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  • 판매자 표지 의약품으로 이용되는 효소 억제제 및 질병 진단에 이용되는 효소 사례 보고서
    의약품으로 이용되는 효소 억제제 및 질병 진단에 이용되는 효소 사례 보고서
    의약품으로 이용되는 효소 억제제및질병 진단에 이용되는 효소 사례의생명공학과antler11목차Ⅰ. 서론Ⅱ. 본론1. 의약품으로 사용되는 효소 억제제2. 질병 진단에서 사용되는 효소 사례Ⅲ. 결론Ⅳ. 고찰Ⅴ. 참고 문헌Ⅰ. 서론우리 몸의 세포 내에는 약 4만종의 단백질이 있다. 그 중 분석 기술을 이용하여 3차원적인 구조가 밝혀진 단백질은 이제까지 500여종으로 전체 단백질의 1% 내외만 이 구조 및 기능에 있어 자세히 알려져 있을 따름이다.치료 약물의 작용 부위로 대표적인 것이 수용체와 효소로, 수용체의 경우는 해당 배위자와 결합할 때 여러 종류의 bond를 형성하므로 그 결합 형태가 복잡한 양상을 나타내는 반면 효소의 경우는 기질과 활성 부위에서 비교적 단순한 결합을 이루어 반응을 매개하곤 한다. 따라서 생리학적 혹은 병적 상태에서 중요한 생화학적 반응을 매개하는 역할을 담당하는 효소는 1970년대부터 지금까지 약물의 주요 표적이 되어 왔다.효소 반응에 관여하는 약물의 대부분은 효소 반응 저해제라고 할 수 있다. 예를 들어, 항히스타민제의 경우, 히스티딘에서 히스타민으로 변환시키는 것을 촉진하는 히스티딘탈카스복실화효소 활성화를 억제한다. 이렇듯 알레르기의 치료에도 사용하는 효소가 또, 어디에 어떻게 사용되는지 알아보겠다.Ⅱ. 본론1. 의약품으로 사용되는 효소 억제제① 전문 의약품-프레즈코빅스정 (Prezcobix Tab)한국 얀센의 에이즈치료제(인간면역결핍바이러스; HIV)로 HIV 단백분해효소 억제제(PI)인 다루나비르와 코비시스타트의 복합제제이다. 다루나비르는 프로테아제 억제제로 새로 생성된 바이러스 내에서 특정 단백질을 활성화 시키지 못하도록 하여 바이러스의 복제를 억제하고, 감염 환자의 면역 시스템을 보호하는 역할을 한다. 그리고 코비시스타트는 다루나비르의 대사를 억제하여 효과를 증가시키는 약물이다.HIV는 감염된 세포 내에서 자신의 유전 정보를 이용하여 복제되고 새로운 바이러스 입자를 형성한다. 이 과정에서 HIV 단백분해효소는 새로 생성된 바이러스 토카인 수용체는 인산화효소 활성이 결여되어 있기 때문에 JAK과 같은 티로신 인산화효소(tyrosine kinase)에 의존하여 세포 외 환경에서 핵으로 신호를 전송한다. 즉, 사이토카인이 세포면 수용체와 결합하면 수용체 관련 JAK이 활성화되어 인산화된다. 활성화된 JAK은 signal transducers and activators of transcription(STAT)를 활성화 시켜 면역 세포의 분열, 생존, 활성화와 관련된 유전자의 전사를 유발한다. 이렇게 JAK-STAT 경로는 여러 가지 사이토카인과 성장인자들의 세포 내 신호 전달 체계에 관여한다. JAK은 두 개의 인산화효소 도메인을 가진다.JAK tyrosine kinase family에는 JAK1, JAK2, JAK3, TYK2 4가지 유형이 있다. 다른 JAK 억제제는 서로 다른 목표 부위에 작용한다. JAK1과 JAK2는 염증을 유발하는 사이토카인의 신호 전달에 관여한다. 반면, JAK3는 T 세포와 natural killer(NK) cell의 신호 전달에 관여한다. 따라서 JAK1과 JAK2만 선택적으로 억제하면 JAK3의 작용은 억제되지 않으므로 정상적인 면역 체계에 대한 해로운 영향을 줄일 수 있다. JAK 억제제는 JAK의 ATP 결합 부위에 가역적, 경쟁적으로 결합하면서 STAT의 인산화를 차단하여 핵 안으로의 STAT 이동과 유전자 전사의 활성을 차단하는 작용을 한다. Baricitinib과 ruxolitinib은 JAK1/2 선택적 억제제이며, tofacitinib은 JAK1/3 선택적 억제제인 동시에 JAK2 기능적 억제제이다.-5-알파 환원 효소 억제제5-알파 환원 효소 억제제는 남성호르몬의 일종인 디히드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT)의 생성을 억제하여 전립선의 크기를 줄여준다. DHT는 5-알파 환원 효소에 의해 테스토스테론으로부터 생성되며 전립선을 성장시키는 작용을 한다. 따라서 5-알파 환원 효소를 억제하면 DHT의 생성이 감소되므로 전립선거나 focal adhesion kinase(FAK), Crk-associated substrate(CAS) 등의 단백질에 의해 활성화되며, 활성화된 Src는 분자 내 구조의 변화를 통하여 다른 신호 전달 단백질과 반응하게 된다. 따라서 BCR-ABL, SRC kinase 억제제는 세포의 성장과 생존, 혈관 신생, 세포의 이동 및 암세포 전이 등의 효과를 기대할 수 있다.치료 약제로는 다사티닙(dasatinib, 제품명: 스프라이셀, Sprycel®)이 있다.-BRAF serine-threonine kinase 억제제BRAF는 B-Raf 단백질을 만드는 인간 암 유전자인데, proto-oncogene B-Raf와 또는 murine sarcoma viral oncogene homolog라 하고 serine/threonine-protein kinase B-Raf라고도 한다. B-Raf 단백질에 돌연변이(V600E mutation)가 생기면 암이 발생한다.BRAF serine-threonine kinase 억제제는 B-Raf가 V600E 돌연변이를 일으킨 B-Raf/MEK/ERK(Extracellular Signal-Regulated Kinase) 경로에서 B-Raf/MEK 단계를 차단하는데, 특히 B-Raf 단백질 600번째 아미노산 위치가 valine이 glutamic acid로 대체된 V600E BRAF 돌연변이를 가진 흑색종(melanoma)에서만 세포 사멸을 유도한다.치료 약제로는 베무라페닙(vemurafenib, 제품명: 젤보라프, Zelboraf®)이 있다.-Tyrosine kinase와 serine/threonine kinase 억제제Tyrosine kinase (VEGFR-2; 혈관 내피 성장 인자 수용체-2, VEGFR-3, PDGFR-β; 혈소판 유래 성장 인자 수용체-베타), Flt3; 유사 Fms 티로신 키나제 3, c-KIT; 세포 키나제 IT, p38-α)와 serine/threonine kinase (Ras/Raf/MEK/ERK 경로)는 대사 하여 제거하는 역할을 하는 proteasome의 catalytic 20S core를 억제하여 proteasome의 고유 기능을 억제한다. 즉, ubiquitin/proteasome 경로를 억제하여 대사 작용이 빠른 암세포에서 NF-κB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells) 활성화가 차단되면 세포 자멸이 유도된다.치료제로는 보르테조밉(bortezomib, 제품명: 벨케이드, Velcade®)이 있다.-역전사효소 억제제HIV(human immunodeficiency virus)는 체내에 침입하여 CD4+ 림프구와 같은 표적 세포와 결합하여 융합(fusion)하는데, 이 과정에 관여하는 분자는 HIV 표면 gp120과 gp41, 그리고 표적 세포 표면의 CD4, CCR5, CXCR4 등이다. 이러한 융합 과정을 차단하는 약제로서 융합단억제제(fusion inhibitor)의 개발이 시도되고 있다. 세포 내로 침입한 바이러스는 자신의 RNA로 자신의 역전사 효소(reverse transcriptase)를 이용하여 DNA를 만든다.1) 뉴클레오시드 역전사효소 억제제 (Nucleoside Analogue Reverse Transcriptase Inhibitors; NRTIs)는 RNA가 역전사 효소로 인해 DNA가 만들어지는 과정에서 역전사 효소에 직접 결합하여 RNA로 DNA를 복제하는 과정을 차단 시켜 HIV 증식을 억제하는 약제이다.약제 종류로는 Zidovud(3’-azido-3’-deoxythymidine; AZT), Didanosine(2’, 3’-dideoxyinosine; ddI), Zalcifabine(2’, 3’-dideoxycytidine; ddC), Stavudine(2’, 3’-didehydro-3’-deoxytymi-dine; d4T), Lamivudine(2’-deoxy-3’-thiacytidine; 3TC), Abacavair(1592U89), Combivir액-뇌 장벽을 최소한으로 통과하므로 다른 H1 차단제처럼 졸음을 유발하지 않는다. fexofenadine과 같은 2세대 항히스타민제는 콜린성 및 알파-아드레날린성 수용체에 대한 친화력이 낮기 때문에 최소한의 항콜린성 효과를 나타낸다.한 연구에서 데스로라타딘 및 로라타딘과 같은 2세대 항히스타민제는 항콜린성 활성을 나타내었지만 fexofenadine은 항콜린성 활성이 없었고 H8 수용체에 대해 높은 특이성이 나타났다. 결과적으로, fexofenadine은 가장 진정이 적은 9세대 항히스타민제 중 하나로 비만 세포, 호염기성 히스타민 및 염증 세포 방출과 같은 다른 메커니즘을 억제할 수 있다고 한다. fexofenadine의 장기간 사용은 타키필락시스를 유발하지 않는다. 메타 분석 결과, 히스타민 유발 팽진에 의해 측정된 fexofenadine의 항히스타민 효과와 발적 억제율은 위약보다 유의하게 높으며 다른 2세대 항히스타민제와 다르지 않은 것으로 나타났다.2.질병진단에 이용되는 효소 사례-염산탄파프티다제 (Acid Phosphatase; ACP)ACP는 가수분해효소 중 하나로 몸 전체에서 발견되는 효소이지만 주로 전립선에서 발견된다. 모든 효소와 마찬가지로 특정 화학 반응을 유발하는 데 필요하다. 산성 포스파타제 검사는 전립선 암이 신체의 다른 부위로 전이되었는지(전이) 여부를 진단하고 치료 효과를 확인하기 위해 시행된다. 이 검사는 전립선 특이 항원 검사(PSA)로 대체되었다.남성 전립선은 다른 신체 조직보다 100배 더 많은 산성 포스파타제를 함유하고 있다. 전립선 암이 신체의 다른 부위로 퍼지면 특히 암이 뼈로 퍼지는 경우 산성 포스파타제 수치가 상승한다. 전이된 전립선 암을 가진 사람들은 산성 포스파타제 수치가 높다. 종양이 제거되거나 치료를 통해 감소한 후 수치가 떨어진다.-감마글루탐산일트란스페티다제 (Gamma-Glutamyl Transferase; GGT)감마-글루타밀 전이효소(GGT) 검사는 혈액 내 GGT의 양을 측정한다. GGT는 몸 전체에서
    의/약학| 2024.07.02| 30페이지| 10,000원| 조회(652)
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  • 판매자 표지 배지 제조 및 무균조작법
    배지 제조 및 무균조작법
    미생물학및실험 Report 2021 March 26미생물학 실험 Report의생명공학과Ⅰ. 기본정보실험 제목: 배지 제조 및 무균조작법실험 목적: 배지의 종류와 제조방법을 알고 미생물의 생육조건과 사용 목적에 따라 적합한 배지를 선택할 수 있다. 미생물 도말법을 이용하여 단일 콜로니를 순수 분리할 수 있다.실험자: antler11Ⅱ. 서론 (Introduction)1. 배지 제조1-1) 배지 (medium)배양기 · 배양액이라고도 한다. 생물은 생존 · 발육에 불가결한 물을 비롯하여 영양물질로서 다량요소 · 미량요소 등을 요구한다. 그 중 기체상으로 얻어지는 것을 제외하고는 모두 무기 또는 유기화합물로서 배지에 공급해 주어야 한다. 필요한 화합물은 독립영양 · 종속영양 등 영양 형식에 따라 여러 가지이다. 보통 영양원을 탄소원 · 질소원 · 무기염류· 발육인자(비타민류) 등으로 나누어서 생각한다. 특히 발육인자와 관련하여 생물체에서 추출한 비교적 복잡한 조성을 가진 것을 주체로 한 경우를 천연배지라고 한다. 즉, 배지란 미생물의 생장에 필요한 모든 영양분이 포함된 혼합물을 말한다.세균배양에는 육즙 · 혈청 등이, 곰팡이배양에는 맥아추출물등이 흔히 사용된다. 이에 대하여 무기염류만 또는 구조가 확실한 탄소원 ·질소원을 가한 조성이 명확한 경우를 합성배지라고 한다. 대량 배양에는 액체배지가 적당하고, 주의 보존이나 분리에는 한천 · 젤라틴등을 가한 고형배지를 사용한다. 많은 종류의 세균을 포함하는 재료로부터 목적균을 추출하기 위한 배지를 선택배지라고 한다. 배지는 완전히 멸균한 후에 목적균을 심지 않으면 잡균이 증식될 염려가 있고, 배지를 보존하기 위해서도 반드시 멸균이 필요하다. 그러므로 미생물을 배양하고 분리 동정하기 위해서는 적절한 배지의 선정과 함께 배지의 멸균과 제조가 적절히 이루어져야 한다.1-2) 배지의 종류a. 배지 성분의 성상에 따른 분류-자연배지 (natural medium)단백질의 가수분해물, 동물조직의 침출물 등 화학적 성질이 분명하지 않은 만든 최소영양배지로서 미생물의 생화학적 성상 검사, 균체 성분, 미생물의 대사 및 유전 연구에 주로 사용-반합성배지b. 물리적 성상에 따른 배지의 분류-액체배지 (liquid medium, broth)한천(agar)를 첨가하지 않은 액상의 배지로 미생물의 증식, 당분해, 생화학적 성상, 대사산물 검출 등에 사용? 배양도중에 pH 변화나 교반이 필요한 경우.? 미생물의 대량 배양, 생리 화학적 연구에 이용.Ex) Nutrient broth-고체배지 (solid medium)고형화를 위해 한천(agar)을 약 1.3%~1.5% 첨가한 배지로 집락의 형태관찰, 순수분리, 장기보관 등에 사용? 액체배지에 한천, 젤라틴 등을 첨가하여 제조한 것.? 미생물의 순수분리, 보존, 배양 등에 이용.? 종류로는 평판배지, 고층배지, 사면 배지 등이 있다.Ex) Nutrient agar* 멸균 후 냉각, 고화시킬 때 목적에 따라 사면배지, 고층배지, 평판배지 등으로 만든다.i) 평판배지(plate medium): Petri dish에 배지를 약 4 mm (15-20 mL) 두께로 굳힌 것으로 주로 호기성, 통성 혐기성 미생물 분리, 배양, 집락관찰, 용혈능 및 항생제 감수성 검사 등에 이용* colony 를 형성시켜 미생물을 순수 분리할 때 사용ii) 사면배지(slant medium): 시험관에 배지를 45°경사로 굳힌 것으로 호기성 미생물 증식 및 보존, 생화학 검사 등에 사용* 사면배지: 호기성세균의 배양 및 보존에 사용iii) 고층배지(stab medium): 시험관에 배지를 수직으로 굳힌 것으로 미호기성균과 통성 혐기성균 배양, 성상 검사, 균주보존, 세균 운동성 시험 등에 사용* 젖산균 등의 혐기성균의 배양에 사용사진1. 고체배지의 종류-반고체배지(semisolid medium)젤리 같은 형상으로 소량(0.3-0,5%)의 agar를 첨가하여 세균의 설탕 이용성이나 운동성 관찰에 사용c. 사용목적에 따라-증식배지(growth medium)여러 영양소를 적당량 함유하여 미육을 억제하도록 만든 배지.-감별배지(differential medium)미생물의 생화학적 성질을 이용하여 여러 미생물이 혼재되어 있는 곳에서 목적하는 미생물을 판별 또는 확인하기 위해서 만들어진 배지로 특정 지시약 등을 배지에 첨가하여 균을 분리.Ex) 장내 세균 분별- EMB배지1-3) 배지 제조 시 주의사항a. 배지는 종류에 따라 제조방법이 다를 수 있으므로 배지별로 보관, 제조, 멸균에 대한 특별한 주의사항 이 있는지 사전에 확인이 필요하다.b. 배지를 멸균할 때는 경질 유리제품을 사용하고, 만들고자 하는 배지 양의 2배 이상의 크기로 준비해야 한다.c. 배지의 pH는 염산(HCl), 수산화나트륨(NaOH), 탄산나트륨(Na2CO3) 등을 첨가하여 조절한다. 낮은 pH 의 agar를 만들 때는 pH를 맞추고 멸균하면 agar가 굳지 않으므로 중성 부근에서 멸균한 후 pH를 조절해야 한다.1-4) 배지의 조성a. LB 배지 (Luria-Bertani medium)1951년 Giuseppe Bertani (1923-2015)에 의해 처음 제안된 배지로 이후 대장균(Escherichia coli)을 포함한 많은 종류의 미생물의 성장에 이용되고 있는 배지-Yeast extract효모 추출물이라고 하며, 효모를 건조시킨 뒤 갈아서 만든 제품. 균이 자라는데 필요한 많은 영양소(탄소원, 아미노산, 비타민 등)를 가지고 있는 종합 영양분-Tryptone우유에서 나오는 casein의 분해에서 나온 산물을 peptone이라 하는데, 분해할 때 트립톤(tryptone)을 사용하여 나온 물질이 peptone이다. 많은 단백질을 함유하고 있으며 탄소원, 질소원으로 사용된다.-NaCl (Sodium chloride)염으로 사용되는데, 이는 배지와 균 사이의 삼투를 조절하기 위해서다. 균은 영양분이나 분자 등을 세포 내로 수송할 때 단순 확산, 촉진 확산 (능동, 수동 수송) 등을 사용하는데, 이때 염이 삼투를 조절해 주는데 중요한 역할을 한다.-Agar (한천)Agar는 흔히st 0.5% : 영양소 공급원 (효모추출물)Agar 2% : 배지를 굳힘2. 무균조작법미생물은 토양, 물 공기, 음식물, 동식물의 표피 등 자연계에 널리 분포미생물을 이용한 실험을 위해서는 혼합된 미생물을 단일 콜로니로 분리 필요순수분리(pure isolation), 순수 배양(pure culture) : 다른 종과 혼합되지 않은 단일 종의 미생물을 분리하여 배양하는 것2-1) 고체 평판 배지를 이용한 미생물의 순수 배양a. 도말 평판법 (spread plate method, spreading)- 미생물이 배양된 현탁액을 고체 평판 배지에 1~2방울 떨어트려 멸균된 삼각봉으로 펼치듯이 도말하는 방법- 획선 도말과 달리 전체적으로 균주를 도말해 주는 방법- 배양 후 자란 미생물의 콜로니 수를 정확히 세기 위해 사용하는 방법- 도말봉을 잡은 손든 수직으로만 움직이면서 균주 액을 도말하고 다른 한 손으로는 평판배지를 시계 방향 또는 반시계 방향으로 한 방향으로만 돌려주면서 도말을 해주는 것이 바람직하다.- serial dilution : 10-6배로 희석해서 사용- CFU (colony forming unit, 집락 형성 단위)눈에 보이는 colony 수를 측정하는 단위, colony 수를 1ml 당 세균 수로 계산한다.colony 수 x 희석배수 x (총량사용량) = 단위(cfu/ml)이때 관찰된 colony 수는 30~300개 사이가 적당하다.b. 획선 평판법 (streak plate method, streaking)- 미생물 시료를 멸균된 백금이로 취한 후 고체 평판 배지의 한쪽에서부터 배지 전면으로 획선을 그어 도말하는 방법- 단일 콜로니를 얻게 하기 위한 목적으로 균주를 접종하는 방법- 획선 시작 부위에는 미생물 수가 많지만, 마지막 부분에서는 적어져서 단일 콜로니가 형성되오록 하는 방법- 균주를 백금이에 너무 많이 묻혀 도말하면 단일 콜로니가 얻어지지 않고 연고를 발라 놓은 것처럼 콜로니가 얻어질 수도 있다.사진2. streaking 4분법2-2) 주ods)1. 실험재료(Materials)1-1) 배지 제조?플라스크 ?lab bottle?LB 배지에 필요한 영양성분 (Yeast, Tryptone, NaCl, agar) ?D.W?페트리 접시 ?autoclave ?pipet-aid?pipet-aid tip ?마개 ?호일1-2) 무균조작법?incubator ?e-tube ?피펫?멸균수 ?균 배양액 ?고체배지토치?백금이 ?삼각봉 ?parafilm2. 실험 방법 (Methods)2-1) 배지 제조 ? 습윤멸균법? 비커에 D.W를 100ml 넣는다.? Tryptone 1%, NaCl 1%, Yeast 0.5%를 넣는다.(LB agar (고체배지)를 만드는 경우 agar 2%를 추가한다.)? 비커를 stirrer에 올리고 magnetic bar를 넣는다.(이때 비커를 기울여 magnetic bar가 벽면을 타고 떨어지도록 한다.)? 전원을 켜고 잘 섞어준다.? 마개를 닫고, 호일로 마개를 감싼다.? 고압 멸균기(autoclave)에 증류수를 충분히 채운다.? 준비된 배지를 고압 멸균기에 넣은 후 기계를 닫는다.? 고압 멸균기의 조건을 맞춘 후 멸균을 시작한다.(온도 121℃, 1.5 기압, 시간 15분)? 멸균이 끝나고 고압 증기가 배출되어 압력이 완전히 내려가면 고압 멸균기를 열어 멸균된 배지를 꺼내서 식힌다.(LB agar의 경우, 멸균이 끝나면 배지가 식기 전에 culture dish에 하나당 25ml씩 부어준다.)2-2) 도말 평판법 - spreading? 고체 평판배지 뒷면에 날짜, 시간, 균 이름 및 정보, 실험자 이름을 쓰고, 1번으로 표시한다.? 미생물이 배양된 액체 시료를 10-6배로 희석(serial dilution)하고, pipette을 이용하여 0.1 ml 취한다.? 취한 액체 시료를 고체 평판배지에 균주한다.? 멸균된 삼각봉으로 부드럽게 밀면서 도말한다.? 도말이 끝난 배지는 incubator에 뒤집어서 보관한다.? 24h 배양 후 CFU를 측정한다.2-3) 획선 평판법 (streaking)? 취한다.
    자연과학| 2022.11.23| 9페이지| 2,500원| 조회(414)
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  • 판매자 표지 현미경 사용법 및 단순염색 (simple stain)과 그람염색 (gram stain)
    현미경 사용법 및 단순염색 (simple stain)과 그람염색 (gram stain)
    미생물학및실험 Report 2021 March 19미생물학 실험 Report의생명공학과Ⅰ. 기본정보실험 제목: 현미경 사용법 및 단순염색 (simple stain)과 그람염색 (gram stain)실험 목적: 균의 형태, 크기, 배열상태 등을 관찰할 수 있다. 그람염색을 통해 그람 양성균과 음성균을 구분하고, 염색의 원리와 방법을 습득할 수 있다.실험자: antler11Ⅱ. 서론 (Introduction)1. 현미경 (Microscope)생물체는 매우 미세한 구조로 육안으로 구별하는 것은 매우 곤란하므로 그 짜임새를 알기 위해서는 확대를 위한 보조기구를 사용해야 한다. 현재 다양한 형태의 현미경이 사용되고 있는데 광학적 원리에 따르면 광학현미경(Light Microscope), 암시야 현미경(Dark field microscope), 위상차 현미경(Phase contrast mcroscope)과 형광 현미경(Fluorescence microscope)의 4종류로 구분이 된다.현미경은 미생물을 연구할 때 사용하는 가장 기본적인 기기이다.1-1) 현미경의 구조모든 현미경은 손잡이(arm)와 바닥 몸통(base)으로 구성되어 있고, 다른 구성물들이 붙어 있는 형태이다.a. 재물대 (stage): 시료인 슬라이드 글라스를 고정하는 장치로 ‘스테이지’라고도 한다. 고정하는 장치는 핀과 톱니로 움직이는 2종류가 있다.b. 광원 (light source): 빛을 내는 장치c. 렌즈 시스템 (lens systems)-접안렌즈 (ocular lens)대물렌즈에 의하여 만들어진 상을 더욱 확대하는 작용을 한다. 현미경 대안렌즈 겸통에는 2개의 렌즈가 들어있다. 눈과 가까운 렌즈는 눈렌즈, 아래 쪽은 집광렌즈로서, 조리개를 통하여 렌즈의 수차를 제거함으로서 시야의 밝기를 결정한다. 보통 10배의 배율이다.-대물렌즈 (objective lens)경통의 최하단에 있는 대물렌즈 교환기(revolver)에 결합되어 있는 렌즈로서, 물페를 1차적으로 확대시킨다. 보통 4, 10, 20, r)재물대 밑에 붙어 있으며 광원으로부터 나온 빛을 모으고 광도를 조절하는 역할을 한다. ‘집광기’라고도 한다.d. 조리개 (diaphragm): 들어오는 빛의 양을 조절(해상력, 초점, 심도, contrast 조절) 한다.e. 여광판 (light filter): 광원에서 나오는 광선의 조성을 변형시킬 경우에 쓰이는 것으로 가장 간단한 것은 색이 들어 있는 유리판을 사용한다.f. 경각 (base): U자 또는 V자형으로 현미경 전체를 지탱하는 가장 밑 부분이다.g. 손잡이 (arm): 경각의 뒷부분에 경각에 대하여 수직으로 서있으며 현미경의 여러 부분을 지탱하는 역할을 한다.h. 경통 (body tube): 금속성 원통으로 위 끝에는 대안렌즈를, 아래 끝에는 대물렌즈를 달 수 있게 되어있다.i. 초점조절나사 (focusing knobs): 대물렌즈와 시료 간의 거리를 조절하는 나사-조동 조절 나사 : 저배율로 관찰할 때에 초점을 찾기 위하여 사용-미동 조절 나사 : 정확한 초점을 찾을 때 사용j. 대물렌즈 교환기 (revolver): 배울이 다른 렌즈를 바꿀 필요가 있을 때 대물렌즈를 손쉽게 바꾸는 장치로 경통의 하단에 달려있다.1-2) 현미경 관찰미생물에는 주로 광학현미경을 사용, 점경에는 유침대물렌즈(X100)와 접안렌즈(X10, X15)를 사용유침법 : 분해능과 배율이 커진다.2. 그람양성균과 그람음성균의 차이2-1) 그람 양성균 (Gram-positive)세균의 한 종류로서 그람 염색법에 의해 세포벽이 보라색으로 염색되는 세균을 총칭외막이 없고, 여러 층의 펩티도글리칸(peptidoglycam: 세균의 세포벽을 이루는 물질)이 세포벽을 두껍게 감싸고 있어 (세포벽의 80~90% 차지) 크리스탈 바이올렛과 같은 염기성 염료로 염색한 후 에탄올을 처리해도 탈색되지 않고 보라색으로 나타난다.a. 대표적인 그람 양성균황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 고초균(Bacillus subtilis), 충치균(Streptococcus mutans)cus faecium), 탄저균2-2) 그람 음성균 (Gram-negative)그람 염색법에 의해 세포벽이 붉은색으로 염색되는 세균을 총칭지질다당질, 지질단백질, 및 다른 복잡한 고분자물질로 구성된 외막이 있고, 세포벽은 펩티도글리칸층이 한 겹으로 매우 얇다. (세포벽의 10~20% 차지) 그래서 크리스탈 바이올렛과 같은 염기성 염료로 염색한 후 에탄올을 처리하면 탈색이 일어나고 사프라닌과 같이 붉은색의 염료로 대조염색을 하면 붉은색으로 관찰된다.a. 대표적인 그람 음성균대장균(Escherichia coli), 콜레라균 (Vibrio cholerae), 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 이질균사진1. 그람 양성균과 그람 음성균 비교3. 염색3-1) 단순염색 (simple stain)세균을 슬라이드 글라스에 도말하여 고정하고, 한 가지 염색약으로 염색한다. 염기성 염료를 사용하여 리보솜이 많은 원형질을 염색한다.3-2) 그람염색 (gram stain)1884년 덴마크의 미생물학자인 Hans Christain Gram이 고안한 특수 염색법으로, 이를 통해 그람 양성균과 그람 음성균을 분류할 수 있다. 세균의 세포벽의 구조적 차이를 이용하여 분류하는 가장 기초적이고 중요한 세균동정법a. 그람 염색의 원리-1차 염색 (crystal violet: 염기성 염료)보라색의 염기성 색소인 crystal violet으로 염색(1분간)하면 그람 양성균과 그람 음성균 모두 보라색으로 염색된다.-매염제 (iodine)1단계에서 염색된 세균에 요오드 용액을 처리(1분간)하면 crystal violet과 요오드가 반응하여 세포 내의 불용성의 복합체인 crystal violet-요오드 복합체(CV-I)를 형성한다. 그람양성균 및 그람음성균 모두 여전히 보라색 또는 보라색보다 더 진한 색으로 보인다.-탈색제 (alcohol)착색된 세균에 탈색제인 알코올 시약을 처리하면 착색된 CV-I 복합물이 용해(15초)된다. 이때 균이 탈색되어 백색으로 보인다.-대조 염색 (safranin)분홍색의 염기성 색소인 사프라닌으로 대비 염색(40초)하면 백색으로 탈색되었던 그람 음성균은 분홍색으로 염색된다. 그러나 그람 양성균은 영향을 받지 않고 그래로 보라색으로 보인다.사진2. 그람 염색Ⅲ. 실험재료 및 방법 (Materials & Methods)1. 실험재료(Materials)?세균 도말 표본?crystal violet?iodine?alcohol?safranin?현미경?immersion oil?백금이?알코올램프?D.W2. 실험 방법 (Methods)2-1) 현미경 관찰? 광원을 켜서 집광렌즈로 빛이 들어오게 한다.? 저배율의 대물렌즈를 경통과 수직이 되게 한다.? 슬라이드 글라스를 재물대에 올리고 재물대 클립으로 고정한다.? 대물렌즈와 슬라이드 글라스가 닿을 부분에 immersion oil을 한 방울 떨어트린다.? 조동나사를 돌려 대물렌즈가 슬라이드 글라스에 근접하도록 한다.? 접안렌즈에 눈을 대어 들여다보면서 집광렌즈 조리개를 조절한다.? 제물대를 움직여 물체가 대물렌즈 중앙에 오도록 한 후 조동나사를 돌려 물체의 초점을 맞춘다.사진3. 현미경2-2) 단순염색? 슬라이드 글라스를 깨끗하게 닦아 불꽃에 2~3번 통과시킨다.? 슬라이드에 멸균 증류수 한 방울을 백금이로 취하여 놓는다.? 백금이에 균을 묻혀서, 슬라이드 위의 물방울과 잘 섞어 얇게 펴준다. (도말)? 도말이 끝난 백금이를 다시 화염 멸균한다.? 도말한 슬라이드를 공기 중에서 말린다.? 슬라이드 뒷면을 불꽃에 3~4번 통과시켜 고정한다. (고정)? crystal violet을 가하고, 1~2분 염색한다. (염색)? 슬라이드를 뒤집어서 D.W로 세척한다.? 잔여 수분을 제거하고 검경한다.2-3) 그람염색? 도말, 고정한 슬라이드에 crystal violet을 가하여 1분간 염색한다.? 슬라이드를 뒤집어 염색액을 D.W로 씻어낸 후 열고정한다.? iodine을 가하여 1분간 처리한다.? iodine을 D.W로 씻어낸다.? 20초간ranin으로 45초간 대조 염색하고 씻어낸다.? 잔여 수분을 제거하고 검경한다.Ⅳ. 실험결과 및 결론 (Data and Results)비교사진균1 균2실험사진균1 균2비교사진과 실험 사진을 보면 균1은 자주색으로 균2는 분홍색으로 염색되었다.이는 균1이 그람 양성균인 Bacillus sw 29-2를 균2는 그람 음성균인 E.coli KCTC 2441인 것을 알 수가 있다.Ⅴ. 고찰 (Discssion)1. crystal violet을 떨어뜨린 후 반응 후 물로 씻는 이유crystal violet의 염색제의 색깔이 강한 보랏빛을 나타나게 된다. 수세과정 없이 진행된다면 그람음성균인 경우에는 탈색이 되더라도 주변에 남아있는 crystal violet 염색제와 대조염색(safranin)를 했을 때 그람음성균의 검체(red)가 그람양성균(violet)으로 잘못 판독될 수 있다.2. 열고정을 오래하면 왜 염색이 잘못되는 이유열처리를 오래하면 균의 세포벽이 손상되기 때문이다. 그래서 원하는 대로 염색되지 않을 수 있으며 또한 균종에 따라서 세포벽의 특징들이 따르기 때문에 그 차이도 존재한다. 열처리는 세균의 수분을 없애는 과정으로서 고정하는 단계이다. 그리고 슬라이드가 깨질 수 있으며 세균까지 타버려릴 수 있기에 정확한 구별이 어려워질 수 있다.3. 그람 염색의 한계미코박테리움(Mycobacterium)인 탄저균, 나균등은 세포벽 바깥에 일종의 매끈한 코팅막을 가지고 있다. 따라서 펩티도글리칸 층이 이 코팅 안쪽에 있어 제대로 탈색이 되지 않으며, 따라서 그람 염색이 잘 되지 않게 된다.4. 그람 염색의 반응상4-1) 그람 가변균 (Gram-variable)일부 박테리아는 그람 염색으로 염색한 후 그람 가변 패턴을 생성하며, 이 패턴은 분홍색과 보라색 세포의 혼합으로 보인다. Bacillus, Butyrivibrio 및 Clostridium의 배양에서 성장 중 펩티도글리칸 두께의 감소는 그람 음성을 염색하는 세포 수의 증가와 일치한다. 또한, 그람염색을 사용하여 염색한.
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    미생물학실험 관련 기자재
    미생물학및실험 Report 2021 March 12미생물학 실험 Report의생명공학과Ⅰ. 기본정보실험 제목: 미생물학실험 관련 기자재실험 목적: 실험에 관련된 기자재에 대한 전반적인 지식 및 사용법을 습득하고, 주의사항에 대해 알아본다.실험자: antler11Ⅱ. 서론 (Introduction)1. 현미경 (Microscope)1) 광학현미경 (Light Microscope)a. 입체 해부 현미경 (stereoscopic dissecting microscope): 광원은 반사광, 투사광 등 두 가지가 있으며, 생물을 해부할 때, 저배율로 볼 때 사용함.b. 연구용 복합 현미경 (Research compound microscope): 쌍안현미경으로서 대부분 카메라가 붙어 있어서 관찰한 결과를 사진으로 찍을 수 있고, 위상차 현미경 장치, 편광렌즈, 형광장치 등이 내장되어 있어 단추만 누르면 쉽게 다른 기능을 할 수 있음.c. 위상차 현미경 (Phase contrast mcroscope): 생물 시료를 염색하지 않고 관찰 할 수 있는 현미경 시료를 통과한 광선의 위상변화를 감지할 수 있는 장치가 있어 생체의 관찰이 가능함.d. 간섭 현미경 (Interference microscope): 물체를 통과한 광선의 속도가 늦어진다는 점을 이용한 것으로 위상차 현미경과 같은 원리나 정량적인 분석이 가능하며 두께, 건량의 농도, 수분함량을 할 수 있음.e. 암시야 현미경 (Dark field microscope): 대물렌즈에 직접 광이 들어오지 않게 하고 산란된 광에 의하여 관찰하므로 물체가 밝게 보이고 주변은 어둡게 관찰됨.f. 편광 현미경 (polarization microscope): 시료에 일정한 파장의 빛을 통과시킴으로써 시료의 미세한 부분을 확대하거나 결정 형태를 확인할 수 있는 현미경 (미생물의 형태와 종류를 판별 할 수 있음)편광기와 분석기의 두 가지 장치를 사용하며 이 장치를 통과한 광선을 이용하여 관찰함. 어떤 각도에서 한 가지 물체만 관찰하든가 혹은 어croscope): 조직을 형광색소로 전처리한 후 여기에서 발하는 형광을 감지하므로서 관찰하는 현미경임.i. 동초점 현미경 (Laser confocal microscope): 가시광선 대신에 레이저 광원을 사용하며 레이저 광선은 관찰하고자 하는 시편 내부의 일정한 지점을 점진적으로 통과하면서 초점면을 이동시키며 반사되거나 발산되는 빛을 모아서 화면으로 보내게 되고 일반적인 영상기술을 사용하여 관찰 자료를 얻게 된는 현미경임.2) 전자현미경 (Electron Microscope)a. 주사형 현미경 (SEM: Scanning Electron Microscope): 전자총에서 주사하는 전자가 조직의 표면에서 반사하는 원리를 이용한 현미경이다. 전자를 반사시키기 위해서는 조직의 표면을 도금(coating) 해야 하며 반사된 전자를 감시 장치에 모아서 관찰된다.b. 고분해능 주사전자현미경 (High Resolution Scanning Electron Microscopy): 주사전자현미경의 성능을 극대화 시킨 것으로서 투과전자현미경과 거의 같은 정도의 해상력을 갖는다.c. 투과형 전자 현미경 (TEM: Transmission Electron Microscope): 전자빔이 조직을 투과한 후 형광판에 나타난 그림자를 관찰하는 것으로 조직의 두께는 약 60-90nm 정도이어야 하며 전자빔이 투과하지 못하는 중금속으로 염색되어야 한다.3) 현미경 취급 시 주의사항a. 무리한 힘을 가하지 않는다.b. 운반할 때 한 손으로 경주를 잡고, 다른 손으로 경각을 반드시 받친다.c. 렌즈에 손을 대지 않는다.d. 조동나사는 움직이는 범위가 크므로 받침 유리와 대물렌즈가 닿지 않도록 한다. 즉, 시료에 대물렌즈를 가장 가깝게 접근 시킨 후, 대물렌즈를 함부로 분리하거나 분해하지 않는다.e. 처음에는 저배율로 관찰한 후, 점차 배율을 높여 보고자 하는 부위를 고배율로 관찰한다.f. 대안렌즈와 대물렌즈를 함부로 분리하거나 분해하지 않는다.g. 사용 후에는 대물렌즈를 최저 배율로 돌려놓고, 재1℃ / 30 min2) 주의사항a. 문을 열 때는 운전 종료 후 표시창의 압력 값이 “0”인지 확인하고 조작한다.b. 화상을 입지 않도록, 보호 장갑 착용 후 멸균기와 멸균내용물을 취급한다.c. 체임버 내벽에 멸균 포장물이 닿지 않도록 주의한다.d. 공기가 자유롭게 순화하도록 구멍이 뚫린 트레이를 사용한다.e. 소독물을 과적하지 않도록 한다.f. 소비전력이 높은 제품이므로 전용 전원 라인을 사용한다.g. 작동 중에는 절대로 배수 벨브를 열지 않는다.h. 멸균 중에는 저수탱크에 물을 보충하지 않는다.i. 멸균기가 뜨거운 상태에서 찬 증류수를 주입하지 않는다.j. 증류수 이외의 액체는 사용하지 않는다.k. 멸균기 히터는 수중히터이기 때문에 항상 증류수에 완전히 잠기게 한 후 사용한다.l. 작동 중 멸균기를 이동하거나 중격을 가하지 않는다.m. 휘발성 물질은 고압증기멸균기에 멸균하지 않도록 한다.n. 멸균할 액체는 액체의 부피보다 큰 용기를 사용하여 멸균하도록 한다.o. 멸균물품은 배기와 건조된 후 기구가 상온으로 냉각되었을 때 꺼내도록 한다.p. 젖은 팩이 발생하지 않도록 제조사의 지침에 따라 건조시간을 준수한다.3. 생물안전실험대 (Biosafety Cabinet / BSC)병원체와 같은 감염성 물질을 다루는 실험실에서 취급물질, 실험자의 안전, 환경을 보호하기 위하여 사용하는 기본적인 안전장비장비 내 유입 및 배출공기의 형태와 속도에 따라서 class 1, class 2, class 3로 분류1) 주의사항a. 클린 벤치와 생물안전실험대를 구분해서 사용한다.b. 실험대에서 고위험 물질을 사용하지 않는다.c. 알람이 작동할 경우 작업대 사용을 중지한다.d. 분젠 버너를 사용하지 않는다.e. 작업대에 물품을 보관하지 않는다.f. 외부 airflow disturbance가 없는 곳에 설치한다.g. 작업시간보다 여유있게 장비를 가동시킨다.h. Airflow 장벽을 방해하지 않도록 유의한다.i. 작업대는 매년 정기점검한다.j. 작업대 사용 후 오염을 제거한다.k. Pu해 오염이 되는 것을 막기 위한 작업공간외부 환경과 격리된 공간을 제공함으로써 공기가 HEPA 필터를 통과한 후 무균작업대 내부로 불어 넣어지며 내부에는 형광등과 UV lamp가 설치되어있음.1) 주의사항a. 시작 전 UV램프로 살균한다.b. 꼭 UV램프를 끄고 작업한다.c. 시료로부터 사용자를 보호하지 않으므로 위험한 시료 사용 시 생물안전실험대를 사용한다.d. 클린벤치에 손을 넣을 때는 70% 에틸알코올로 소독 후 넣는다.e. HEPA 필터가 장기간 사용으로 포화되면 풍속 성능을 저해할 수 있다.주기에 맞게 풍속을 점검한다.2) Clean Bench와 생물안전실험대의 차이점a. Airflow 차이Clean Bench는 실험에 따라 Horizontal 타입과 Vertical 타입으로 구분된다.생물안전실험대는 70% 재순환, 30% 외부로 배출된다.b. 보호 차이Clean Bench는 ‘샘플보호’만 제공되고, 생물안전작업대는 ‘사용자와 샘플 모두’를 보호할 수 있다.5. Incubator미생물, 세포 등을 일정한 온도, 습도 하에서 배양하기 위한 장치미생물이 성장하기에 최적화된 조건으로 배양 가능1) Shaking Incubator미생물이나 동식물세포를 접종한 액체배지를 흔들어 움직이면서 배양하는 장치액체배지를 흔들며 공기 주에서 산소의 이동이 촉진되게 만들어 줌높은 정성을 가지는 균체나 산소 요구량이 큰 균체의 배영에 주로 사용a. 주의사항shaking 하고자 하는 물질은 멸균병, tube, vial 등에 보관하여 무게중심을 맞춰 배치한다.깨지기 쉬운 용기는 솜 등으로 감싼 후 배치한다.용기 윗부분을 고무링 등으로 묶어 흔들리지 않게 고정한다.2) CO2 Incubator혐기성 균을 보관 및 배양할 수 있는 장치실험 과정에서 CO2 배양 조건 혹은 일정 pH 조건에서의 배양을 필요로 할 때 주로 사용한다.a. 주의사항과온 안전 장치를 정기적으로 점검첨가된 물은 증류수 또는 비이온화된 물을 사용, 탱크의 물은 항상 확인상자는 소독제로 정기적으로 세척하고 소독C는 장치1) 모세관 점도계2) 낙구 점도계3) 공축 이중원통형 회전점도계4) 단일 원통형 회전점도계5) 원뿔 평판형 회전점도계6) 진동식 점도계7) 주의사항a. 스핀들에 충격이 가지 않도록 주의합니다.b. coupling screw를 위쪽으로 들어준다.7. 회전 농축기 (Rotary Evaporator)시료로부터 용매를 증발시켜 제거하기 위한 장치기기 내부의 압력을 낮게 유지시켜주어야 용매의 끓는점을 낮추기 때문에 천연물에서 얻을 수 있는 예민한 물질들을 분리하는데 효율적1) 주의사항a. 폭발위험이 있는 공간에서 장치를 사용하지 않는다.b. 식료품, 사료 및 화장품 분야에서 사용되는 원료 가공을 위해 장치를 투입하지 않는다.c. 즉각적인 반응을 유도할 수 있는 물질을 제조, 가공하지 않는다.d. 폭발성이 있는 가스 혼합물로 작업하지 않는다.e. 오일 증류f. 강성의 취성 소재를 건조하여 증발기 플라스크의 손상이 유발될 수 있는 경우g. 증발기 플라스크 및 다른 유리 부품을 급속 냉각하는 경우8. 분광광도계 (Spectrophotometer)물질이 일정한 파장의 빛을 흡수하는 원리를 이용하여 시료 내의 물질의 존재 여부를 측정 장치물체의 농도에 따라 흡수하는 빛의 양이 차이가 나므로 시료 용액 중 특정 물질의 양을 정량 가능1) 주의사항a. 시료의 흡광도를 측정할 때 바탕시험 용액을 만들어야 한다.b. 바탕용액은 흡광물질을 제외하고는 시료 용액과 반드시 동일한 성분이 유지될 수 있도록 한다.c. 반드시 빛의 투과율(%T)을 보정한 후에 사용한다.9. Soxhlet휘발성 용매를 사용하여 고체 속의 비휘발성 성분을 추출할 때 사용되는 실험기구용매 플라스크 위에 추출관, 그 위에 환류 냉각기가 연결된 장치1) 주의사항a. 사용하는 용매의 독성이 주는 건강 상의 문제b. Ether의 비점과 발화점이 낮은 관계로 블록보다는 중탕법을 사용하거나 가스센서가 장착된 안전기능이 있는 기기를 검토하는 것이 좋다.10. Vortex mixer‘와류 교반기’ 라고 하며 용액을 고강도 효과적
    자연과학| 2022.11.04| 10페이지| 3,000원| 조회(187)
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    미생물학 안전수칙
    미생물학및실험 Report 2021 March 16미생물학 실험 Report의생명공학과Ⅰ. 기본정보실험 제목: 미생물학 안전수칙실험 목적: 생물 안전의 기본 개념을 수용하고 이행한다.실험자: antler11Ⅱ. 서론 (Introduction)1. 병원성 미생물 또는 관련 검체를 취급하는 검사기관 또는 연구기관의 장은 감염 위험을 최소화하기 위한 안전한 실험실 작업조건을 제공하여야 한다. 실험실 근무자는 자신과 동료 그리고 지역 사회에 미칠 수 있는 생물재해에 대해 충분한 사전 지식을 갖추고 실험에 이하여야 한다.2. 초보자가 실험을 하는 경우에는 반드시 숙련자의 감독 하에 진행된다.3. 감염성이 높은 병원체나 미지의 미생물을 다루는 경우에는 가능한 한 클린벤치 내에서 실험하도록 한다.4. 실험실에서의 안전 수칙은 취급하는 미생물 및 검체의 위험도를 고려한 밀폐 수준에 따라 차등적으로 적용되나 기본적으로 준수하여야 할 사항은 다음과 같다.1) 검사기관 또는 연구기관의 장은 모든 실험실 근무자에게 생물안전에 대한 필요한 사항을 정기적으로 교육하여야 하며, 또한 실험이 안전하게 이루어지도록 적절히 관리하여야 한다.2) 실험실 근무자는 계획된 실험을 실시하기에 앞서 필요한 안전작업 요령 및 사고 발생 시 응급조치 등에 관한 사항을 미리 숙지하여야 한다.3) 취급하는 병원성 미생물의 위험도를 고려한 밀폐수준에 따라 지정된 구역에서 해당 실험이 실시되도록 하여야 한다.4) 실험실 출입문을 잘 닫아두며 허가받지 않는 사람이 임의로 실험실에 출입하지 않도록 하여야 한다.5) 모든 실험 조작은 가능한 에어로졸 발생을 최대한 줄일 수 있는 방법으로 실시한다.6) 피펫은 반드시 기계적 피펫을 사용하도록 한다.7) 실험이 끝난 후에는 실험대를 소독하도록 하며 실험 중 오염이 발생하였을 경우에는 즉시 소독하도록 한다.8) 감염물질이나 동물과의 직접적 또는 우연한 접촉을 수반할 수 있는 절차에 적합한 장갑을 착용하고, 실험 종료 후 실험실을 나올 때에는 손을 씻는다.9) 지정된 실험구역에서 음식섭취, 음주, 흡연, 식품 보존, 화장 행위 및 콘택트렌즈의 착용을 금한다.10) 병원성 미생물을 취급하고 보존하는 장소에는 “생물재해” 표시를 붙이도록 한다.11) 병원성 미생물 실험에 관련되어 오염의 가능성이 있는 모든 폐기물은 폐기 전에 멸균되도록 하고, 기타 오염된 유리기구 등도 멸균 이후에 세척 처리하도록 한다.12) 고압멸균기 또는 소각로에서 처리되기 이전에 오염폐기물은 별도의 안전한 장소 또는 용기에 보관하여야 하며, 이러한 폐기물 등을 실험실 이외의 장소에서 멸균 처리하고자 할 때에는 견고하고 새지 않는 용기에 넣어 반출하여야 한다.13) 모든 실험실 근무자에 대한 정상 혈청을 보관하도록 하며 필요한 경우 추가로 혈청을 정기적으로 체취, 보관하도록 한다.14) 실험실에 대한 곤충, 설치류 방제 작업을 정기적으로 실시하여야 한다.15) 실험실 내에서는 작업하는 동안 실험실 일체형 작업복, 가운 또는 유니폼을 계속해서 착용하여야 한다.
    자연과학| 2022.11.04| 3페이지| 2,000원| 조회(168)
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