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[환경미생물학 실험] 대장균수의 측정 - MPN법

환경미생물학실험 보고서EXP 4. 대장균수의 측정 - MPN법제출자실험 일자2010.10.28날씨맑음 (2~13℃)담당교수담당조교Ⅰ. Introduction1. 실험목적대장균은 우리의 몸에 흔히 존재하는 세균이다. 또한 MPN법(Most Prable Number; 최적확수법)은 다양한 물 시료에 존재하는 특정 세균을 검출하는 방법으로, 미생물학 측면에서의 수질 평가를 목적으로 한다. 대장균은 장내 정상균총인 만큼 그 존재만으로 수질의 이상 유무를 판단하기는 어렵다. 그러나 대장균의 존재는 여타 유해 미생물의 존재를 암시하는 것이기에 의미가 있다 할 수 있다.쉽게 접근할 수 있는 장소에서 임의의 물 시료를 채취한 후 그 안의 대장균수를 측정해보는 것이 이번 실험의 목적이다. 또한 이 실험을 통해 특정 균을 불특정 장소의 시료에서 얻어내는 것을 경험해 본다.2. 이론적 배경, 원리(1) 대장균 군(Coliform group)대장균 군은 비병원성 균으로서 사람 또는 동물의 장관 내에서 기생하거나 또는 주위 환경에 넓게 분포하여 물,흙,풀,곡류등에서 검출된다. 대장균군은 다음과 같이 분류한다.대장균(Escherichia coli, 양기성균(Aerobater aerogenes), 파라대장균(Paracolobacteriun) , 폐렴 간균(Escherichia pneumoniae)대장균은 1885년 에스케리크(Escherich)에 의해서 대변으로 부터 분리된 균이며 사람 또는 동물의 장관 내에 상재하는 가장 많은 균속이다.이 균속은 더 많은 균군으로 분류되며, 그 공통적인 특징은 다음과 같다.① 정의대장균이라 함은 GRAM음성 무아포의 간균으로 유당(lactose)을 분해하여 산과 GAS를 생성하는 호기성 및 임의성균으로 사람과 동물의 내장에서 서식함. 대장균은 인축의 장관 내에 있으므로 이것이 수중에 존재한다는 것은 인축의 분료로 인해 물이 오염되어 있다는 것과 각종 소화기에 병원균에 의해 오염되어 있다는 가능성을 나타낸다.② 대장균군이 오염의 지표로 사용되는 이유먼저통전염 병균)은 대장균군과 같이 존재하므로 수인성전염병균의 유무를 간접적으로 파악할 수 있다.마지막으로 시험이 예민하여 대단히 적은 양에도 검출이 가능하다.③ 형태Gram 음성이며,폭 0.4-0.7 , 길이 1-4 의 단간균이다. 주모성 편모를 가지고 있어 운동성이 있으며 아포는 없다. 협막을 가지는 것도 있다.④ 배양호기성 또는 통성혐기성균이며 발육 최적 온도는 37 C, 증식가능 온도는 20-40 C이다. 최적pH는 7.0-8.0이며 보통 한천배지 또는 육즙 배지에서 증식이 잘 된다. 보통 한천배지에 형성된 집락(Colony)은 원형이고 융기상이며, 윤택한 표면을 형성하는 무색 불투명한 규칙적인 집락이다. 어떤 종류는 형 용혈을 일으키며, 육즙배지에서는 균등한 혼탁을 나타내면서 증식하고 배지 표면에 균막은 형성하지 않는다.⑤ 생물학적 성상포도당, 유당, 맥아당을 분해해서 산과 가스를 내며, 인돌(indol)반응은 양성이다. 우유 응고 작용,젤라틴 액화 작용이 있다. 보게스 프로스카우어(Voges-Proskauer) 반응은 음성, 메틸레드(Methyl red)시험은 양성, 유화수소(H2S)생산은 음성, 요소 분해작용는 없다.구연산 배지에서 발육되지 않는다.⑥ 저항성배양후 실온에서 몇 주일동안 생존하며, 물 또는 토양 속에서 수개월 동안 생존한다. 60 C,15-20분에서 사멸한다.페니실린에 대해서는 감수성이 없지만 대량의 설파제,스트레트마이신, 클로람페니콜,테트라사이클린 등에는 감수성이 높다.⑦ 병원성대장균(E.coli)은 일반적으로 사람 또는 동물의 장관 내에 기생하는 무해한 균이지만 대장이 아닌 다른 체강, 기관에 들어가면 병원성을 나타낸다. 이 균이 충수, 담낭, 복강 내에 침입 했을 경우 충수염, 담낭염,복막염을 일으킨다. 또 장관이나 위에 구멍이 뚫려 이 균이 복강내에 침입하면 급성복막염을 일으키고 비뇨기관에 침입하면 방관염,요도염등을 일으킨다. 피부창상에 대한 감염은 그리 흔하지 않다.(2) 최적확수법최적확수법은 세균학적 정성적 수질검사로서, 추정들어있는 시험관에 유당배지 일정량을 넣고 일정량의 검수를 넣어 35℃의 배양온도에서 24~48시간 배양하면 대장균의 유무를 알 수 있다. 이때 배지 중 펩톤의 역할은 모든 박테리아의 성장을 촉진시키는 것이고, 대장균은 다른 박테리아가 이용할 수 없는 유당을 먹이로 한다. 대장균은 혐기성조건하에 유당을 분해하므로 그 결과 낮은 pH의 산을 생성하여 CO2를 방출하고 수소가스의 생성을 돕는다. 이러한 두 가스의 유당분해의 증거로 시험관내의 듀람 발효관은 부분적으로 들뜨게 된다. 그러나 대장균 이외에 다른 박테리아도 유당배지에서 가스를 생성하기 때문에 가스발생만으로 절대적인 대장균군이라고 판단하기에는 무리가 있기 때문에 대장균군의 추정시험으로써 유당배지 발효시험을 하게 된다. 그러므로 추정시험 양성을 나타내는 박테리아는 대장균으로 확정되어서는 안 된다.② 확정시험추정시험에서 양성으로 나타났을 경우 가스를 발생하는 박테리아는 대장균군이 아닐수도 있으므로 그람음성의 유당 발효세균의 존재를 확인하기 위한 확정시험이 필요하다. 확정시험에 사용되는 접종배지로는 흔히 EMB(Erosin Methlence Blue)한천배지를 사용하낟. 이 배지에서 접종하는 방법은 추정시험 양성시험관에서 한 백금니를 채취하여 세균을 순수분리배양과 같은 방법으로 EMB 한천 배지 평판 표면에 도말 접종한다. 대부분의 세균은 염료 등에 의해 생장에 저해되나 대장균군은 유당 때문에 생장이 촉진된다. EMB 한천배지에 포함한 메틸렌브루와 이오신 두 염료는 그람양성의 세균 발육을 억제하는 효과를 가지고 있다.E.Coli. 와 E.aerogens의 집락은 크기와 녹색의 금속성 관액에서 차이를 나타낸다. 즉 E.Coli.의 집락은 그 규모가 적으며 금속성광택을 내는 반면 E.ferogens은 중심에 검은색을 띠고 볼록하고 습기가 있으며 EMB배지외에 BGLB(Brilliant Geenbile Lactose Broth)가 사용되기도 한다. 접종방법은 EMB배지 접종때와 같으며 시험관내에 듀람발효관을 넣어 일정시험확정시험에서 사용된 emb배지에서 대장균형으로 나타난 세균을 보통 한천뱆의 사면배지와 유당액체배지에 접종하여 최종적으로 검사한다. 접종한 사면배지와 한천배지를 35℃에서 2시간 배양후 유당액체배지에서 가스를 형성했는가를 조사하고 한편 사면배양의 집락은 그람염색을 실시하여 형태를 관찰하낟. 현미경으로 관찰하여 그람음성 또는 양성여부, 포자의 형성세균의 형태를 판단한다. 그 결과 그람음성이면서 포자를 형성하지 않는 막대모양의 세균으로 판정되면 검수는 음료수에 부적합한 것으로 볼 수 있다.④ 최적확수법 계산법발효관에 의한 대장균실험법은 일정량의 희석액 중에서 1개 이상의 대장균군의 유무를 결정하는 정량적인 실험이다. 정량적인 시험법은 동일 희석도의 것을 각각 5개 씩 시험하여 대장균군 양성인 발효관 수를 계산하여 확률적으로 그 수치를 최적확수로 계산한다. 최적확수란 이론상 가장 가능한 수치를 말한다.통계학상의 mode로서 시료 10ml, 1ml, 0.1ml, 0.01ml을 1/10연속수로 각기 5개씩 시험관 결과에 대하여 양성과 음성으로 판정된 시료수에 따라 계산하는 방법이다.이 때 희석액은 그 최대량을 가한 것의 전부 또는 대다수가 양성이고 희소량을 이식한 발효관의 대다수가 음성이 되도록 적당히 희석하여 사용한다.대장균군수는 전기의 양자사이에 걸친 희석단계에 따라 대체로 결정된다. 중간 부분 즉 수적근거가 얻어지는 부분의 양성 발효관수가 충분히 있도록 계획하지 않으면 안된다.MPN 를 구하는 방법으로는 먼저 TOMAS의 근사식에 의한 방법이 있다. 이 방법은 대장균의 정량법으로서 검수 100 당 이론상 있을 수 잇는 대장균의 수를 확률적으로 예상한 수치이다.근사식은 연속수 중 큰 순서에 따라 5개 시료가 전부 양성인 것은 제외하면 정확한 결과를 얻을 수 있다.또 다른 MPN 구하는 방법은 최확수표에 의한 법이 있다. 각각의 시료 비율이 다른 3~5개의 시험관을 배양하여 발생한 기포의 양이 Dahrum tube의 10% 이상을 넘는 것을 센다. 이것들의 숫자를 로 검액량을 1, 0.1, 0.01ml로 한 경우에는 표중의 숫자를 10배로 하여 기록한다. 또한 검액량을 0.1, 0.01, 0.001ml로 한 경우에는 100배로 한다. 이하 각 희석도에 따라 이에 준하면 된다.(4) 시료의 채취 및 조제시료는 멸균된 용기를 이용하여 무균적으로 채취하고 한번 채취된 시료는 어떠한 경우에도 저온(10℃이하)의 상태로 운반하여야 한다. 또한, 환경기준 적용을 위한 시료는 시료채취부터 시험분석까지 24시간을 초과하여서는 안 되며, 배출허용기준 및 방류수수질기준 적용을 위한 시료는 시료채취 후 6시간이내에 실험실로 운반하여 2시간이내에 분석을 완료하여야 한다. 만약 규정된 시간 내에 분석이 불가능할 경우에는 현장에서 분석이 가능하도록 하여야 한다.시료 중 잔류염소가 함유되었을 때는 멸균된 10% 티오황산나트륨용액으로 잔류염소를 제거하여야 한다. 예를 들어 120mL당 10% 티오황산나트륨용액 0.1mL를 넣은 경우 잔류염소 15mg/L 중화된다.시료의 균일화를 기하기 위하여 액상시료는 강하게 진탕하고 고형물이 포함된 시료는 멸균된 믹서를 이용하여 적당량의 희석액과 혼합하여 사용한다.Ⅱ. Materials1.재료(1) 물 시료학교 도서관 측 뒤편 인가 근처의 개울물 중에서 고여 있는 것을 채취했다. (바로 옆의 인가에서 생활하수를 버리는 장소로 쓰이고 있었음)(2) 기구/시약알콜램프, 시험관(샘플당 9개), 멸균 증류수, 10ml 피펫, 피펫펌프, 마이크로 피펫, 피펫 팁, Lactose broth 배지, 2X Lactose broth 배지, test tube, Durham tube2.실험방법(1) 물 시료(100ml내외) 를 채취한다.(2) 샘플 당 9개의 시험관을 준비하여 Durham tube를 넣고 3개의 시험관에 2X Lactose broth 10ml를 6개의 시험관엔 Lactose broth 배지 10ml를 넣는다.(3) 3개의 2X Lactose broth 10ml에 샘플 10ml를 접종하고, 6개의 Lactose bro.

자연과학| 2010.11.22| 9페이지| 3,000원| 조회(937)

환경미생물, MPN법, 대장균수

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[환경미생물학 실험] 그람 염색

환경미생물학실험 보고서EXP 4. Gram stating ; differential staning제출자실험 일자2010.10.14날씨맑음 (12~20℃)담당교수담당조교Ⅰ. Introduction1. 실험목적여러 가지 세균의 염색법 중 그람 염색법에 대해 알아보고, 실제로 염색약을 사용하여 실행해 본다. 또한 염색된 세균을 현미경으로 관찰하여 염색의 성공여부를 파악하고 더 나아가 세균의 구조를 직접 관찰해 본다. 세포벽의 구성성분 차이에 의해 탈색의 정도가 달라지게 되는데, 이 원리를 이용하여 그람 양성, 음성균을 구분한다.2. 이론적 배경, 원리(1) 염색법의 종류미생물은 그 크기가 미세하고, 액체배지에 현탁되어 있으면 투명하거나 색깔이 없기 때문에 살아 있는 상태로 관찰하기가 쉽지 않다. 따라서 이들의 형태와 특징을 관찰하기 위해서 염색하여 현미경으로 관찰하는 것이 좋다. 염색은 세포의 형태학적 특성과 세포구조를 관찰하는데 도움을 준다.염색법은 한 가지 염색시약을 사용하여 염색하는 단순염색(simple staining)과 두 가지 염색시약을 사용하는 감별염색(different staining)으로 나눈다. 감별염색에는 그람염색, 항산성염색, spore염색 등이 있다.① 단순염색(Simple staining)한 종류의 염료를 사용하여 세균의 형태, 배열, 크기 등을 신속히 관찰하는데 목적이 있다. 슬라이드 위에 도말된 균체를 한 가지 염료로 염색한다. 세균의 핵산물질과 단백질 물질은 대체로 음전하를 띠므로 이들과 강하게 결합할 수 있는 염기성 염색시약을 쓰면 염색이 훨씬 잘 된다. 단순염색 표본에서는 세균의 형태와 배열은 관찰할 수 있으나 세균의 편모, 아포, 협막과 같은 미세구조는 관찰할 수 없기 때문에 단순염색을 실시한 후 새로이 필요한 염색을 실시하여야 한다. 주로 강한 염기성 색소인 methylene blue, carbol fuchsin, crystal violet 등이 사용된다.② 음화 염색(Negative staining)Spirochaetes나 두요한 특성 중의 하나는 그람 염색성이며, 세균은 Gram 양성균과 Gram 음성균의 두 균으로 대별할 수 있다.덴마크(Danish) 세균학자 Christian Gram이 1884년 최초로 개발한 이래, 시약의 조성 및 처리 시간을 다르게 하는 변법이 개발되었으나, 기본적으로 네 가지 시약이 사용되는 것은 동일하다. 흔히 염기성 염료(Crystal violet, 또는 methyl violet), 매염제(iodine), 탈색제(알코올, 아세톤 및 이 들의 혼합액), 대조 염색제(safranin 또는 carbol fuchsin)등이 사용된다.Gram 양성균은 세포벽 성분 중 peptidoglycan이 두껍게 발달되어 있는 반면, Gram 음성균은 peptidoglycan이 얇은 대신 LPS(lipopolysaccharide)가 발달되어 있고 outer membrane이 존재한다.1단계에서 Crystal violet(염기성시약)에 의해 모든 세포는 보라색으로 염색된다. 매염제(mordant)인 Gram' iodine에 의해 Crystal violet 시약은 세포에 강하게 고정된다. 1차 염색시약과 결합하여 불용성 화합물인 CVI(crystal violet-iodine) complex를 형성하여 세포에 더욱 강하게 결합시킨다. 이 때까지 모든 세포는 그대로 보라색이다. 또한 Gram 양성균은 세포벽 중 peptidoglycan이 두꺼워 CVI complex가 peptidoglycan에 강하게 결합, 제거가 어렵다. 95% 에틸 알코올을 이용해 탈수작용을 유도한다. 이를 통해 지방을 용해하고, 단백질을 탈수시킨다. 세포벽 중 지방함유랑이 높은 그람 음성균(LPS 함유)은 지방이 알코올에 녹아 세포벽에 큰 구멍이 생기고, 세포벽에 있는 단백질의 탈수가 어느 정도 진행된다. 또한, peptidoglycan이 얇기 때문에 CVI complex가 쉽게 탈색된다. 결국 CVI complex가 쉽게 세포벽에서 떨어져 나오면서 세포벽이 무색이 된다. 세포벽에 지방 함유량이 낮은 그람icolinic acid와 칼슘 등의 함유량이 많아 외부에 대한 저항성이 강한 편으로 일반 염색 방법으로 관찰할 수 없다. 따라서 가온 염색법을 실시한다.⑤ 항산성 염색 (Acid-fast staining; Zeihl-Nelson method)세균 중 항산성을 나타내는 균종을 구분하기 위해 실시한다. 대부분의 미생물은 단순염색, 그람염색 등에 잘 염색되지만 Mycobacterium과 같은 몇몇 균주는 항산성 염색법에 의해서만 염색이 된다. Genus Mycobacterium에 속하는 세균들은 세포벽이 두꺼운 지질로 싸여 있어(wax성 물질) 염색이 잘 되지 않아 가온 염색을 해야 하고, 한 번 염색되면 acid-alcohol에 의해 탈색되지 않는 소위 ‘항산성(Acid-fast)’을 가지고 있다(대부분 미생물은 acid-alcohol로 잘 탈색이 된다).⑥ 협막염색 (Capsule staining)세포벽의 외층에 협막(capsule)이라 불리는 gelatin성 물질이나 점질층(Slime layer)으로 둘러싸여 있으며, 협막은 일반 염색을 하면 균체 주위가 불투명하고 명확히 구별되지 않기 때문에 특수한 염색법을 통해 협막을 관찰하기 위함이다.세균의 협막은세균의종류나배양배지의 조성에 따라 다르게 나타날 수 있으며 그 성분은 주로 다당류(polysaccharides), polypeptide, 당단백질(glycoprotein)으로 구성되었으며 숙주의 방어작용 및 백혈구의 탐식작용에 저항해 세균의 병원성과 관계된다.협막의 관찰은 세균 동정에 큰 도움이 되며 주로 병원성 균들이 협막을 형성한다. 협막은 일반적으로 계대 배양에서는 소실되기 쉽기 때문에 혈청이나 skim milk를 첨가한 배지에서 협막형성이 좋다. 협막은 현미경 관찰 시 이물질과 혼돈되기 쉬우며, 고정 시 가열 할 때 세포가 위축되어 나타나는 것으로 보인다.매염제로 황산동용액(CuSO4)을 사용하는데 이것은 매염효과 외에 약간의 탈수 현상을 일으켜 협막구조가 더욱 명확하게 보이도록 도와 준다. 세포는 da며 일반적으로 Leifson’s method가 우수한 것으로 소개된다.※ 편모의 위치와 편모수에 따라 무모균, 단모균, 총모균, 양모균, 주모균 등으로 분류한다.(2) 미생물의 염색원리세균의 염색은 일반적으로 세포의 모세관현상, 삼투압, 세포에의 부착과 흡수에 의한 물리적 기전, 세포구성물과 염료 사이의 전기적 전하와 화학적 친화력에 의해 염색된다. 염색시약의 화학적 구성은 무색의 Benzene ring에 연결된 발색군(Chromophore group)과 조색 군(auxochrome group)을 합한 유기 복합체이다.Benzene은 무색의 유기용매이며 여기에 발색군(Chromophore group)을 넣어서 색을 가지게 한다. 그러나 발색군 만으로는 염색이 되지 않으며 반드시 염을 형성할 수 있는 Auxochrome을 넣어줘야 한다. 이는 Chromogen의 전해질 분리에 작용하는 화학적 복합체로서 조직이나 섬유에 색소가 흡착되게 해 주는 역할을 한다(조색군).(3) 염색을 위한 기초적인 조작법① 슬라이드의 준비미생물의 도말표본을 만들기 위해 사용하는 슬라이드는 손가락의 기름이나 기타 유분을 비누나 세척제로 깨끗이 씻고 물로 헹구고 단 다음 95% 알코올로 다시 씻어내어 표면에 이물질을 없애야 한다.② 도말표본준비도말(smear)이란 슬라이드 위에 미생물 시료를 얇게 펴는 조작이다. 이 때 도말을 두껍게 하거나 균체를 너무 많이 도말하는 것은 절대 피해야 하며, 도말표본은 건조 후 흰색의 얇은 필름상이 나타나도록 적당량의 균체를 도말하여야 한다. 이 때 사용하는 균주의 배양상태에 따라 도말하는 방법이 다른데, 액체 배양된 균주는 액체배양액 1～2 백금이를 슬라이드 위에 옮겨 잘 펴서 건조시키면 된다. 그러나 고체배지에서 배양된 균주는 먼저 슬라이드 위에 멸균된 증류수를 한 백금이 먼저 옮겨놓고 멸균된 백금이 끝으로 약간의 고체 배양된 균주를 묻혀서 증류수와 골고루 섞으면서 얇게 펴면서 도말한다.③ 열고정 (heat fixation)슬라이드 위에 도말된 균체를 sulfate, Iodine, Phenol, Tannic acid(5) Escherichia coli사람이나 동물의 장 속에 사는 세균이다. 특히 대장에 많이 존재하여 대장균이라 한다. 장 이외의 부위에서는 병을 일으킨다. 항원구조에 의해 구별하면, O항원에서 1∼136, K항원에서 1∼78, H항원에서 1∼40으로 분류된다. 대장균은 장 속에서는 병원성을 나타내지 않는 것이 보통이지만, 장 이외의 부위에 들어가면 방광염 ·신우염 ·복막염 ·패혈증 등을 일으키고, 또한 장 속에서도 O의 26, O의 55, O의 111 등과 같은 항원형 대장균은 젖먹이에서 성인에 이르기까지 전염성 설사를 일으키는 경우가 있으므로 특히 병원성대장균이라고 한다. 열에 대한 저항성이 약하여 60℃에서 약 20분간 가열하면 멸균된다. 그러므로 여름철에 물을 끓여 마시면 설사를 예방할 수 있다. 대장균은 양쪽 끝이 둥글고 길이 2∼4μm, 나비 0.4∼0.7μm의 간균으로 편모를 가지고 있어 운동성이 있다. 포자를 만들지 않으며, 그람음성균이다.Ⅱ. Materials1.재료(1) 균주배양한 지 24시간 이내의 세균 배양액으로 만든 세균 도말표본(Escherichia coli)(2) 기구/시약백금이, 슬라이드 글라스(Microscope slide), 알콜램프, 세척병(멸균 증류수), staning tray, 현미경, lens paper, Bibulous paper of paper towels, 유침유, 그람염색액 세트(crystal violet, Gram's iodine, 95% ethyl alcohol decolorizer, Safranin)2.실험방법(1) 도말 표본 준비(-> 도말한 슬라이드 글라스 면이 헷갈릴 수 있으므로 유성펜으로 조이름과 균주명을 작성)① 깨끗한 슬라이드글라스를 준비 : 기름 또는 먼지 제거를 위해 95%에탄올 또는 물로 세척 후 건조.② 화염 멸균한 백금이로 균을 취함 : 두껍게 도말 시 관찰이 어려우므로 백금이에 살짝 묻히듯 취함. 마치 안 묻은 듯이 묻혀다.

자연과학| 2010.11.22| 9페이지| 3,000원| 조회(364)

세균, 그람염색, 환경미생물, 염색법, 액체배지

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회분의 정량 실험보고서

식품화학 및 실험 보고서Exp 5. 회분의 정량Ⅰ. Introduction1. 실험목적식품에 고온을 가하면 수분을 비롯한 여러 성분들이 소실되지만 회분만은 그 분자구조의 특성상 거의 대부분 남아있게 된다. 이번 실험에서는 수분의 정량에 이어 회분의 정량을 해 본다. 그 동안 사용하였던 오븐 대신 전기로를 사용하여 550℃의 고온으로 시료를 건조시켜서 그 항량을 측정하게 된다.2. 이론적 배경, 원리(1) 무기성분식품을 태울 때 남는 재의 시료에 대한 %를 회분 또는 조회분이라 한다. 이것은 무기성분의 총량과는 일치하지 않는데, 그 까닭은 식품 시료를 400~600℃에서 가열하면 유기물은 격렬하게 산화 분해되어 여러 가지 가스(수증기, 수소, 탄산가스, 암모니아, 아황산가스 등)를 생성하면서 타르상으로 되고 곧 탄화되던가 그 동안에 유기물과 결합된 양이온은 탄산염으로 되고, 일부는 공존하는 음이온과 반응하여 인산염과 황산염이 되며, 또한 염소 등의 휘발성 무기물은 휘산되므로 조성이 다르게 되기 때문이다. 탄소는 결국 탄산가스로 되고, 인산은 대개 500℃ 이상에서 강하게 가열하면 양이온과 결합되어 용융상태로 되며, 일부 탄소는 재 가운데서 산소의 공급이 부족하여 회화가 진행되지 못한다. 일반적으로 450~500℃에서 시간을 늘어뜨려 회화시키는 것이 좋다. 그러나 회화온도에서 회분 조성도 다소 변하므로 일정한 온도에서 행하는 것이 바람직하다.(2) 정량분석정량분석은 검사하고자 하는 특정 물질이 샘플 안에 존재하는지 알고자 하는 정성분석보다 한 걸음 더 나아간 단계로, 해당 물질이 정확히 어느 정도의 양으로 존재하는지 분석하는 법이다. 정량분석의 방법에는 여러가지가 존재하지만 편의상 물질의 어떠한 성질을 이용해서 적정하는가에 따라 크게 물리적 방법과 화학적 방법으로 분류할수 있다. 물리적 방법에는 무게분석과 용량분석법이 있는데 용량분석법을 흔히 부피분석법 이라고 부른다.Ⅱ. Materials1. 장치회화 용기 : 자제 증발접시, 자제 도가니전기로 (회화로) : 700℃까지 온도조절이 가능한 것. 온도가 높으므로 꺼낼 때 주의.전자저울, 데시케이터, 도가니 집게, 장갑2. 재료Exp 5.실험재료 : 검정콩가루100g당에너지수분단백질지질회분탄수화물섬유소검정콩382Kcal11.0g35.2g18.2g4.5g31.1g4.7g검정콩가루416Kcal4.6g37.0g20.9g5.2g32.3g2.7g3. 실험방법Exp 5.① 빈 도가니를 회화로에서 회화하여 항량()을 측정한다.② 도가니에 샘플을 3g 넣고 550℃에서 1시간 가열 후 30분 방냉한 다음 무게를 측정한다. 항량()이 나올 때까지 반복한다.(건조가 끝난 후 바로 회화로를 열면 화상의 위험이 있으므로 200℃ 정도로 온도가 내려간 뒤 도가니를 꺼내도록 한다.)Ⅲ. Result1차2차3차1번 도가니 (g)22.862322.862622.86252번 도가니 (g)23.951123.951823.9517* 도가니 수분항량 결과1차2차3차1번 도가니 (g)23.040323.016723.01462번 도가니 (g)24.270224.104424.1043* 시료 회분항량 결과? 시료의 무게 : 1번 도가니 - 3.0000g, 2번 도가니 - 3.0000g? 시료를 넣기 전의 도가니 무게 : 1번 - 22.8625g, 2번 - 23.9517g시료를 넣은 후의 도가니 무게 : 1번 - 25.8625g, 2번 - 26.9517g? 시료 중 회분의 함량(%) =- 도가니의 무게(g)- 시료 + 도가니의 무게(g)-을 회화한 후, 회분과 도가니를 항량한 무게(g)S - 시료의 양? 1번 도가니 회분함량(%) -2번 도가니 회분함량(%) -시료 내 평균 회분함량(%) -Ⅳ. Disscussion- 첫 번째 제출 보고서의 고찰콩가루 3g에서 94.9%나 되는 양이 회분이라는 의외의 결과가 도출되었다. 그러나 이는 명백히 사실과 다르다. 콩가루에는 탄수화물, 단백질, 지방의 총 함량이 90%가량이라고 식품영양성분데이터베이스에 명시되어 있다. 또한 전 실험에서 콩가루 안의 수분 함량이 5.5855%라는 결과가 나왔었는데, 이번 실험의 회분함량과 합쳐 보면 100.4855%가 나오게 된다. 분명히 무언가 오류가 있었을 것으로 추정된다.그 원인으로 보이는 것은 몇 가지가 있다. 우선, 회화로 안에서 증발되는 것은 회분만이 아니다. 105℃의 오븐에서 증발되는 수분이 550℃에서 증발되지 않을 수 없다. 또한 탄수화물, 단백질, 지방 등의 영양소 또한 탄소, 질소등이 수소결합, 반 데르 발스 결합등으로 결집되어 있는 형태이다. 비교적 단단하다고 여겨지는 수소결합또한 550℃의 열에너지를 받으면 매우 충분히 끊어질 수 있다.그러나 이것을 감안하더라도 총 질량의 94.9%가 손실된 것은 석연치 않다. 만일 이것이 다른 조에서도 비슷하게 나오는 일반적 수치가 아니고 극단적으로 적은 수치일 때는 다른 가정을 할 수 있다. 건조, 방냉 혹은 이동 중에 시료가 소실되었을 가능성이다. 그러나 이 가능성 또한 배제되어야 한다. 그 이유는 두 개의 도가니에서 거의 비슷한 정도의 손실률을 보이기 때문이다. 실험자의 실수가 개입되었을 시에는 눈에 띄는 손실률의 차이가 있어야 한다. 실수 때문이라 하더라도 두 도가니 안의 시료들이 0.01g내외로 같은 양이 소실될 가능성은 매우 적다.결국 먼저 언급했던 회분 외 물질의 소실 가능성에 더욱 무게가 가해진다. 다만 그 정확한 기작이나 원리는 이 실험에서 알기는 어렵다.

자연과학| 2010.11.22| 5페이지| 3,000원| 조회(400)

식품, 화학, 실험보고서, 조회분, 정량

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[식품안전학] 멜라민 분유파동 발표 ppt

식품 안전학 발표 - 분유 파동목 차분유파동 이전의 징후 사건의 발단 사건의 중심 파장 우리나라에서의 영향 우리나라에서 유통이 금지된 식품 멜라민 이란 ? 멜라민의 쓰임새 멜라민은 식품 중에 사용할 수 있는가 ? 중국이 멜라민을 사용한 이유 멜라민의 위해성 멜라민수지로 만든 식기의 안전성멜라민 파동의 재발 재발의 원인 참고문헌1. 분유파동 이전의 징후미국과 캐나다에서 2004년과 2007년에 개와 고양이 등의 애완동물이 멜라민 독성에 따른 급성신부전으로 5천여 마리 이상이 희생 죽은 개와 고양이들을 해부해 조사하는 과정에서 보건당국은 멜라민 성분이 신장에 결정화된 물질들을 만듦 신장계통 질환(요로결석, 급성신부전) 초래분유 파동의 주인공인 싼루 분유2. 사건의 발단(중국) 주로 만 3세 미만의 아이들이 전국적으로 '신장결석' 증세로 입원하는 사례가 갑자기 증가 2008년 9월 11일, 깐수성에서 아이가 사망 조사 결과, 신장결석을 유발한 것은 분유에 함유된 공업용 화학원료인 '멜라민' 때문2-1. 사건의 중심싼루 그 룹 지난 1995년부터 적극적인 시장 마케팅에 나섬 마케팅을 위해 연예계 스타와 정부 관리들까지 동원. 업계에서 가장 낮은 가격으로 제품을 판매해 시장 점유율 1위를 차지. 광고비 로비자금 수익2-2. 파장위생부 2008년 11월 27일 - 멜라민으로 입원한 유아 : 모두 29.4만 명 ( 6명 사망, 154명은 중태) - 멜라민 분유 피해가 홍콩, 대만까지 확산 2008년 10월 말까지 7,000통의 유제품이 폐기처분 - 중국 175개 분유 생산업체 중 66개사의 사업면허 취소 - 월 평균 1.2만 톤에 달하던 중국 유제품 수출량이 10월에 1,036톤으로 급감 중국산 원료를 사용한 해외 식음료 제품에서도 멜라민 검출 - 홍콩, 대만, 싱가포르, 말레이시아, 한국, 일본 등지에 수출된 식품에서 멜라민 잇따라 검출 홍콩식품안전센터 2008년 10월 25일 - 중국산 계란에서 멜라민 검출2-3. 우리나라에의 영향 (08년 기준)2-4. 우리나라에서 유통이 금지된 식품소매점에서 중국산 멜라민 분유가 함유된 과자를 수거하는 모습.3. 멜라민 이란 ?이름 : 1,3,5-triazine-2,4,6-triamine 염기성 유기 화합물 일반적인 상온의 물에는 약간 녹지만, 수온이 높아지면 비교적 잘 녹음 약 350°C 이상의 온도 : 파괴되며 융해가 일어남 멜라민은 시안아미드(cyanamide)의 3중 화합체 질량의 66%가 질소3-1. 멜라민의 쓰임새1958년, 소의 사료로 사용 1978년, 다른 비단백질 질소원보다 분해 능력이 저조하다는 이유로 사용금지 됨 현재, 강한 플라스틱 원료의 생산에 사용 - 바닥 타일, 주방기구 등 플라스틱제품3-2. 멜라민은 식품 중에 사용할 수 있는가 ?식품제조·가공에 사용할 수 없는 물질로, 여러 국가 및 국제규격식품위원회(CODEX) 등도 국제적으로 식품에 사용을 허용하지 않음 미국 FDA TDI = 0.63 mg/체중 1kg (per day) 유럽 식품 안전청 TDI = 0.5 mg/체중 1kg (per day) 실험동물 : 24시간 내 소변 등으로 90%이상 배설 → 사람에서의 체내 배설에 대한 연구는 없음 But 최근 중국에서 생산된 분유를 먹은 유아에서 신장결석 발생 및 사망에 대한 보고가 있었으므로 주의가 필요함3-3. 중국에서 멜라민을 이용한 이유우유 내 유단백 함량을 측정 방법 : 켈달 분해법 보통의 생우유 : 평균 30% 정도의 단백질이 함유 멜라민을 첨가할 경우 : 60% 이상으로 단백질 함유량 증가3-4. 멜라민의 위해성여러 종류의 동물에서 요로결석과 방광결석 등을 유발 BUT 적은 양의 멜라민은 매일 섭취해도 인체에 해롭지 않다 ! * 독성물질에 대한 상대평가 = 반수치사량(Lethal Dose 50) - 멜라민의 경우 실험 쥐에 대한 반수치사량 = 3000 mg/kg (멜라민의 독성이 니코틴(1 mg/kg)보다 약 3,000배 정도 약하고, 술(10,000 mg/kg)보다 약 3배 정도 강함) * 화학물질에 있어서 치사량이 2000 mg/kg 이상이면 독성이 없는 것으로 평가But,유아는 성인에 비해 신장이 기능이 미비. 유아의 주식은 모유 미수유시 100% 분유이며, 하루 섭취량 또한 매우 많음. 주식으로 분유 섭취 시 최고 2,563mg/kg의 고농도 멜라민에 노출 많은 양을 오래 섭취할 경우, 신장 결함이 일어나 사망에 이름3-5. 멜라민수지로 만든 식기의 안전성국내 멜라민의 용출규격 = 30㎎/ℓ이하 - 2007년도 수행된 멜라민에 대한 용출시험 결과 모두 적합. 전자레인지 사용 : 최대 7분까지 조리 시에도 멜라민의 용출량은 기준치 이하4. 멜라민 파동의 재발 (2010년 7월)중국 위생부 최근 칭하이 등 3개성에서의 '멜라민 분유'사건이 재발 관리감독을 강화하겠다고 밝힘 원유의 단백질 함량 기준을 완화 2.95% 2.8%4-1. 재발의 원인중국 식품 산업의 문제점 - 원유 공급업체가 분산되어 있음 - 원유 공급 부족과 관리감독 부실 - 중국의 식품제조업의 진입장벽이 낮아 다수의 기업이 생김5. 참고 문헌SBS 뉴스 http://news.sbs.co.kr/section_news/news_read.jsp?news_id=N1000477055 http://wizard2.sbs.co.kr/resource/template/contents/44_netv.jsp?vProgId=1000466 vVodId=V0000330699 vMenuId=1008862 uccid=10000406523 st=0 cooper=SBS 식약청 멜라민관련 자료 http://kfda.go.kr/melamine/main/melamine_03.html 인터넷 블로그 http://blog.daum.net/sanghaok/15748994Q AThanks for your listening.{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2010.11.22| 22페이지| 3,000원| 조회(445)

분유, 멜라민, 식품안전, 사건의 발달

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어린이용 무설탕 발효유 조사

생애주기 영양학 과제 1- 어린이용 발효유에 관하여,특히 이 중 ‘무설탕’발효유를 표방하는 제품에 관하여Ⅰ. 서론어린이용 발효유는 유가공품 회사라면 최소 1~2개의 제품군은 구비해 놓고 있을 정도로 많이 소비되고 있다. 그런 만큼 경쟁도 치열하다. 사과맛, 키위맛 등 다양한 맛을 강조하는 것 정도는 고전적인 차별화라 할 수 있으며, ‘웰빙’이라던지 ‘유기농’이라는 수식어를 붙이는 경우도 많이 볼 수 있다. 이 중에서 가장 관심을 끌었던 것은 바로 ‘무설탕’발효유였다. 밑도 끝도 없는 웰빙이나 유기농보다는 신뢰가 갈 만한 객관적인 수식어이면서도, 과연 이 수식어가 실제로 ‘객관적’인지 의문이 갔다. 그래서 이번 과제의 주인공으로 무설탕 발효유에 대해 조사해 보기로 했다.먼저 우리나라의 대표적인 발효유 업체인 남양유업(http://company.namyangi.com)과 매일유업(http://www2.maeil.com/)의 홈페이지를 방문하여 발효유 제품군에 대해 알아보았다.--- 남양유업의 발효유 제품군 ------ 매일유업의 발효유 제품군 ---남양유업은 19개 제품군 중 5개, 매일유업은 16개 제품군 중 4개의 유아, 아동용 발효유를 내놓고 있는 것으로 파악되었다.Ⅱ. 본론현재 판매되고 있는 어린이용 발효유들 중 ‘무설탕’을 제품 전면에 강조한 것은 남양유업의 ‘이오 무가당’과 매일유업의 ‘슈가리스 엔요’이다. 인터넷 검색을 하던 중 한 주부의 블로그에서(http://blog.naver.com/lang_1228) 여러 제품들의 비교분석을 하는 것을 보고 사진을 인용하였다.이오 무가당 슈가리스 엔요이 두 제품은 모두 탈지유를 기반으로 하고 있다. 설탕이 안 들어간 대신 파인애플과즙이나 배농축과즙이 들어가 있으며, 수크랄로스가 함유된 것이 공통점이다. 사실 파인애플과즙과 배농축 과즙의 경우 제품에 향미를 제공하고 일정량의 단맛을 제공하는 것은 맞다. 그러나 함께 들어있는 수크랄로스는 설탕의 600배가 넘는 단맛을 지닌 합성감미료이다. 수크랄로스는 설탕으로부터 제조되어(이름으로부터 유추해 볼 수도 있다) 이와 비슷한 단맛을 가지지만 열량은 없다. 그러므로 단당류를 직접적으로 첨가하였다고 할 수 없는 것이다.그런데 두 제품의 성분함유량 표기를 자세히 보면 이오의 것이 더 자세하고 품목도 많다는 것을 알 수 있다. 그러나 이는 원 재료인 탈지유에 기본적으로 포함되어 있는 것으로 보인다. 칼슘, 철분, 아연, L-로이신, 비피더스균, 비타민 A, 비타민 B6 등은 정상적인 탈지유를 넣었다면 없을 수 없는 성분이다. 물론 이 외에도 업체에서 추가적으로 첨가한 여타 유익한 성분들도 눈에 띈다.(덱스트린, 복합비타민 등)그러나 이 성분의 함유량은 대개 유아 및 아동들의 해당 성분 필요량이나 충분섭취량에 크게 못 미친다. 예를 들어 굳이 철분 0.03mg을 섭취하자고(그것이 아이들의 몸으로 전량 흡수된다는 보장 또한 없다) 수십, 수백 병의 발효유를 먹일 수도 없다. 그 전에 아이들이 비만이 될 것이다. 물론 위의 두 제품들에 설탕이 안 들어있어서 다른 제품들에 비해 열량이 적은 것은 사실이다. 그러나 이것들은 무‘설탕’인 것이지 무‘열량’이 아니다. 탈지유나 과즙으로도 이미 상당량의 열량이 충족되는 것이다.

자연과학| 2010.11.22| 4페이지| 1,000원| 조회(127)

발효유, 생애주기, 무설탕

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