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황색포도상구균 시험 방법(단계별 사진 첨부)

황색포도상구균 분석 매뉴얼황색포도상구균은 인간이나 동물의 피부 , 소화관에 상재하는 포도상 구균의 하나로 인간에게 농양 등 다양한 표피 감염 , 식중독 , 폐렴 , 수막염 , 패혈증 등을 일으키는 원인균이다 . 군집을 이루는 균의 모양이 포도 송이를 닮아 붙여 졌으며 통형혐기성의 그람양성 구균이다 . 황색포도상구균 시험법으로는 황색포도상구균의 유무를 검사하는 정성시험과 황색포도상구균의 수를 산출하는 정량시험이 있다 . 1. 분석항목에 대한 소개 1. 실험실과 실험대는 항상 청결을 유지하고 실험장비와 기구는 항상 일정한 장소에 보관한다 . 2. 실험장비와 기구는 정해진 매뉴얼의 방법에 준하여 사용한다 . 3. Coagulase 시험은 황색포도상구균의 전형적인 특징을 나타내는 것이므로 필히 확인 후 진행한다 . 4. 황색포도상구균은 사람 손에도 존재하기 때문에 특히 실험 시 오염에 주의한다 . 5. 정량시험 시 수치가 기준 이하로 나온 경우는 확인시험을 생략할 수 있다 . 2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항 황색포도상구균 분석 매뉴얼3. 분석에 필요한 기자재 및 소모품 순위 기자재 및 소모품 보관 장소 1 고압멸균기 미생물분석준비실 2 저온배양기 미생물실 ( 균접종 , 배양 , 판독 ) 3 무균작업대 4 자동저울 5 자동피펫 (1000 μL ) 6 피펫팁 (1000 μL ) 7 멸균백 8 페트리디쉬 9 시험관 10 광학 현미경 11 슬라이드 글라스 및 커버 글라스 12 백금이 13 균질기 황색포도상구균 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 1 10%Nacl 1000g 실온 22.5g 2 TSB 배지 500g 실온 225mL 3 Baird-Parker 배지 500g 실온 20mL 4 NA 배지 500g 실온 20~100mL 5 Coagulase 500g 냉장 1vial 6 API Staph 500g 냉장 1~5strip 황색포도상구균 분석 매뉴얼황색포도상구균 분석 매뉴얼 5. 분석을 위한 시약 조제 순위 조제 시약명 조제 방법 1 10%Nacl TSB TSB 배지량의 10% 의 Nacl 을 가하여 제조 2 Baird-Parker 배지 Baird-Parker 500mL 기준 Egg-Yolk Tellurite 25mL 3 Coagulase Coagulase 1vial + 멸균 DW 3mL6 . 분석을 위한 표준균주 황색포도상구균 분석 매뉴얼 순위 표준균주 규격 보관방법 1. Staphylococcus aureus KCCM 12256 1vial -70 ℃ 냉동7. 분석 Method( 증균배양 ) 황색포도상구균 분석 매뉴얼 검체 25g 을 채취하여 10%Nacl TSB 225mL 을 첨가한다 . 35~37 ℃에서 18~24 시간 배양한다 .7. 분석 Method( 분리배양 ) 황색포도상구균 분석 매뉴얼 Baird-Parker 배지에 접종한다 . 35~37 ℃에서 18~24 시간 배양한다 . 투명한 띠로 둘러싸인 광택이 있는 검정색 집락을 선별하여 확인시험을 실시한다 .7. 분석 Method( 정성 - 확인시험 ) 황색포도상구균 분석 매뉴얼 의심집락을 NA 배지에 접종한다 . 35~37 ℃에서 18~24 시간 배양한다 . 그람염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한다 . Coagulase 시험을 실시하여 35 ℃에 배양 , 24 시간 이내의 응고유무를 판정한다 . Coagulase 양성으로 확인된 것은 API Staph kit 로 생화학 시험을 실시한다 .7. 분석 Method( 정량시험 ) 황색포도상구균 분석 매뉴얼 검체 25g 을 채취하여 225mL 의 Saline 을 가하여 2 분간 고속으로 균질화한다 . 각 단계별 희석액을 Baird-Parker 배지 3 장에 0.3, 0.4, 0.3mL 씩 총 1mL 이 되게 도말한다 . 35~37 ℃에서 48±3 시간 배양한다 . 불투명한 띠로 둘러싸인 광택이 있는 검정색 집락을 계수한다 .7. 분석 Method( 정량 - 확인시험 ) 황색포도상구균 분석 매뉴얼 5 개의 의심집락을 NA 배지에 접종한다 . 35~37 ℃에서 18~24 시간 배양한다 . 그람염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한다 . Coagulase 시험을 실시하여 35 ℃에 배양 , 24 시간 이내의 응고유무를 판정한다 . Coagulase 양성으로 확인된 것은 API Staph kit 로 생화학 시험을 실시한다 .8. 계산식 황색포도상구균 분석 매뉴얼 전형적인 집락수 × 확인된 황색포도상구균 집락 수 × 희석배수 선별한 집락 3 장의 집락을 합한 결과 100 개의 전형적인 집락이 계수되었고 5 개의 집락을 확인한 결과 3 개의 집락이 황색포도상구균으로 확인되었을 경우 시험용액 1mL 에는 황색포도상구균의 수는 10 X 100 X (3/5) = 600 으로 계산한다 .9. SOP Flow Chart( 정성시험 ) 검체 25g + 9 배 10%Nacl TSB ↓ 35~37 ℃에서 18~24 시간 증균배양 ↓ Baird Parker 배지에 접종 ↓ 25~37 ℃에서 18~24 시간 배양 ↓ 투명한 띠로 둘러싸인 검정색 집락 의심집락 NA 배지에 접종 ↓ 35~37 ℃에서 18~24 시간 배양 ↓ 그람염색 ↓ 그람 양성 구균 Coagulase test ↓ 응고확인 API Staph 황색포도상구균 분석 매뉴얼 증균배양 분리배양 확인시험9. SOP Flow Chart( 정량시험 ) 검체 25g + 9 배 Saline ↓ 균질화 Baird Parker 배지에 0.3, 0.4, 0.3mL 씩 총 1mL 도말 ↓ 35~37 ℃에서 48±3 시간 배양 ↓ 투명한 띠로 둘러싸인 검정색 집락 ( 계수 후 ) 5 개의 집락을 NA 배지에 접종 ↓ 35~37 ℃에서 18~24 시간 배양 ↓ 그람염색 ↓ 그람 양성 구균 Coagulase test ↓ API Staph ↓ 희석배수 X 집락수 X 확인 동정된 균수 황색포도상구균 분석 매뉴얼{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2022.05.31| 14페이지| 1,500원| 조회(215)

미생물, 식중독균, 황색포도상구균, 미생물실습

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클로스트리디움 퍼프린젠스 시험 방법(단계별 사진 첨부)

클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼클로스트리디움 퍼프린젠스는 아포를 형성하는 그람 양성 혐기성 간균이다 . 통상적인 균은 90℃, 30 분 또는 100℃, 5 분의 가열로 사멸된다 병을 일으키는 병원균은 100℃, 1 시간 혹은 그 이상의 가열에서는 사멸되지 않는 내열성 균으로 장 독소를 생산한다 . 건강한 사람이나 동물의 장관 내 , 토양 , 하수 및 먼지 등 자연계에 널리 분포해 있다 . 기름에 튀긴 식품 , 식육 , 식육가공품 , 가열조리식품이 주요 원인식품이다 . 1. 분석항목에 대한 소개 실험실과 실험대는 항상 청결을 유지하고 실험장비와 기구는 항상 일정한 장소에 보관한다 . 실험장비와 기구는 정해진 매뉴얼의 방법에 준하여 사용한다 . 클로스트리디움 퍼프린젠스는 혐기성 균이므로 모든 실험조건을 혐기성으로 맞추어 실험한다 . 호기 , 혐기 발육시험 시 혐기성에서 발육하고 , 호기성에서도 발육이 확인되면 클로스트리디움 퍼프린 젠스가 아니라고 판단한다 . 4 종 GAM 배지는 glucose, lactose, inositol, raffinose 각 당 함량을 1 % 로 하여 제조한다 . 정성 시험 시 분리배양 배지는 난황첨가 TSC 한천배지이고 , 정량 시험 시 배양배지는 난황을 첨가하지 않은 TSC 한천배지 이므로 주의해서 실험한다 . 2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼3. 분석에 필요한 기자재 및 소모품 순위 기자재 및 소모품 보관 장소 1 고압멸균기 미생물 분석준비실 2 저온배양기 미생물실 ( 균접종 , 배양 , 판독 ) 3 무균작업대 4 자동저울 5 자동피펫 (1000 μL ) 6 피펫팁 (1000 μL ) 7 멸균백 8 루프 (10 μL ) 9 시험관 10 혐기 jar 11 현미경 12 슬라이드 글라스 및 커버글라스 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약 및 배지명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 1 0.85 % Saline - 실온 225 mL 2 Cooked Meat Medium 500 g 실온 1 g 3 Perfringens Agar Base (TSC SFP) 500 g 실온 60 mL 4 Perfringens (TSC) selective supplement 10 ea 냉장 0.24 mL 5 Egg -Yolk emusion 100 mL 냉장 1 mL 6 Nutrient agar 500 g 실온 110 mL 7 GAM(Gifu Anaerobic Medium) Semi-Solid 500 g 실온 240 mL 8 D-(+)-Glucose 100 g 실온 0.06 g 9 Inositol, 98.0% 500 g 실온 0.06 g 10 D-(+)- Raffinose pentahydrate 25 g 실온 0.06 g 11 Lactose 500 g 실온 0.06 g 12 BTB-MR 500 mL 실온 소량 13 API 20A 25 strips 냉장 1 strip 14 Mineral Oil 125 mL 실온 소량 15 멸균증류수 - 실온 5~10 mL 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약 및 배지명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 16 GENbox anaer 10 pk 실온 4 pk 17 Anaerobic Indicator 100 ea 냉장 4 ea 18 BCP 5 mL 냉장 소량 19 E.H.R 5 mL 냉장 소량 20 XYL 2*5 mL 냉장 소량 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼5. 분석을 위한 표준균주 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 순위 표준균주 규격 보관방법 1. Clostridium perfringens KCCM 40947 1vial -70 ℃ 냉동6 . 분석 Method ( 정성시험 - 증균배양 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 35 ℃ , 24 시간 “ 혐기배양 ” 1. 검체 25g(mL) 을 멸균백에 취하여 225 mL 의 Saline 를 가하여 균질화한 후 검액의 1 mL 을 취하여 Cooked meat 배지의 아랫부분에 접종 하여 35~37 ℃ , 18~24 시간 혐기배양 한다 . ↳ Mineral oil 로 oli 층을 만들어 혐기배양한다 .6 . 분석 Method ( 정성시험 - 분리배양 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 증균배양액을 TSC 에 접종하여 35~37 ℃ , 18~24 시간 혐기배양한다 . 배양 후 불투명한 환을 가진 황회색 집락은 확인시험을 실시한다 . ↳ 증균배양 후 배지가 탁해지고 , 배지 사이에 기포가 있거나 배지가 떠오르면 C.perfringens 를 의심해볼 수 있다 .6 . 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 분리배양된 평판배지 상의 집락을 NA 에 접종하여 35~37 ℃ , 18~24 시간 혐기 , 호기 배양하여 혐기에서는 발육 , 호기에서는 비발육을 확인한다 . ( 공전에서는 NA 를 사용하지만 잘 자라지 않을 수 있어 BAP 로 대체하기도 함 .) NA 에 혐기배양 된 균을 그람 염색하여 그람 양성 간균임을 확인한다 .6 . 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 1% 의 glucose, inositol, raffinise , lactose 를 첨가한 GAM 배지에 접종하여 1~2 일 배양 후 운동성을 확인하고 , 3 일 째 배양한 날에 BTB-MR 시약을 가해 붉은색을 띄는 것을 양성 판정한다 . glucose, inositol, raffinose , lactose 를 분해하고 , 운동성이 없는 것을 확인하면 Lecithinase 억제실험을 실시한다 . 난황이 첨가된 TSC 배지에 접종하여 35~37 ℃ , 24 시간 혐기 배양 후 투명한 환이 있는 황회색 집락을 양성으로 판정한다 . ↳ C.Perfringens 가 4 가지 당을 발효하여 산과 Gas 발생 → 배지 균열 , 배지 윗부분 기포 C.Perfringens 는 운동성이 없으므로 접종한 부분에서만 균이 자람 BTB-MR 은 산성에서 붉은색을 띈다 .6 . 분석 Method ( 정량시험 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 검체 25g(mL) 을 멸균백에 취하여 225 mL 의 Saline 를 가하여 1~2 분간 저속으로 균질화한 후 10 배 단계 희석용액을 만든다 . ↳ 공기와의 마찰을 최대한 으로 줄이기 위해 저속으 로 균질화함6 . 분석 Method ( 정량시험 및 확인시험 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 시험용액 및 단계별 희석액 1 mL 씩을 2 매 이상의 멸균 페트리접시에 무균적으로 분주하고 , 43 ～ 45 ℃로 유지 ( 제조한 배지를 실험하는 동안 상온에 두면 더 빠르게 실험 가능 ) 한 난황을 첨가하지 않은 TSC 한천배지 10 ∼ 15 mL 를 가하여 좌우로 돌리면서 잘 혼합한 후 응고시킨다 . ( 이 때 배지가 페트리디쉬 뚜껑에 닿지 않도록 주의 ) 35 ∼ 37 ℃에서 24±2 시간 혐기 배양한다 . 150 개 이하의 전형적인 검은색 집락이 확인된 평판을 선별하여 각 집락수를 계수한다 . 계수한 평판에서 5 개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 NA 에 접종하고 35 ∼ 37 ℃ 에서 18 ∼ 24 시간 혐기 배양한 후 정성시험법의 확인시험에 따라 실시한다 . 1 mL 1 mL7. 계산식 전형적인 집락수 × 확인된 클로스트리디움 퍼프린젠스 집락 수 × 희석배수 선별한 집락 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다 . 예로 10 -4 에서 평균집락수가 85 개이었고 , 이 중 5 개의 집락을 확인한 결과 4 개의 집락이 클로스트리디움 퍼프린젠스로 동정되었을 경우 85×(4/5)×10,000=680,000 으로 계산한다 .8 . SOP Flow Chart ( 정성시험 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 25 g Sample + Saline 225 mL ( 균질화 3 분 , 공기가 적게 들어가도록 저속으로 ) ↓ Cooked Meat 배지 검액 1 mL 접종 , 35 ~ 37 ℃ , 18 ~ 24 시간 , 혐기배양 ↓ 난황 첨가 TSC 한천배지에 접종 35 ~ 37 ℃ , 18 ~ 24 시간 , 혐기배양 ↓ 불투명한 환을 가지는 황회색 집락을 취함 ↓ 분리배양된 집락을 NA 배지에 계대 35 ~ 37 ℃ , 18 ~ 24 시간 , 혐기 배양 및 호기배양 ↓ 그람 염색 실시 ↓ GAM 배지 35 ~ 37 ℃ 3 일 배양하여 당 분해 확인 1 ~ 2 일 배양하여 운동성 없는 것을 확인 증균배양 분리배양 확인시험 → 음성 ( 실험종료 )8. SOP Flow Chart ( 정성시험 ) 클로스트리디움 퍼프린젠스 분석 매뉴얼 ↓ Lecithinase 억제시험 실시 난황이 포함된 TSC 한천배지에 접종 35 ~ 37 ℃ , 24 시간 , 혐기배양 ↓ 생화학 test (API 20A or VITEK 동정 ) 확인시험{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2022.05.31| 15페이지| 1,500원| 조회(380)

미생물, 식중독균, 장클로스트리디움퍼프린젠스

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크로노박터 시험 방법(단계별 사진 첨부)

크로노박터 분석 매뉴얼그람음성 간균 , 대장균군에 속하며 1961 년 수막염 유발균으로 발견되었다 . 자연환경 중 서식장소는 명확하지 않으며 , 건강한 사람 장관 내 검출되기도 하나 , 상재균은 아니다 . 주로 병원 신생아실에서 발생하며 , 원인은 주로 조제분유나 수유 시 사용되는 용기나 기구 등이 이 균에 감염된 것이 원인이 된다 . 1. 분석항목에 대한 소개 실험실과 실험대는 항상 청결을 유지하고 실험장비와 기구는 항상 일정한 장소에 보관한다 . 실험장비와 기구는 정해진 매뉴얼의 방법에 준하여 사용한다 . 크로노박터는 대장균군의 일종으로 CESA 한천배지에서 전형적인 집락이 나오면 꼭 확인시험을 거쳐 균종을 동정해야 한다 . 검체 5 개를 실험해야 하므로 실험 전 시료량을 확인하고 실험한다 . EE Broth 는 Autoclave 하지 않고 Boiling 하여야 하며 , 접종하기 바로 직전에 만들어서 사용한다 . 2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항 크로노박터 분석 매뉴얼3. 분석에 필요한 기자재 및 소모품 순위 기자재 및 소모품 보관 장소 1 고압멸균기 미생물분석준비실 2 가열교반기 3 무균작업대 미생물실 ( 균접종 , 배양 , 판독실 ) 4 자동저울 5 저온배양기 6 탁도계 7 자동피펫 (1000 μL ) 8 피펫팁 (1000 μL ) 9 멸균백 10 루프 (10 μL ) 11 현미경 12 슬라이드 글라스 및 커버글라스 크로노박터 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약 및 배지명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 1 멸균증류수 - 실온 5~2,700 mL 2 Enterobacteriaceae Enrichment broth 500 g 실온 90 mL 3 Enterobacter Sakazakii Agar(DFI) 500 g 실온 20 mL 4 Tryptic Soy Agar 500 g 실온 100 mL 5 Gram stain kit 4*250 mL 실온 소량 6 Dropper Oxidase 50 strips 실온 1 strip 7 API 20E 25 strips 냉장 1 strip 8 API 5OCHB/E Medium 10 strips 냉장 1 strip 9 Mineral Oil 125 mL 실온 소량 10 JAMES 2*5 mL 냉장 소량 11 TDA 2*5 mL 냉장 소량 12 VP 1 2*5 mL 냉장 소량 13 VP 2 2*5 mL 냉장 소량 크로노박터 분석 매뉴얼5. 분석을 위한 표준균주 크로노박터 분석 매뉴얼 순위 표준균주 규격 보관방법 1. Cronobacter sakazakii KCCM 42932 1vial -70 ℃ 냉동6 . 분석 Method ( 정성시험 - 증균배양 ) 크로노박터 분석 매뉴얼 검체 5 관에서 검체 각 60 g 을 멸균백에 무균적으로 채취하여 540 mL 의 멸균증류수를 가한 후 35~37 ℃ , 18~24 시간 1 차 증균배양한다 . 증균배양액 10 mL 에 EE Broth 90 mL 을 가하여 35~37 ℃ , 18~24 시간 2 차 증균배양한다 .6 . 분석 Method ( 정성시험 - 분리배양 ) 크로노박터 분석 매뉴얼 3. 증균배양액을 CESA 한천배지에 도말 하여 35~37 ℃ 24±2 시간 배양한다 . 4. 배양 후 청록색 집락의 전형적인 집락에 대하여 확인시험을 진행한다 .6 . 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 크로노박터 분석 매뉴얼 1. 5 개의 전형적인 집락을 취하여 TSA 배지에 25 ℃ , 48~72 시간 배양한다 . 2. 황색 집락을 선별하여 생화학적 시험을 실시한다 . TSA6 . 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 크로노박터 분석 매뉴얼 Oxidase 시험 여과지에 황색 집락을 바르고 , Oxidase 시약을 떨어뜨려 색의 변화로 Oxidase 반응을 확인한다 . 양성은 남색 , 음성은 변화 없다 . 그람음성 간균이다 . ↳ 공전에는 없음6 . 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 크로노박터 분석 매뉴얼 황색 집락을 취하여 API20E, API50CHE 로 동정한다 . API kit 를 사용할 때는 API 매뉴얼을 꼭 참고해야 하며 , API50CHE 는 탁도계를 사용하여 0.5 McFarland 로 탁도를 맞춘 후 접종해야 한다 . Oxidase(-), L-Lysine decarboxylase(-), L-Ornithine decarboxylase(+), L-Arginine dihydrolase (+), sucrose(+), dulcitol (-), adonitol (-), raffinose (+), D-sorbitol(-), x-methyl-D- glucoside (+), D- arabitol (-) 일 경우 Cronobacter spp. 양성으로 판정한다 .7 . SOP Flow Chart ( 정성시험 ) 크로노박터 분석 매뉴얼 검체 60 g + 540 mL 멸균증류수 ↓ 35 ~ 37 ℃ , 18 ~ 24 시간 증균배양 ↓ 증균배양액 10 mL + 90 mL 의 EE 배지 ↓ 35 ~ 37 ℃ , 18 ~ 24 시간 2 차 증균배양 ↓ 2 차 증균배양액을 CESA 한천배지 접종 ↓ 35 ~ 37 ℃ , 24 ± 2 시간 배양 ↓ 전형적인 Colony 를 취함 증균배양 분리배양7 . SOP Flow Chart ( 정성시험 ) 전형적인 Colony 를 Tryptic soy 한천배지 접종 ↓ 25 ℃ , 48 ~ 72 시간 배양 ↓ 황색집락을 취하여 생화학테스트 크로노박터 분석 매뉴얼 확인시험{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2022.05.31| 12페이지| 1,500원| 조회(224)

미생물, 식중독균, 크로노박터

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캠필로박터 제주니/콜리 시험 방법(단계별 사진 첨부)

캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼아포를 형성하지 않는 그람음성 미호기성 간균이다 . 5∼10% 산소가 존재하는 미호기적 환경에서 증식한다 . 가금류 , 소 , 돼지 , 설치류 , 야생조류 , 고양이 , 개의 장관에 존재하며 , 가금류 , 비살균 우유 , 햄버거 , 치즈 , 버섯 , 패류 , 난류 , 돼지고기 등이 주요 원인식품이다 . 조리되지 않은 식품 등에 의하여 다른 식품으로의 교차 오염을 방지하고 , 조리된 식품은 냉장 보관하고 , 살균되지 않은 원유를 섭취하지 않아야 한다 . 1. 분석항목에 대한 소개 실험실과 실험대는 항상 청결을 유지하고 실험장비와 기구는 항상 일정한 장소에 보관한다 . 실험장비와 기구는 정해진 매뉴얼의 방법에 준하여 사용한다 . 모든 배양은 미호기조건으로 한다 . mCBF agar 에서 흰색 또는 투명한 집락이 보일 경우 꼭 확인시험을 실시한다 . API 동정 시 API Campy kit 로 확인한다 .( 생화학테스트 모두 포함되어 있음 ) 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성이고 , 캠필로박터 콜리는 hippurate 분해 음성이다 . API Campy kit 로 생화학시험을 진행할시 확인할 균주를 blood agar 에 도말하여 37 ℃에서 24 시간 배양한 뒤 blood agar 에 생육한 균으로 생화학 시험을 진행한다 . 2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼3. 분석에 필요한 기자재 및 소모품 순위 기자재 및 소모품 보관 장소 1 고압멸균기 미생물분석준비실 2 저온배양기 미생물실 ( 균접종 , 배양 , 판독 ) 3 무균작업대 4 자동저울 5 가열교반기 6 탁도계 7 혐기 jar 8 자동피펫 (1000 μL ) 9 피펫팁 (1000 μL ) 10 멸균백 11 루프 (10 μL ) 12 ( 위상차 ) 현미경 13 슬라이드 글라스 및 커버글라스 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약 및 배지명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 1 Bolton Broth 500 g 실온 100 mL 2 Bolton broth selective supplement 10 ea 냉장 1 mL 3 LAKED HORSE BLOOD 100 mL 냉장 5 mL 4 Campylobacter Blood-Free Selective Agar Base (Modified CCDA-Preston) 500 g 실온 20 mL 5 CCDA selective supplement 10 ea 냉장 1 vial 6 95 % Ethanol 100 mL 실온 5 mL 7 Blood Agar Plate 50 plate 냉장 1 plate 8 Dropper Oxidase 50 strips 실온 1 strip 9 Campy API KIT 10 ea 냉장 1 ea 10 Mineral Oil 125 mL 실온 소량 11 NIN 2*5 mL 냉장 소량 12 NIT 1 2*5 mL 냉장 소량 13 NIT 2 2*5 mL 냉장 소량 14 FB 2*5 mL 냉장 소량 15 ID Color catalase (ID-ASE) 2*5 mL 냉장 소량 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약 및 배지명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 16 Gram stain kit 4*250 mL 실온 소량 17 GENbox MicroAer 10 ea 실온 2 ea 18 Anaerobic Indicator 100 ea 냉장 4 ea 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 5. 분석을 위한 시약 조제 순위 조제 시약명 조제 방법 1 95 % Ethanol 100 mL 99.9 % Ethanol 95 mL + 증류수 5 mL6 . 분석을 위한 표준균주 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 순위 표준균주 규격 보관방법 1. Campylobacter jejuni ATTC 33559 1vial -70 ℃ 냉동 2. Campylobacter coli KCCM 41773 1vial -70 ℃ 냉동7. 분석 Method ( 정성시험 - 증균배양 ) 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 식품 및 식육 검체 25g(mL) 을 취하여 Bolton 배지 100 mL 에 넣고 균질화한 후 35~37 ℃ , 4~5 시간 미호기적으로 1 차 증균한다 . ( 보통 1 차 증균 생략함 .) 증균배양액을 42±1 ℃ , 24~48 시간 동안 미호기적으로 2 차 증균한다 .7. 분석 Method ( 정성시험 - 증균배양 ) 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 소 , 돼지도체 검체 25g(mL) 을 무균적으로 취하여 BPW 배지 25 mL 첨가 , 균질화한 후 혈액을 첨가하지 않은 2XBolton 배지 25 mL 을 첨가하여 42±1 ℃ , 48±2 시간 동안 미호기적으로 증균배양한다 .7. 분석 Method ( 정성시험 - 증균배양 ) 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 닭 , 오리 도체 검체 30 mL 을 무균적으로 취하여 혈액을 첨가하지 않은 2XBolton 배지 30 mL 을 첨가하여 균질화 한 후 , 42±1 ℃ , 48±2 시간 동안 미호기적으로 증균배양한다 .7. 분석 Method ( 정성시험 - 분리배양 ) 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 증균배양액을 mCCDA 배지에 도말하여 42 ℃ 24~48 시간 미호기적으로 배양한다 . 배양 후 원형 또는 불규칙한 형태로서 반투명한 흰색 또는 투명한 집락의 전형적인 집락에 대하여 분리배양에 사용한 배지에 도말하여 42 ℃ , 24~48 시간 미호기적으로 배양한다 .7. 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 캠피로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 배양된 집락을 취하여 위상차현미경으로 지그재그 모양을 관찰한다 . ( 그람 염색으로도 지그재그 모양을 관찰할 수 있다 .) 현미경상으로 확인된 균에 대하여 catalase 및 oxidase 양성임을 확인한다 . 공전에 캠필로박터 제주니 / 콜리의 순수분리에 대한 내용은 없으나 , 정확한 확인시험을 위하여 BAP 에 42 ℃ , 48 시간 미호기적으로 배양하여 순수분리한다 .7. 분석 Method ( 정성시험 - 확인시험 ) 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 확인된 균에 대하여 , API Campy 로 동정하여 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성 , 황화수소 비생성 , nalidixic acid 감수성 , cephalothin 내성 , 25 ℃에서 비생육 , 42 ℃에서 생육 여부 등을 확인하며 , 캠필로박터 콜리는 hippurate 분해 음성 , nalidixic acid 감수성 , cephalothin 내성 , 25 ℃에서 비생육 , 42 ℃에서 생육 여부 등 생화학시험을 실시한다 . Catalase Oxidase API Campy8 . SOP Flow Chart ( 정성시험 ) 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 100 mL Bolton 배지 + 검체 25 g(mL) 첨가 , 균질화 35 ~ 37 ℃ , 4 ~ 5 시간 미호기적 , 1 차 배양 ↓ 42 ±1 ℃ , 24 ~ 48 시간 미호기적 , 2 차 배양 ↓ 증균배양액을 Modified Campy Blood Free 한천배지에 접종 42 ℃ , 24 ~ 48 시간 미호기적 , 암소 배양 양성 ↓ 의심집락일 경우 항생제를 넣지 않은 Modified Campy Blood Free 한천배지에 접종 42 ℃ , 24 ~ 48 시간 배양 ↓ 위상차 현미경으로 지그재그 모양 관찰 ↓ catalase 및 oxidase 증균배양 분리배양 → 음성 ( 실험종료 ) 확인시험 → 음성 ( 실험종료 )8 . SOP Flow Chart ( 정성시험 ) ↓ nalidixic acid 감수성 , cephalothin 내성 , 25 ℃ , 42 ℃ 생육여부 시험 양성 ↓ API Campy ↓ Campylobacter jejuni /coli 양성판정 캠필로박터 제주니 / 콜리 분석 매뉴얼 확인시험{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2022.05.31| 15페이지| 1,500원| 조회(328)

미생물, 콜리, 캠필로박터, 제주니

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진균수 실험 방법(단계별 사진 첨부)

진균수 분석 매뉴얼사상균 ( 곰팡이 ), 효모와 같은 호기성 종속영양미생물의 총칭이다 . 1. 분석항목에 대한 소개 1. 실험실과 실험대는 항상 청결을 유지하고 실험장비와 기구는 항상 일정한 장소에 보관한다 . 2. 실험장비와 기구는 정해진 매뉴얼의 방법에 준하여 사용한다 . 3. 곰팡이는 오염이 잘되므로 실험에 유의한다 . 2. 분석에 들어가기 전 준비사항 및 주의 사항 진균수 분석 매뉴얼3. 분석에 필요한 기자재 및 소모품 순위 기자재 및 소모품 보관 장소 1 고압멸균기 미생물분석준비실 2 저온배양기 미생물실 ( 균접종 , 배양 , 판독 ) 3 무균작업대 4 자동저울 5 자동피펫 6 피펫팁 7 멸균백 8 페트리디쉬 9 주사기 10 Syringe filter 진균수 분석 매뉴얼4. 분석을 위한 필요 시약 및 배지 순위 시약 및 배지명 규격 보관방법 분석에 필요한 량 1 0.85% Saline 1000g 실온 225mL 2 포테이토 덱스트로오즈 한천배지 500g 실온 120~200mL 3 10% 주석산 500g 실온 2~4mL 진균수 분석 매뉴얼진균수 분석 매뉴얼 5. 분석을 위한 시약 조제 순위 조제 시약명 조제 방법 1 10% 주석산 100mL 의 증류수 + TarTaric Acid 10g 여과 멸균 후 , 배지 100mL 당 2mL 의 10% 주석산을 넣어준다 .6 . 분석 Method( 진균수 ) 진균수 분석 매뉴얼 1. 검체 25g 을 채취하여 0.85%Saline 225g 을 넣어 10 배 단계 희석액을 만든다 . ( 액상의 경우 , 검체를 강하게 진탕하여 혼합한 것을 시험용액으로 한다 .) 2. 시험용액 1mL 씩 페트리디쉬 2 매에 분주한다 . 3. 포테이토 덱스트로오즈 한천배지를 분주한다 . 4. 25 ℃에서 5~7 일 간 배양한다 . 65. 균수 산출은 일반세균수에 따라한다 .7 . 진균수 성상 진균수 분석 매뉴얼 진균류 곰팡이류8 . 계산식 진균수 분석 매뉴얼 1 개의 평판당 15~300 개의 집락을 생성한 평판을 택하여 집락수를 계산한다 . 전 평판에 15 개 미만의 집락만을 얻었을 경우에는 가장 희석배수가 낮은 것을 측정한다 . 숫자는 높은 단위로부터 3 단계에서 반올림하여 유효숫자를 2 단계로 끊어 이하를 0 으로 한다 .9 . SOP Flow Chart 검체채취량 + 9 배 희석액 ↓ 균질화 시험용액 1mL 씩 페트리디쉬 2 매에 접종 ↓ 포테이토 덱스트로오즈 배지 분주 ↓ 25 ℃에서 5~7 일간 배양 ↓ 균수산출은 일반세균수에 따라한다 진균수 분석 매뉴얼{nameOfApplication=Show}

자연과학| 2022.05.31| 9페이지| 1,500원| 조회(226)

미생물, 실험, 대진균수, 곰팡이수

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