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Vitamin C 흑산의 DPPH radical scavening acticity

실험 실습 보고서(The experiment report)실험조교수님 확인평가Cho실험일자 : 2018. 10. 12 학번 : 1724100137 이름 : 조한나1.실험제목 (subject)-비타민C와 흑산의 DPPH radical scavening acticity2.실험원리 (principium)-DPPH법: DPPH는 그 자체가 매우 안정한 Free radical로서 517nm에서 특징적인 광흡수를 나타내는 보라색 화합물이다. 본 라디컬은 알코올 등의 유기용매에서 매우 안정하며, 특히 여러가지 항산화 기작 중 Proton-radical scavaenger에 의하여 탈색되기 때문에 항산화 활성을 육안으로 쉽게 관찰할 수 있는 장점이 있다. α-tocopherol과 같은 전형적인 천연항산화제는 본 DPHP에 의하여 매우 민감하게 활성이 관측된다. 그러나 본 측정계는 Indole, Uric acid, Flavonoid, Polyphenol 등에도 민감하여 비교적 넓은 스펙트럼을 보여 선택성이 떨어지는 단점을 가지고 있다.3.실험장치, 재료 및 기구 (Materials and Apparatus)시료 및 시약 흑산 용액, 2.2 Diphenyl-1-picrulhydrazyl, , MeOH, Vitamain C기구 및 기자재 마이크로피펫, 피펫 팁, 전자저울, 시약스푼, 시약접시, 메스플라스크, 비커, 삼각플라스크, 뷰렛, 아스피레이터, 가지달린 플라스크, 여과 필터, 소니케이션, 라텍스글러브 코니칼튜브, 렉4.실험방법 (Methods)1. [0.2mM (2.2 Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 시약조제]① 1M(1000mM)=394.32 g/L② 1mM = 0.39432 g/L③ 0.2mM = 0.39432 × 2 = 0.078864 g/L④ 위의 양은 1L 기준이며 우리는 시약 100mL을 조제할 것이므로⑤ 0.078864 = 0.0079 g/100mL2. Vitamin C 용액 제조①Vitamin C 1, 0.75, 0.6, 0.5, 0.25, 0.1(mg/ml)을 제조한다. (각 3개씩)②1mg/ml→ Vitamin C 0.1g 칭량하여 Methanol로 100ml 메스플라스크에 정용.③나머지 용액들은 1mg/ml을 희석하여 사용.④농도별로 라벨링을 꼭 해준다. (Blank는 MeOH)3. [반응 후 측정]① weighting dish에 2.2 Diphenyl-1-picrylhydrazyl시약 0.0079g을 칭량하여 mess flask(100ml)에 Methanol로 정용한다.② 제조된 시약을 시약병에 옮기고 호일로 싸서 네이밍하고 냉장보관(색이 있는 시약은 빛에 민감하므로 호일로 빛 차단)③ 희석된 시료 1ml + 시약 1ml (1:1 반응) 30분 반응. Blank는 시료대신 Methanol을 넣고 시약 1ml 반응.④ 처음 시약을 넣은 순서대로 큐벳에 1ml씩 따서 517nm에서 흡광도 측정.⑤ 모든 실험은 3번 반복 실험한다.⑥시료의 색이 영향을 끼칠 시 60uM의 DPPH 시약을 조제하여(시약:시료=0.1ml:3.9ml) 반응.5.실험 결과 및 고찰(Results & Discussion)계산식: DPPH radical scavenging activity (%) = (1 ? 시료흡광도/Blank 흡광도) × 100[결과] 흡광도(A517)1.Vitamin C(mg/ml)①②③평균(%)표준편차Control(MeOH)0.8891.0120.9290.10.0960.0640.06791.892.370.250.0650.0330.05994.362.120.50.0600.0510.06093.920.910.60.06492.800.750.0940.05791.903.491.00.0550.0530.07993.361.682.흑산(mg/ml)①결과값(%)Control(MeOH)0.889흑산 10배 희석액1.150-29.36흑산 20배 희석액0.08792.43흑산 40배 희석액0.118-35.63[고찰]이 실험으로 Vitamin C와 흑산용액의 DPPH radical scavening acticity 함량을 알 수 있었고, 결과로 Vitamin C의 항산화 활성은 0.25mg/m 용액이 가장 높은 것으로 나타났고, 흑산은 20배 희석액이 가장 높은 것으로 나타났다. 하지만 이번실험은 3반복 실험을 하였음에도 결과값이 신뢰도가 매우 떨어졌다. 표준편차도 높은 값으로 나타났고, 결과 그래프를 보아도 신뢰할 수 없는 결과라는 것을 알 수 있다.

공학/기술| 2018.12.29| 2페이지| 3,000원| 조회(259)

DPPH, 비타민C, 흑산

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청귤의 DPPH radical scavening acticity

실험 실습 보고서(The experiment report)실험조교수님 확인평가Cho실험일자 : 2018. 09. 07 학번 : 1724100137 이름 : 조한나1.실험제목 (subject)-청귤의 DPPH radical scavening acticity2.실험원리 (principium)-DPPH법: DPPH는 그 자체가 매우 안정한 Free radical로서 517nm에서 특징적인 광흡수를 나타내는 보라색 화합물이다. 본 라디컬은 알코올 등의 유기용매에서 매우 안정하며, 특히 여러가지 항산화 기작 중 Proton-radical scavaenger에 의하여 탈색되기 때문에 항산화 활성을 육안으로 쉽게 관찰할 수 있는 장점이 있다. α-tocopherol과 같은 전형적인 천연항산화제는 본 DPHP에 의하여 매우 민감하게 활성이 관측된다. 그러나 본 측정계는 Indole, Uric acid, Flavonoid, Polyphenol 등에도 민감하여 비교적 넓은 스펙트럼을 보여 선택성이 떨어지는 단점을 가지고 있다.3.실험장치, 재료 및 기구 (Materials and Apparatus)시료 및 시약 청귤 용액, 2.2 Diphenyl-1-picrulhydrazyl, , MeOH기구 및 기자재 마이크로피펫, 피펫 팁, 전자저울, 시약스푼, 시약접시, 메스플라스크, 비커, 삼각플라스크, 뷰렛, 아스피레이터, 가지달린 플라스크, 여과 필터, 소니케이션, 라텍스글러브 코니칼튜브, 렉4.실험방법 (Methods)1. [0.2mM (2.2 Diphenyl-1-picrylhydrazyl) 시약조제]① 1M(1000mM)=394.32 g/L② 1mM = 0.39432 g/L③ 0.2mM = 0.39432 × 2 = 0.078864 g/L④ 위의 양은 1L 기준이며 우리는 시약 100mL을 조제할 것이므로⑤ 0.078864 = 0.0079 g/100mL2. [반응 후 측정]① weighting dish에 시약 0.0079g을 칭량하여 mess flask(100ml)에 Methanol로 정용한다.② 제조된 시약을 시약병에 옮기고 호일로 싸서 네이밍하고 냉장보관(색이 있는 시약은 빛에 민감하므로 호일로 빛 차단)③ 희석된 시료 1ml + 시약 1ml (1:1 반응) 30분 반응. Blank는 시료대신 Methanol을 넣고 시약 1ml 반응.④ 처음 시약을 넣은 순서대로 큐벳에 1ml씩 따서 517nm에서 흡광도 측정.⑤ 모든 실험은 3번 반복 실험한다.⑥시료의 색이 영향을 끼칠 시 60uM의 DPPH 시약을 조제하여(시약:시료=0.1ml:3.9ml) 반응.5.실험 결과 및 고찰(Results & Discussion)계산식: DPPH radical scavenging activity (%) = (1 ? 시료흡광도/Blank 흡광도) × 100[결과] 흡광도(A517)Blank①②③평균(%)표준편차D.W0.9420.9690.94287.52.6630%0.1340.1120.06888.93.5450%0.0760.1020.16184.54.3570%0.0870.0920.12090.31.9495%0.0320.0680.07294.02.27[고찰]이 실험으로 청귤의 DPPH radical scavening acticity 함량을 알 수 있었고, 청귤 분말의 항산화 활성은 95% EtOH 용매가 가장 높은 것으로 나타났다. 제일 잘 추출되는 95% 의 결과값을 보았을 때 청귤분말 94% 정도의 항산화 활성이 나타나는 것을 알 수 있다. 처음에는 D.W부터 95%까지 점차적으로 항산화 활성이 높아질 것으로 예상하였지만, 두 개의 조에서 30%보다 50%가 결과값이 낮게 나와 결과값은 비례적으로 증가하지 않다는 것을 알 수 있었다.

공학/기술| 2018.12.29| 2페이지| 3,000원| 조회(295)

DPPH, DPPH radical, 청귤

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청귤의 Flavonoid 평가A+최고예요

실험실습 보고서(The experimental report)실험일자 : 2018 . 9 . 28 학번 : 1724100137 이름 : 조한나실험조/조장교수 확인평가3조/조한나1. 실험제목 (Subject)청귤의 Flavonoid2. 실험원리(Principium)플라보노이드 [Flavonoid]: 그리스어로 노란색을 의미하는 플라부스(flavus)에서 유래된 말로, 플라본(flavone)을 기본 구조로 갖는 식물색소를 일컫는다. 비타민 P(투과성 비타민) 또는 비타민 C2(비타민 C의 상승제)라고도 한다. 동물에는 비교적 적고 식물의 잎·꽃·뿌리·열매·줄기 등에 많이 들어 있다.특히 건조된 녹차잎의 경우 플라보노이드가 녹차잎 무게의 30% 정도 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 산성에서는 안전하여 색이 더욱 선명해지지만, 강한 알칼리에서는 그 구조가 변하여 짙은 노란색이나 갈색으로 변한다. 또 구리·철 등의 금속과 결합하여 흑갈색의 복합체를 형성하는데, 감자 등을 썰었을 때 칼에 닿은 자리가 청록색으로 또는 흑갈색으로 변색되는 것이 그 예이다.항균·항암·항바이러스·항알레르기 및 항염증 활성을 지니며, 독성은 거의 나타나지 않는 것으로 보고되고 있다. 또한 생체 내 산화작용을 억제한다는 사실이 알려지면서 플라보노이드계(系) 물질의 개발 및 활용에 관한 관심이 지속적으로 커지고 있다.3. 실험재료 및 기구 (Materials and Apparatus)시약 5% Sodium nitrite(NaNO2), 10% Aluminum chloride(AlC3.6H2O), 1M NaOH, D.W, Sample(청귤용액)재료 및 기구 Spectrophotometer, 마이크로피펫, 피펫 팁, 코니칼튜브, 렉, Vortex mixer4. 실험방법 (Methods)[시약조제]1. 5% Sodium nitrite(NaNO2)① 각 sample당 75ul씩 들어가므로 sample 5개, 2반복. 75×5×2= 750ul 제조한다.② 약 1ml조제 = 1ml의 5%인 0.05g을 칭량하고 나머지 99.95ul의 D.W를 넣어준다.2. 10% Aluminium chloride(AlCl3.6H2P)① 각 sample당 150ul씩 들어가므로 sample 5개, 2반복. 150×5×2=1500ul 제조한다.② 약 2ml조제 = 2ml의 5%인 0.2g을 칭량하고 나머지 1.8ml의 D.W를 넣어준다.3.1M NaOH① 각 sample당 500ul씩 들어가므로 sample 5개, 2반복. 500×5×2=5000ul 제조한다.1M = 40.00g/L② 위의 양은 1L 기준이며 우리는 시약 5mL을 조제할 것이므로40/200 = 0.2g/5mlNaOH 0.2g 칭량하여 5ml D.W를 넣어준다.[반응 및 흡광도 측정]① 시료 250ul + D.W 1ml + 5% Sodium nitrate(NaNO2) 75ul → 5분 방치② 10% Aluminium chloride(AlCl3.6H2O) 150ul → 6분 방치③ 1M NaOH 500ul → 11분 방치 후 510nm에서 흡광도 측정5. 실험결과 (Results)[Flavonoid 농도]R²=0.99981반복(mg/L)2반복(mg/L)D.W7.15.53330%7.9788.45650%10.78110.72170%14.16815.64495%16.70716.259[청귤 1g당 Flavonoid 양]계산) 7.1mg/L→7.1μg/ml7.1μg/ml / 6.67mg1064μg / 1000mg1.06mg / 1g1반복2반복평균D.W1.0640.82950.94630%1.1961.2681.23250%1.1611.6071.61170%2.1242.3452.23590%2.5042.4392.4716. 고찰 (Discussion)표준곡선의 R2값은 0.9998로 신뢰있는 곡선이 만들어졌다. 하지만 표준곡선을 그린 표준물질의 농도범위가 작아서 70% 청귤용액을 측정할 때부터 표준곡선을 벗어났다. 나중에 실험을 할 때에는 농도범위를 좀 더 여유있게 만드는 것이 좋을 것 같다. 다른 조는 mg/L를 mg/ml로 잘못 설정하여서 값이 많이 다르게 나왔다. Spectrophotometer를 다룰 때는 항상 주의해야 할 것이다. 청귤의 Flavonoid 함량을 보면 D.W에 녹인 청귤이 제일 값이 낮게 나왔고, 90% EtOH에 녹인 청귤이 제일 값이 높게 나왔다. 이것으로 EtOH의 농도가 높아질수록 플라보노이드를 제일 잘 추출할 수 있다는 것을 알 수 있었다.

공학/기술| 2018.12.29| 2페이지| 3,000원| 조회(191)

플라보노이드, flavonoid, 청귤의 Flavonoid

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청귤의 Total phenol contents

실험 실습 보고서(The experiment report)실험조교수님 확인평가Cho실험일자 : 2018. 09. 07 학번 : 1724100137 이름 : 조한나1.실험제목 (subject)-청귤의 Total Phenol Contents2.실험원리 (principium)-이 실험은 식품 중의 페놀 함량을 측정하는 방법으로 폴린시약과 10%의 Na2CO3용액을 이용하여 실험하여 750nm에서 흡광도를 측정한다.-폴린법을 O. H. 로리가 개량한 것으로서 폴린로리법(Folin-Lowry method)이라고도 한다. pH 10 부근에서 폴린시오칼토 시약(페놀 시약)을 단백질에 작용시키면 청람색(靑藍色)으로 변하는 것을 이용하여 단백질을 정량하는 것이 폴린법인데, 이것을 뷰렛반응과 조합하여 감도를 좋게 개량하였다. 단백질을 함유한 시료에 황산구리, 시트르산나트륨을 함유하는 알칼리성 용액, 폴린시오칼토 시약을 첨가하여 750nm에서 비색정량(比色定量)한다. 뷰렛 반응에 비해서 혼합된 물질의 영향이 적다.-갈산: 타닌을 알칼리 가수분해함으로써 생기는 페놀카르복시산이다. 무색, 무취의 주상 또는 긴 침상결정으로 떫은 맛을 띠며 약산성이다.3.실험장치, 재료 및 기구 (Materials and Apparatus)시료 및 시약 청귤 분말, D.W, EtOH기구 및 기자재 마이크로피펫, 피펫 팁, 전자저울, 시약스푼, 시약접시, 메스플라스크, 비커, 삼각플라스크, 뷰렛, 아스피레이터, 가지달린 플라스크, 여과 필터, 소니케이션, 라텍스글러브 코니칼튜브, 렉4.실험방법 (Methods)[청귤 희석액 제조] - D.W, EtOH(30%, 50%, 70%, 95%)① 청귤 분말 1g을 정확히 칭량한다.② 시료를 D.W 150ml에 용해한다.③ 시료를 30% EtOH 150ml에 용해한다.④ 시료를 50% EtOH 150ml에 용해한다.⑤ 시료를 70% EtOH 150ml에 용해한다.⑥ 시료를 95% EtOH 150ml에 용해한다.⑦ 용해한 sample들을 여과한 후 소니케이션 해준다.0.5mg/ml0.25mg/ml0.125mg/ml0.0625mg/ml0.3125mg/ml[Gallic acid로 표준 Sample 조제]① Stock 용액 0.5mg/ml 제조한다. gallic acid 0.005g + D.W 100ml② 2배 희석하여 0.25mg/ml 제조한다. 0.5mg/ml 5ml+ D.W 5ml③ 2배 희석하여 0.125mg/ml 제조한다. 0.25mg/ml 5ml + D.W 5ml④ 2배 희석하여 0.0625mg/ml 제조한다. 0.125mg/ml 5ml + D.W 5ml⑤ 2배 희석하여 0.3125mg/ml 제조한다. 0.0625mg/ml 5ml + D.W 5ml[Folin-Cio 시약 조제]① 시약:D.W = 1:2로 각 sample당 0.2ml 소모되므로 넉넉히 6ml 제조한 후 호일로 싸서 보관한다.② 각 농도의 시료 0.2ml + Folin-Cio 시약 0.2ml (3반복)③ 실온에서 3분동안 반응시킨다. (시약 넣는 순간부터 3분 측정)[10% Sodium Carbonate(Na2CO3) 제조]① 각 sample당 3ml 소모되므로 넉넉히 50ml 제조한다.② Folin-Cio 시약과 3분 반응한 test tube에 10% Na2CO3를 3ml씩 넣는다.③ 암실에서 1시간 반응시킨다. (넣는 순간부터 1시간 측정)[765nm에서 흡광도 값 측정]Gallic acid를 이용한 표준곡선을 이용하여 총 폴리페놀 함량 환산(mg/g)①먼저 Gallic acid로 제조한 농도별 시약과 Blank(D.W / EtOH) 로 표준곡선을 구한 후 Sample을 넣어 페놀함량 결과값을 구한다.5.실험 결과 및 고찰(Results & Discussion)[결과]1) 농도별 청귤 용액2) Blank ? D.W [R2=0.9936]Blank - D.W1)D.W0.10115.14mg/ml30%0.12118.14mg/ml50%0.13319.94mg/ml70%0.13720.54mg/ml95%0.14421.59mg/ml2)D.W0.07713.94mg/ml30%0.09311.54mg/ml50%0.11817.67mg/ml70%0.14521.74mg/ml95%0.15122.64mg/ml3)D.W0.08914.69mg/ml30%0.09813.34mg/ml50%0.11717.54mg/ml70%0.14121.14mg/ml95%0.14822.19mg/ml4)평균 및 표준편차mg/ml평균표준편차D.W14.590.6130%14.343.4150%18.381.3570%21.140.6095%22.140.535) 표준편차 그래프2) Blank ? EtOH [R2=0.9999]Blank - EtOH1)D.W0.09414.09mg/ml30%0.07611.39mg/ml50%0.1217.99mg/ml70%0.14621.89mg/ml95%0.15222.79mg/ml2)D.W0.09714.54mg/ml30%0.0913.49mg/ml50%0.11917.84mg/ml70%0.14321.44mg/ml95%0.15122.64mg/ml3)평균 및 표준편차mg/ml평균표준편차D.W14.300.3230%12.441.4850%17.920.1170%21.670.3295%22.720.114) 표준편차 그래프[고찰]이 실험으로 청귤의 폴리페놀 함량을 알 수 있었고, 청귤 분말이 95% EtOH 용매에 제일 잘 추출되는 것으로 나타났다. Gallic acid로 표준곡선을 만들었을 때에도 Blank가 증류수인 것 보다 에탄올일 때 R2값이 높아져 에탄올로 실험한 결과값이 신뢰도가 높았다. 제일 잘 추출되는 95% 의 결과값을 보았을 때 청귤분말 1g에 21~23ppm 정도의 폴리페놀이 함유되어 있는 것을 알 수 있다. 하지만 분말은 과일을 농축시켜 제조한 것으로 실제 청귤에는 결과보다 낮은 폴리페놀이 들어있을 가능성이 높다. 폴리페놀의 함량을 계산하기 위해 ppm의 단위변환을 잘 이해할 수 있게 되었고, Lowry 비색법의 또 하나의 방법을 배울 수 있었다.

공학/기술| 2018.12.29| 5페이지| 3,000원| 조회(378)

total phenol content, 청귤, 토탈 페놀, 페놀 함량 측정

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청귤의 pH 유기산함량 측정

실험 실습 보고서(The experiment report)실험조교수님 확인평가Cho실험일자 : 2018. 08. 31 학번 : 1724100137 이름 : 조한나1.실험제목 (subject)-청귤의 pH, 유기산 함량 측정2.실험원리 (principium)- 중화반응 : 산과 염기가 반응시 염과 물을 생성하는 반응을 중화반응이라 한다. 이 반응을 이용하는 적정법을 중화적정이라 하면 중화반응은 당량점 근처에서 pH의 급격한 변화가 일어나고 반응의 pH가 급격히 변하는 영역에서 예민하게 변색하는 지시약을 선택하여 적정의 종말점을 판별해야 한다.- 적정산도(Titratable Acidity) : 식품 중의 총 산량을 알칼리 표준용액을 사용하여 적정법으로 구한 값을 말한다. 식품의 신맛의 강도를 나타내는 척도로 사용된다. 일반적으로 알칼리 표준용액으로서 0.1M(0.1N)의 수산화나트륨 수용액을 사용하며 페놀프탈레인을 지시약으로 하여 중화 적정한다. 보통 적정에 소모된 수산화나트륨의 양을, 시료 중의 대표적인 산으로 환산하여 %로 나타낸다. 대부분의 청량음료, 감귤류 과즙은 구연산으로서 계산한다.3.실험장치, 재료 및 기구 (Materials and Apparatus)시료 및 시약 청귤 분말, 증류수, 0.1N NaOH, 1% 페놀프탈레인 지시약기구 및 기자재 마이크로피펫, 피펫 팁, 전자저울, 시약스푼, 시약접시, 메스플라스크, 비커, 삼각플라스크, 뷰렛, 아스피레이터, 뷰흐너 깔때기, 가지달린 플라스크, 여과 필터, 라텍스글러브, pH meter4.실험방법 (Methods)[청귤 Sample 제조]① 40배 희석과 200배 희석 샘플을 제조하기 위해 계산한다.② 40배 희석 sample: 시료 5g을 100ml 메스플라스크에 정용 → 여과③ 200배 희석 sample: 시료 1g을 100ml 메스플라스크에 정용 → 여과[유기산함량 측정]① 200배 희석sample 20ml에 1% p.p를 3방울 넣고 잘 섞어준다.② 0.1N NaOH로 종말점(핑크색)이 될 때까지 적정한다.③ 실험은 3반복 실행하여 유기산 함량의 평균값과 표준편차를 구한다.[pH 측정]① 40배 sample과 200배 sample을 pH meter로 측정한다.② 결과값이 안정되면 온도와 pH를 기록한다. (3반복)5.실험 결과 및 고찰(Results & Discussion)[결과]1.유기산 함량 측정 결과 그래프구연산 함량(%) = (V×F×0.0064×D×100)/S1)(1.10×1.000×0.0064×10×100)/1 = 7.04%2)(1.10×1.000×0.0064×10×100)/1 = 7.04%3)(1.13×1.000×0.0064×10×100)/1 = 7.23%0.1N NaOH (ml)구연산 함량(%)11.17.0421.17.0431.27.23평균1.37.10표준편차0.060.112. 유기산 평균 및 표준편차3. pH 결과값1) 40배 희석 sample: 3.57pH, 3.57pH, 3.59pH ? 평균값: 3.582) 200배 희석 sample: 3.70pH, 3.70pH, 3.65pH ? 평균값: 3.68[고찰]청귤 분말 sample의 적정을 통해 종말점의 색이 핑크색인 것을 알 수 있었다. 처음 제조한 40배 희석sample은 너무 농도가 높아 0.1N NaOH로 측정이 불가능하여 두 번째로 200배 희석sample로 측정하였다. 사용한 0.1N NaOH용액의 역가는 1.000으로 NaOH가 정량의 1.000배 용해되어 있다는 뜻이다. 청귤의 새콤한 맛은 유기산으로 사과산, 구연산의 함량은 대체로 0.5 ~ 1% 이다. 감귤류 과일이라서 계산은 구연산 함량으로 하였다. 실험의 정확성을 높이기 위해 총 3번의 실험을 하였고, 이번에 사용한 청귤분말의 구연산 함량 평균은 7.10%로 높게 측정되었다. 청귤을 농축시켜 제조한 분말이어서 구연산 함량이 높게 측정된 것으로 생각된다. 청귤에 들어있는 구연산 함량은 1.5~2%로 완숙 감귤보다 3배 가량 높다.

공학/기술| 2018.12.29| 2페이지| 3,000원| 조회(266)

pH, 유기산, 청귤, 청귤 함량

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