므로 혈중 유충의 밀도에 대한 기록과 영향 받기 쉬운 연령에 대한 조사가 필요할 것이다.2. 강모사상충과(强毛絲狀蟲科, Family : Setariidae): 성충의 입 주의에 키틴질 환과 그 측면에 장식견장과 같은 구조물이나 작은 이빨을 가지고 있다.Genus : Setaria Viborg: Setaria속에 속하는 성충은 일반적으로 유제류(有蹄類)의 복강에 기생한다. 체장이 수cm에 이른다. 입에는 배 및 복치상돌기 그리고순상측돌기를 가진 각피성 환으로 둘러싸여 있는 것이 특징이다. 피초를 가진 필라리아 자충은 종숙주의 혈액에 출현한다.말사상충(Setaria equina): 체장은 수컷이 5~8cm, 암컷 7~12cm이며 백색의 긴 선충이다. 전단의 입 주의에는 각피성 윤상구조가 있다. 이것은 일종의 치상돌기이며 4개의 입술 모양을 하고 있다. 그 외측에는 수 개의 유두가 있다. 수컷의 미단은 말려있고 미익은 없다. 또 미부 선단에는 구슬모양의 결절이 있다. 필라리아 자충은 혈중에 나타나며 초를 가지고 있다. 전 세계적으로 말, 당나귀 그리고 얼룩말 등의 복강과 때로는 음낭에서 종종 발견된다. 국내에서는 말의 흉강과 폐 그리고 소와 말의 눈에서 발견된 바 있다.Setaria equina microfilaria.Note the sheath.Adult Setaria equinawormsin the peritoneal cavity of a horse.지상사상충(指狀絲狀蟲, Setaria digitata): 평균체장은 수컷 4.7cm, 암컷 9.6cm이다. 입은 각피성 윤상 돌기에 의해서 둘러싸여 있다. 이 돌기는 4개의 입술 모양을 하고 있다. 이 외 입 주위에는 수개의 유두가 있다. 체표 각피에는 미세한 횡선 무늬가 보인다. 수컷의 미단은 말려 있고, 원추상 소돌기가 1쌍 있으며, 꼬리 끝에는 구상의 결절이 부착되어 있따. 필라리아 자충은 유초이며, 길이가 275~293um되고 혈중에 출현한다. 성충은 소 및 물소 등의 체강에 기생하나, 유충은 면양, 산양, 그리고 말 등의 전안방과 중추신경계에 침입하는 경우가 있다. 인도보다 동쪽의 아시아에 분포하며, 우리나라의 소에서도 흔히 발견된다.

의/약학| 2009.01.13| 4페이지| 1,500원| 조회(464)

말, 기생충, Setaria, Setariosis, digitata

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미생물배양&PCR & SDS PAGE 과정과 사진설명

경북대학교 수의과대학수의학과 이선주방법준비물주의사항시약 및 과정상의 그림시약의 특성과 사용 이유0. Salmonella gallinarum 의 배양. S. gal 의 증균 배양0) 배양액 제조? 2.56g의 nutrient broth [ 8g/1L ]① 320ml 의 D.W② 삼각플라스크에서 ①과 ②를 mix1) 액체 배지? 15ml tube 10개① ①에 배양액을 7ml 씩 분주2) 멸균? Autoclave - 121℃, 15분3) 접종? S. gal 의 colony 채취① tube에 접종멸균에 주의!4) 배양? Shaving incubator에서 overnight가. S. gal 의 순수 배양5) Nutrient agar 제조? 250ml의 nutrient broth① 3.75g의 agar [ 1.5% ]② 삼각플라스크에 ①과 ②를 넣고 녹임.6) 멸균? Autoclave - 121℃, 15분7) 고체 평판 배지? petri - dish 10개① Clean bench에서 nutrient agar 25ml를 부어 식힘.8) 접종? S. gal의 균주를 채취① 고체 평판 배지 위에 streaking멸균에 주의!9) 배양? petri-dish를 파라핀 테입으로 밀봉.① 뒤집어서 정보 표시.② Incubator - overnight1. S.gal 의 배양가. S. gal 의 증균 배양① nutrient broth 2.56g② 증류수③ 배양된 S.gal[ 액체 배지에의 접종 ]나. S.gal 의 순수 배양① 제조된 액체 nutrient broth② agar 3.75g③ 순수한 S.gal 균주[ 고체 평판 배지에의 접종][ 정보 표시 ][ Agar ]:1. S.gal 의 배양가. S. gal 의 증균 배양나. S.gal 의 순수 배양1. Genomic DNA의 추출0) S. gal 의 세포 채취? S. gal 이 배양 된 tube 5개① ①을 centrifuge - 3,000rpm , 5분② supernatant 버림.③ 1.5ml tube로 각각을 옮김.④ Vort Genomic DNA의 추출(1) S. gal 의 세포 채취① 배양된 S. gal[ 세포 분리 ](2) DNA의 추출① TE 200ul② Proteinase K 4ul③ 10% SDS 20ul④ Phenol mixture 200ul[ 55℃에서 mix][ Gently mixing 중][ TE = Tris + EDTA ][TAE = Tris + acetate + EDTA ]- Tris:- EDTA:[ Proteinase K ]:[ Phenol mixture =phenol + chloroform+ isoamylalcohol ]:[ SDS (sodium dodecyl sulfate) ]:2. Genomic DNA의 추출2. PCR0) PCR 재료 준비? PCR premix가 담긴 5개의 1.5ml tube① ①에 primer 2ul 첨가.[ primer A, B 각각 1ul 씩]② ②에 template DNA 1ul 첨가.③ ③에 D.W 17ul 첨가④ ④를 PCR tube에 옮김⑤ 각각의 tube에 50℃, 52℃, 54℃, 56℃, 58℃ 의 온도를 표시[ Annealing temperature 표시 ]⑥ ⑤에 mineral oil을 첨가.1) 장치? Annealing temperature를 다르게 하여 pcr tube 장치.① 30회 반복3. PCR(1) PCR 재료 준비① PCR premix② primer 2ul③ template 1ul④ D.W.⑤ mineral oil[ PCR tube ](2) 장치[ PCR 기기의 개요 ][ PCR premix ]componente20ul reationTaq DNA polymerase1Ueach : dNTP250ulTris-HCl10mMKCl40mMMgCl21.5mMstabilizer & tracking dye- Taq polymuerase:- dNTP:- Tris-HCl ( pH 9.0 ):- KCl, MgCl:- Stabilizer & tracking dye:[ RNA primer ]:[ Template DNA ]: setting ]3) 시료 준비? Loading buffer 1ml 씩 분주.① Genomic DNA 10ul② PCR 결과 후 시료 10ul③ ①에 ②를 혼합하여 오른쪽 gel의 well에 주입.④ ①에 ③을 혼합하여 왼쪽 gel의 두 번째well부터 주입.⑤ 100bp ladder를 왼쪽 gel의 첫 번째 well에 주입.나. Electrophoresis4) Loading? 100V로 15~20분간 전기를 걸어 줌.[전압 setting ]5) 결과 분석? UV 사진 찍기① band 판독② 결과 분석[ UV 사진 ]4. Electrophoresis가.Agarose gel 제작① TAE 100ml② agar 1.5g③ EtBr 2ul[ 굳혀진 agarose gel ]나. 준비단계① TAE② Loading buffer③ 100bp ladder④ Genomic DNA⑤ PCR 결과 산물[ Buffer와 시약 혼합][ 시료를 주입하는 모습 ]다. Electrophoresis[ Loading이 진행되는 모습][ Loading이 진행되는 모습][ EtBr (Ethidium Bromide) ]:[ Loading buffer ]:[ 100bp Ladder ]:4. Electrophoresis가. Agarose gel 제작나. 준비단계다. Electrophoresis4. Protein 의 추출0) Reagent Ⅰ? 배양액을 centrifuge - 3,000rpm, 5분① 남아있는 세포에 reagent Ⅰ 500ul 첨가.② vortex③ sonication - 2분④ centrifuge - 12,000rpm, 10분⑤ supernatant를 덜어 내 새로운 1.5ml 튜브에 담기. - [ Fraction 1 ]1) Reagent Ⅱ? supernatant를 버리고 난 (1)에 reagent Ⅱ250ul와 TBP 2.5ul [ 10ul/ml ] 첨가.① vortex② centrifuge - 12,000rpm, 10분③ supernatant를 덜어 내 새로운 1.5ml 튜브) Reagent Ⅱ① reagent Ⅱ 250ul② TBP 2.5ul[ Reagent Ⅱ와의 반응 ](3) Reagent Ⅲ① Reagent Ⅲ 250 ul② TBP 2.5ul[ Reagent Ⅲ과의 반응 ][ Reagent Ⅰ]- 40mM Tris base[ Reagent Ⅱ]- 8M urea:- 4% CHAPS(3-[(3-Cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate): zwitterionic detergent- 40mM Tris- 2% Bio-Lyte 3/10 ampholyte: mixture of carrier ampholytes, pH 3-10[ Reagent Ⅲ]- 5M urea- 2M Thiourea:- 2% CHAPS- 2% SB 3-10(N-decyl-N,N-dimethyl-3-ammonio-1-propanesulfonate,or caprylyl sulfobetaine): zwitterionic detergent- 40mM Tris- 0.2% Bio-Lyte 3/10 ampholyte[ TBP (TriButyl Phosphine)]: Reducing agent5. Protein 의 추출5. SDS PAGE. Cast의 조립? 유리판을 알코올로 닦고 건조.① 유리판의 가로, 세로, 두께를 측정하여, 들어가야 할 gel의 양 계산.가로 : 16cm세로 : 16cm두께 : 1 mm② 나머지 부품들을 조립.가. Polyacrylamide gel의 제작0) Separating gel (50ml)? 30% acrylamide solution 16.6mlacrylamide solution은 냉장보관 함.① 1.5M Tris-HCl 12.5ml② 10% SDS 0.5ml [ 1% ]③ D.W 20.4ml④ 위의 ①,②,③,④를 비커에 넣고 mix.⑤ APS 500ul [ 1/100 of total vol. ]⑥ TEMED 25ul [ 1/2000 of total vol. ]⑦ ⑤에 ⑥과 ⑦을 넣고 mix.⑧ C⑤에 ⑥과 ⑦을 넣고 mix.⑧ 균형을 맞춘 채로, comb를 얹고 gel mixture를 붓는다.[ Comb를 꽂기 전의 모습]⑨ comb를 내려 유리판에 gel을 가득 채운다.⑩ 공기 중에서 건조나. Apply? cast를 Electrophoresis 장치에 장착하고, 전극이 잠길 정도로 Tris glycin buffer 부음.① Fraction 1 - 10× loading buffer 50ul mix [ 10ul/100ml ]② Fraction 2와 3 - 10× loading buffer 25ul mix③ 각각의 well에 Fraction 1, 2, 3를 순서대로 번갈아 가며 20ul 씩 apply.[ apply에 이용한 주사기 ]다. Electrophoresis? 기기에 cast를 장착하고, 전압을 걸어 줌.[ 전기 영동 장치의 전압 설정 ]① well에서 시료가 끌려 내려가는 모습을 관찰smile 현상이 관찰 됨.[ Electrophoresis 가 진행되는 모습 ]라. Staining & De-staining[ Destaining 과정 ]마. 결과 분석6. SDS PAGE가. Cast의 조립① 70% Ethanol나. Polyacrylamide gel의 제작(1) Separating gel① 30% acrylamide solution 16.6ml② 1.5M Tris-HCl (pH 8.8) 12.5ml③ 10% SDS 0.5ml④ D.W 20.4ml⑤ APS 500ul⑥ TEMED 25ul⑦ Butanol[ separating gel 붓기 ](2) Stacking gel① 30% acrylamide solution 3.3ml② 1.5M Tris-HCl (pH 6.8) 5ml③ 10% SDS 0.2ml④ D.W 11.5ml⑤ APS 200ul⑥ TEMED 10ul[ Comb를 꽂은 후의 모습 ]다. Apply① Tris glycin buffer② Fraction 1, 2, 3③ 10× loading buffer[ well 에 apply되어 있는 모습]라AGE

의/약학| 2004.11.16| 17페이지| 2,000원| 조회(1,585)

PCR, SDS, 배양, PAGE, Electrophoresis

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