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미생물 보고서 배지의 제조 및 생균수 측정

배지의 제조 및 생균수 측정Ⅰ. 실험 이론 및 원리미생물을 실험하거나 배양하기 위해서는 먼저 미생물이 생육할 터전이 되는 배지를 조제해야 한다. 배지에는 미생물에 필요한 영양소와 수분이 함유되고 기타 조건(pH 등)이 적절해야 하는데, 배지는 그 모양이나 성분에 따라서 여러 가지 종류로 구별되며 배지 성분의 조성은 미생물의 종류, 성질, 실험 목적 등에 따라 많은 차이가 나타난다. 본 실험들은 고체배지(MRS Agar)를 사용 만든 액상배지의 접종할 균주(L.acidophilus)을 고체배지(MRS Agar)를 직접 배양해 보고 배양 후 일정시간 후에 콜로니(colony) 형성 여부를 확인하여 평가하고자하며, 희석수 0.85% 식염수 9ml를 시험관(test tube)에 넣고 살균하여 시료의 생균수 CFU 계산할 수 있도록 한다.Ⅱ. 재료 및 도구? 실험 1의 재료 및 도구고압증기멸균기(autoclave)무균실(cleanbench)시험관(test tube)백금이(platinum loop)패트리 접시(petri dish)저울(balcane)유산지(parchment paper)비커(beaker)삼각 플라스크(Erlenmeyer flask)알코올 분무기(70% ethanol)알코올 램프(alcohol lamp)시약스푼(spatula)? 실험 2의 재료 및 도구고체배지(MRS Agar)접종할 균주(L.acidophilus)알코올 분무기(70% ethanol)알코올 램프(alcohol lamp)? 실험 3의 재료 및 도구시료(불가리스)시험관(test tube)평판배지(plate count)피펫 (pipette)피펫 휠러(pipette Wheeler)희석수(dilution water)삼각봉(spreader)Ⅲ. 실험방법? 실험 1. 고체배지 제조① 알코올 분무기(70% ethanol)을 테이블에 뿌리고 종이타올로 닦아주고, 손에도 뿌린 뒤 흡수시켜 소독한다.② 미생물에 종류, 필요한 양 등에 따라 배지분말을 저울 등으로 달아 용기에 담고 혼합 후 증류수를 가하여 용해시킨다.③ 용기 입구를 살짝 막은 뒤 고압증기멸균기(autoclave)에 121℃, 15분 멸균 시킨다.④ 제조할 배지에 네임펜으로 배지이름, 실험날짜, 실험자명 등 정보를 기입한다.⑤ 알코올 램프(alcohol lamp)를 킨 후 스토퍼를 빼고 배지의 입구를 불 위에서 돌려가며 화염멸균을 한다.⑥ 패트리 접시(petri dish)에 배지를 절반 정도 부어준다. (약 15~20ml)? 실험 2. 획선도말① 알코올 분무기(70% ethanol)l을 테이블에 뿌리고 종이타올로 닦아주고, 손에도 뿌린 뒤 흡수시켜 소독한다.② 백금이(platinum loop)를 화염멸균한다. (또는 일회용 백금이를 사용한다.)③ 접종 배지에 있는 콜로니(Colony)를 백금이(platinum loop)로 긁어 묻힌다.④ 배양할 배지에 균을 펴 바른다는 느낌으로 균을 취한 백금이로 획선을 그어 줍니다. ∴ 획선이 겹쳐지지 않도록 하며 배지가 손상되지 않도록 겉면만 살살 긁는다.⑤ 1차 도말(streak) 을 한 후, 배지의 방향을 90℃ 회전 시켜 백금이로 1차 도말(streak) 한 끝에서 2차 streak을 실시한다.⑥ 배지의 방향을 90℃ 회전 시켜 2차 도말(streak) 한 끝에서 3차 도말(streak) 을 해준다.⑦ 배지의 뚜껑을 닫고, 배양기 안에 넣어 배양한다.⑧ 18~24시간 배양 후 결과를 확인한다.? 실험 3. 생균수 측정① 희석수 0.85% 식염수 9ml를 시험관(test tube)에 넣고 살균한다.② 살균한 희석수에 시료 1ml를 옮긴다.③ 옮긴 후 잘 섞고 다음 희석수로 이전 희석수 1ml를 다시 옮긴다.④ 희석이 완료된 이후 현탁액을 배지에 떨어뜨리고 삼각봉(spreader)으로 접종한다.⑤ 30℃에서 2일 후 시료의 생균수를 계산한다.Ⅳ. 실험결과? 실험 1. 고체배지 제조? 실험 2. 획선도말? 실험 3. 생균수 측정희석10 ^{-1}10 ^{-2}10 ^{-3}10 ^{-4}10 ^{-5}콜로니(Colony)0개28개0개120개160개-> 0.5ml를 취하여 평판배지(plate count)에 배양한 결과희석10 ^{-1}10 ^{-2}10 ^{-3}10 ^{-4}10 ^{-5}콜로니(Colony)0개0개0개96개112개-> 1.0ml를 취하여 평판배지(plate count)에 배양한 결과Ⅴ. 실험고찰? 실험 1. 고체배지 제조- 미생물이 자라는 배지인 만큼 알코올 램프(alcohol lamp)를 킨 후 스토퍼를 빼고 배지의 입구를 불 위에서 돌려가며 화염멸균을 하여 멸균 상태를 유지하는 것이 중요하다.? 실험 2. 획선도말- 적정기간동안 배양 후 확인했어야 했는데 너무 오래 배양해서 콜로니(Colony)가 너무 한곳에 뭉쳐있으며, 1차 도말(streak) 후 2차 획선구역과 제대로 연결이 안돼서 3차 도말(streak)까지 많은 수의 콜로니(Colony)가 넘어가게 된 것 같다. 또 백금이를 사용하여 배지에 시료를 획선도말 할 때는 백금이의 방향을 수직이 아닌 수평으로 해야 도말이 잘 된다.다음 실험에서 성공하기 위해서는 획선도말 후 배양할 때는 물방울이 생기지 않도록 배지를 뒤집어서 적정 온도에 배양해야 하며, 백금이의 방향과 정확한 도말방법을 숙지하고 실험에 응해야겠다.? 실험 3. 생균수 측정- 0.5ml를 취하여 평판배지(plate count)에 배양한 결과의 콜로니(Colony)10 ^{ -1}=(10 ^{-1} TIMES 0 TIMES 2)10 ^{ -2}=(10 ^{-2} TIMES 28 TIMES 2) = 0.56 TIMES10 ^{ 4}10 ^{ -3}=(10 ^{-3} TIMES 0 TIMES 2) = 010 ^{-4} =(10 ^{-4} TIMES 120 TIMES 2)=2.40 TIMES 10 ^{6}10 ^{ -5}=(10 ^{-5} TIMES 160 TIMES 2) = 3.20 TIMES10 ^{ 7}콜로니(Colony)의 평균{(10 ^{-1} TIMES 0 TIMES 2)+(10 ^{-2} TIMES 28 TIMES 2)+(10 ^{-3} TIMES 0 TIMES 2)+(10 ^{-4} TIMES 120 TIMES 2)+(10 ^{-5} TIMES 160 TIMES 2)} over {5}= {(0.56 TIMES 10 ^{4} )+(2.40 TIMES 10 ^{6} )+(3.20 TIMES 10 ^{7} )} over {5} = {6.16 TIMES 10 ^{17}} over {5}CFU/ml- 1.0ml를 취하여 평판배지(plate count)에 배양한 결과의 콜로니(Colony)

자연과학| 2022.10.01| 6페이지| 1,000원| 조회(241)

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