*인* 스토어

*인*

개인

팔로워0 팔로우

소개

등록된 소개글이 없습니다.

전문분야 등록된 전문분야가 없습니다.

판매자 정보

학교정보

입력된 정보가 없습니다.

직장정보

입력된 정보가 없습니다.

자격증

입력된 정보가 없습니다.

판매지수

판매중 자료수

1개
전체 판매량

6개
최근 3개월 판매량

0개
자료후기 점수

-
자료문의 응답률

-

전체자료 1개

simple staining

1. Title - Simple staining2. purpose광학현미경으로 살아있는 생물체를 염색하지 않은 상태로 관찰하는 것은 어려운 일이다. 세균은 매우 작아서 유침용 대물렌즈를 이용하더라도 관찰하기 어렵다. 이렇게 잘 보이지 않는 것은 관찰하고자 하는 세포와 명시야의 배경간의 불충분한 대조에 기인한다. 이 문제를 최소화하여 광학현미경에 의한 관찰을 용이하게 하기 위하여 세균세포들을 염색할 수 있다.3. Introduction1) 단순염색(simple staining)세균을 슬라이드에 도말 고정한 후, 한 가지 염색액으로 염색하는 방법을 단순염색이라고 하며, methylene blue, carbol fuchsin, crystal violet 등의 염기성 염료(basic dye)를 주로 사용한다. 염기성 염료는 주로 ribosome이 많은 부분인 원형질을 염색한다. 염색은 세포 성분 중 단백질이나 핵산 같은 거대분자와 염색 시약의 정전기적 성질에 따라 결합하여 세포 성분이 착색된다. 단순염색을 함으로서 기본적인 세균의 모양, 크기 배열 상을 알 수 있다. 액체배양액에 있는 세균을 관찰하고자 할 때는 균체를 멸균된 희석 수에 적당히 희석하든지, 혹은 희석하지 않고, 백금이로 균을 떠서 잘 도말(smear)한 후 염색과정을 시작할 수 있으나, 고체배양체의 경우에는 희석액을 슬라이드에 한 방울 떨어뜨린 후 균을 떠서 희석액과 함께 도말한다. 도말한 슬라이드는 상온에서 건조시킨 후, 열처리에 의한 단순고정법으로 슬라이드 표면에 부착시킨다. 즉, 건조된 도말 부위가 위로 향하도록 하여 알코올램프 불꽃의 2/3 높이로 1초 정도 서너 차례 통과시켜 고정시킨다. 이 때 너무 강한 불꽃을 처리하면 세균이 수축되거나 변형될 우려가 있으므로 유의해야 한다.2) 염색시약의 화학적 구성무색의 benzene ring에 연결된 발색군(chromophore group)과 조색군(auxochrome group)을 합한 유기복합체이다.ex) picric acidTrinitrohydroxylbenzene(picric acid) yellow stainBenzenecolorlessNitratechromophoresTrinitrobenzenechromogen(not a stain)yellow in colorAuxochrome3) 염색의 원리세포의 구성물에 염색시약이 결합하기 위한 능력은 chromogen의 전기적 전하에 의존된다. 산성 염색 시약은 음이온을 띄기 때문에 chromogen이 음전하를 띄게 되어서 세포내의 양전하를 띄는 물질과 강한 친화력을 가진다. 즉 세포질은 양전하를 띄는 염기성 물질로서 산성 염색 시약의 음전하를 띈 chromogen에 의해 색을 나타내게 된다. 그와 반대로 염기성 염색시약은 양이온을 띄기 때문에 chromogen이 양전하를 띄게 되어서 세포내 음전하를 띄는 물질과 강한 친화력을 가진다. 즉 세포의 구성물 중 음전하를 띄는 necleic acid는 염기성 염색시약의 양전하를 띈 chromogen에 의해 발색하게 된다.4) 염료(Dye)의 종류① Basic dye : Methylene blue, Malachite green, Safranin, Thionin, Rosaniline, Pararosaniline, Gentian violet, Crystal violet, Basmarck brown, Auramine O, Hematoxylin② Acidic dye : Eosin, Erythrosin, Aurantia, Orange G, Picric acid, Nigrosin③ Neutral dye : Sudan III, Giemsa, Wright, Leishman④ Mordant : Ferrous sulfate, Iodine, Phenol, Tannic acid5) Staining의 종류 및 특징Differential stainingUse of two contrasting stainsSeparation into groupsType ofstainingtechniquesGram stainAcid fast stainSimple stainingUse of single stainSpecial stainingVisualization of structuresFlagella stainNuclear stainCapsule stainSpore stainNegative stain4. Material & Methode1) material① 3가지 균(Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis)② 3가지 염색시약(Crystal Violet, Safranin, Methylene blue)③ 슬라이드④ Immersion oil⑤ 광학 현미경⑥ 백금이(loop)⑦ 알코올 램프⑧ 장갑, 휴지2) Method① E.coli(Safranin), S. aureus (Crystal Violet), B. subtilis (Methylene Blue)② slide glass 3장에 3가지 균을 각각 loop을 이용해 넓게 도말한다.③ 알콜 램프에 1-2회 고정시킨 후 공기 중에서 5min 이상 완전 건조시킨다. (Fixation)(Fixation 이 충분히 되지 않으면 균이 씻겨 내려감)* 열고정의 목적- 미생물을 죽임. 세포 원형질의 응고(고착), 균체 단백질을 슬라이드표면에 부착* 지나치게 가열하면 미생물의 형태와 구조가 망가질 수 있으므로 주의한다.(3회 정도 도말면을 위로 하여 불꽃 통과)④ 염색약(Safranin, Crystal Violet, Methylene Blue)를 각각 슬라이드 위에 충분히 떨어뜨리고 1min간 염색한다. (Staining)⑤ 슬라이드 뒷면을 흐르는 물에 씻어 염색약이 완전히 씻겨 내려가도록 한다. (Washing)⑥ 뒷면을 paper towel로 닦고 염색된 앞면이 완전히 마르도록 공기 중에서 건조 시킨다.⑦ ×1000배로 현미경을 관찰한다.(관찰이 모두 끝나면 현미경 렌즈에 묻은 immersion oil을 lens paper로 닦아낸다.)5. Result1) E.coli + safraninfig.1 E.coli (1) (x1000) fig.2 E.coli (2) (x1000)fig.3 E.coli 표본 (x1000)처음 관찰했던 것이 fig.1 이었는데 염색약이 제대로 씻겨 내려가지 않았는지 너무 번져 보여서 다시 염색을 했고, 두 번째로 관찰한 것이 fig.2 이다. 두 번째는 염색이 제대로 되지 않은 건지 표본에 비해 희미하게 보이긴 했지만 균의 모양은 관찰할 수 있었다. E.coli는 언뜻 보기엔 둥근 모양이었으나 자세히 살펴보니 짧은 막대모양의 간균이며 양 끝이 둥글었다. 더불어 색깔은 붉은색으로 염색이 되었다.2) S.aureus + Crystal Violetfig.4 S.aureus (x1000) fig.5 S.aureus 표본(x1000)S.aureus는 표본보다 조에서 만든것이 더 관찰하기에 좋았다. 우선 모양은 포도알처럼 둥근모양의 구균이었으며 균이 하나하나 따로 떨어져 있기 보다는 몇 개씩 모여 있는 모습을 관찰할 수 있었다. 색깔은 Crystal Violet으로 염색하였기에 보라색으로 나타났다.3) B.subtilis + Methylene Bluefig.6 B.subtilis (x1000) fig.7 B.subtilis 표본 (x1000)B.subtilis는 조에서 만든것으로는 그 모양을 판별하기 어려웠다. 단지 막대 모양의 간균이라는 것만 확인할 수 있었으나 표본을 통해서 막대의 양쪽 끝이 둥근 E.coli와는 다르게 B.subtilis는 막대의 양 끝이 각이 져 있는 것을 확인할 수 있었다. 색깔은 Methylene Blue로 염색하였기에 푸른색으로 나타났다.6. DiscussionE.coli 중 첫 번째로 만든 것은 현미경으로 관찰했을 때 균이 보이기 보다는 붉은 액체만이 주로 보였다. 이는 staining 과정에서 Washing 이 제대로 이루어 지지 않았기 때문이라고 본다. 육안으로는 염색약이 거의 남아 있지 않는 상태라도 균은 이미 염색이 되어 있으므로 현미경으로 충분히 관찰할 수 있으나 아무래도 처음하는 Staining이다 보니 미숙했던 것 같다. 다행히 두 번째 E.coli 슬라이드는 깔끔하게 잘 만들어 진 것 같다.S.aureus의 관찰에선 특별히 문제가 되는 점이 없었다. 다만 역시 E.coli의 첫 번째 슬라이드에서처럼 염색약이 균 사이사이에 남아 있어 균들의 모양을 명확하게 확인하기엔 약간의 무리가 있었지만 비교적 염색약이 많이 씻겨 내려간 부분을 통해 균의 모양을 확인할 수 있었다.

자연과학| 2010.11.30| 6페이지| 1,000원| 조회(407)

미생물학, simple staining

미리보기

닫기