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식품미생물학실험 결과보고서 - 우유에서의 methylene blue 환원효소 시험법

부산대학교 식품미생물학실험1. Title : 우유에서의 methylene blue 환원효소 시험법 (Methylene blue reductase test)2. Purpose :우유 표본에 존재하는 미생물군의 신진대사능을 측정함으로써, 우유의 질을 판정해 본다. (메틸렌블루가 탈수소효소에 의해 환원 탈색하는 원리를 이용하여 우유에 메틸렌블루를 넣어 우유 내의 세균이 생산하는 탈수소효소로 색소가 환원 탈색하는 속도를 측정하여 세균오염도를 추측하는 방법)3. Materials : Test tube, 37°C water bath, pipette aid, autoclave, milk for test4. Method① 우유 시료를 잘 흔든 후, 3종류의 우유(신선한 것, 상한 것 균 넣은 것)를 5m씩 시험관 2개에 각각 넣고, 각 시험관 마다 우유의 종류를 구별할 수 있도록 표시(label)한다.(균은 E.coli 200ul 분주)② 3종류의 우유 시험관 중 열처리할 시험관 1개씩(총 3개) 끓는 물에서 5분간 열처리 한다.③ 시험관 6개에 모두 methylene blue 500ul를 넣고 잘 섞는다. (흔들어서, 잘 안 섞이면 피펫팅.)? 37°C 항온수조에 시험관 6개를 모두 넣고 항온수조 뚜껑을 덮는다.? 20분 간격으로 우유의 색이 변하는지 관찰한다. 20m/40m/1h.(시험관 전체 or 상층부 5mm까지 환원 (methylene blue 탈색)이 일어나면 반응이 끝난 것으로 간주한다.)환원(탈색) 시간우유의 품질30분 미만최저급30분~2시간저급2시간~5시간중급5시간 이상고급5. Results6. Discussion일반적으로 신선한 우유에는 환위표소가 극히 약하나 세균이 많을 경우 특히 발효미생물이 많을 경우 환원효소들을 많이 생산하여 색소 메틸텐 블루가 환원되어 색이 변한다. 이 산화환원 지시약인 메틸렌블루의 환원정도를 이용해 우유에 존재하는 미생물의 수준을 알 수 있어 우유의 품질검사에 사용할 수 있다.산화 환원 지시약은 색깔의 변화를 통해 주위 환경의 산화 환원 전위의 변화를 반영하는 유기염색 시약을 가리킨다. 미생물학 연구에서 사용되는 산화 환원 지시약의 대표적인 예가 바로 methylene blue (메틸렌 블루)이다. 메틸렌 블루는 주위 환경의 산화 환원 전위 (Eh) 가 +11mV 이상인 산화된 상태에서는 푸른색을 피고, Eh가 -10mV에 해당하는 환원상태에서는 무색을 띈다. 미생물의 활성에 의해 메틸렌 블루는 아래와 같이 환원 될 수 있다.MeB + 24+ + 2e- → MeBH2산화형 (푸른색) 환원형 (무색)우유시료를 잘 혼든 후, 3종류의 우유 (신선한, 상한, 균 넣은)를 5ml test tube에 2개씩 각각넣고, labelling한다. 균은 신선한 우유에 E.coli 200ul 분주했다.3종류 시험관 중 1개씩 (총 3개) 끓는 물에서 5분간 열처리 한다. 시험관 6개 모두 methylene blue 500ul 넣고 흔들어서 잘 섞는다. 37° 항온수조에 시험관 6개를 모두 넣고 항온수조 뚜껑을 덮는다. 20분 간격으로 우유의 색이 변하는지 관찰한다. 시험관 전체 or 상층부 5mm 까지 환원 (methylene blue 탈색) 이 일어나면 반응이 끝난 것으로 간주한다.20m, 40m, 60m 후 결과로는 탈식의 정도는 크게 푸렷한 변화를 나타내지는 않았다.시험관 중에서 열처리 안한 상한 우유는 조금 굳었고, 열처리 한 상한우유가 가장 파란색을 띠었다.48h 후 열처리안한 E.coli 시험관이 가장 탈색 정도가 컸고, 그 다음으로는 열처리 안 한 상한 우유 시험관이 탈색이 많이 되었다. 그리고 열처리 양한 신선한 우유와 열처리 한 신선한, E.coli 우유 시험관의 탈색 정도가 비슷하게 보였다. 마지막 열처리 한 상한 우유 시험관이 제일 탈색정도가 낮고 가장 파랗게 나타난 결과가 나왔다.열처리를 안 한 시험관 중 E.coli 균주를 넣은 시험관이 상한 우유 시험관 보다 더 탈색이 잘 된것으로 보아 E.coli 균주가 신화한원 효소를 상한 우유에 있는 균보다 더 많이 만들었다고 생각할 수 있다.그리고 열처리 안한 신선한 우유와 열처리 한 E.coli 우유 시험관의 탈색 정도가 비슷한테 이것으로 보아 열처리를 통해서 효소가 불활성화되고, 균도 사멸했다는 것을 알 수 있다. 마지막으로 열처리 한 상한우유 시험관이 제일 탈색장도가 낮고 가장 파랬다. 일단 열처리를 했기 때문에 균도 사멸하고 효소도 불활성화 되었다. 상한 우유는 산성이 되어 응고하게 되는데 이는 내열성 Lactococci나 lactobacilli가 증식해 유당을 유산으로 변화시키면서 우유를 산성(PH 4.5)화 시키기 때문이다. 근데 상한우유를 가열하면 단백질이 변성되어서 응고된다. 따라서 층이 생겨서 메틸렌 블루가 골고루 섞이지 못해 더 파란색을 띠었다.

자연과학| 2023.08.05| 7페이지| 2,000원| 조회(448)

우유, E.coli, 식품미생물학, 환원, 메틸렌블루, 탈수소효소, 환원효소, met..

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부산대학교 미생물학과 합격 자기소개서

부산대학교 미생물학과 자기소개서1. 고등학교 재학기간 중에 학업에 기울인 노력과 학습경험에 대해 배우고 느낀 점을 중심으로 기술해 주시기 바랍니다.(1000) ? 990자 작성2. 고등학교 재학기간 중 본인이 의미를 두고 노력했던 교내 활동을 배우고 느낀 점을 중심으로 3개 이내로 기술해 주시기 바랍니다.(1500) ? 1,488자 작성3. 학교생활 중 배려, 나눔, 협력, 갈등 관리 등을 실천한 사례를 들고, 그 과정을 통해 배우고 느낀 점을 기술해 주시기 바랍니다.(1000) ? 994자 작성4. 지원학과를 선택하게 된 지원동기, 입학 후 학업계획, 졸업 후 진로계획을 모두 기술해 주시기 바랍니다. (1500) ? 1,463자 작성1. 고등학교 재학기간 중에 학업에 기울인 노력과 학습경험에 대해 배우고 느낀 점을 중심으로 기술해 주시기 바랍니다.(1000)3학년 1차고사 때 기하와 벡터 과목 점수에 충격을 받고 그동안의 공부방법과 저 자신을 되돌아보게 되었습니다. 문제에 대해 고민해 본 결과 저의 문제점은 개념을 정확히 이해하지 않은 채 문제 풀기에만 급급했던 것임을 깨달았습니다. 이를 해결하기 위해 개념을 백지에 개념을 정리하는 백지복습을 하기로 했습니다. 이러한 생각을 하게 된 이유는 평소 과탐 영역을 백지복습 하면서 오개념을 바로잡고 개념을 확실히 이해할 수 있었기 때문입니다.백지복습을 한 뒤 문제풀이를 하면서 개념을 더 잘 적용할 수 있었고 더 나아가 개념을 적용해 여러 가지 풀이법을 고민해 볼 수 있었습니다. 예를 들어 이면각을 구할 때 정사영, 수선들이 이루는 각 등의 개념을 떠올리고 이를 이용해 다양한 풀이를 적용하여 문제를 풀었습니다.그 결과 1차고사 때 53점이었던 기하와 벡터의 점수가 2차고사 때는 91점으로 향상되었습니다. 어려운 학문이라도 노력을 통해 학문적 성취를 이룰 수 있음을 깨달았습니다. 뜻하는 바를 이루기 위해 노력하면 무엇이든 이룰 수 있다는 것을 마음속에 새기고 꿈을 이루기 위해 노력하는 자세를 가지게 되었습니다.1학년 때 영어어휘의 부족함을 느끼고 단어를 잘 기억할 방법을 생각하다가 학교 영어 선생님, 학급 친구들과 함께한 Everyday Voca Test Competition이라는 영어 단어 시험 프로그램을 통해 누적복습의 중요함을 깨닫고 이를 활용했습니다.이 프로그램을 통해 품사를 알고 발음기호를 읽는 것도 중요하다는 것을 알았고 이를 적극적으로 실천했습니다. 더 나아가 독해능력뿐만 아니라 말하기, 듣기 능력도 중요하다고 생각해서 모르는 단어는 사전을 찾아 원어민 발음을 듣고 이를 따라서 발음했습니다.이렇게 노력한 결과로 영어의 날 때 영어듣기대회와 영어어휘대회에서 참가하여 교내 상을 받았으며 이를 통해 영어에 대한 성취욕 또한 높아져서 글로벌 사회에서 다양한 경험을 가지기 위해 영어 실력을 꾸준히 향상할 것을 다짐했습니다.(990)2. 고등학교 재학기간 중 본인이 의미를 두고 노력했던 교내 활동을 배우고 느낀 점을 중심으로 3개 이내로 기술해 주시기 바랍니다.(1500)환경보호는 거창한 것이 아니라 사소한 것에서 시작된다고 생각합니다. 평소 환경보호에 대한 관심이 많았던 저는 환경봉사 동아리인 ‘다복다복’에서의 활동을 통해 환경보호를 실천 하고 싶었습니다.탄소발자국제도에 관한 영상을 통해 우리 주위 물건들의 가공, 유통 과정에서 엄청난 양의 이산화탄소가 배출된다는 것을 알게 되었습니다. 이를 통해 평소 저의 소비습관에서 불필요한 이산화탄소를 배출한 행동에 대해서 반성하고 덜 가공된 물건을 사용해야겠다는 생각을 했습니다. 이처럼 평소에 환경에 대해 쉽게 간과했던 것들을 생각해보고 녹색 생활실천 서명서에 기록하여 일상에서 실천하려고 노력했습니다.지역의 광려천과 주남저수지의 환경정화활동을 통해서 환경보호를 실천하고 또한, 환경보호 포스터를 제작해서 학교 곳곳에 게시하고 학교 축제인 내서제에 참가하여 EM 용액퀴즈, 북극곰에게 편지쓰기등의 여러 활동을 운영하면서 환경보호의 중요성을 재미있고 다양한 방법으로 학생들에게 알렸습니다.'사라지는 쓰레기, 사막을 숲으로'라는 제목으로 동아리 UCC 대회에 참가했습니다. 쓰레기 섬과 사막화에 관한 내용과 이것을 해결하려는 방법을 주제로 UCC를 제작했습니다.중국의 급격한 사막화 문제 때문에 황사의 피해가 심각하다고 생각했는데 특히 뇌 속까지 미세먼지가 침투한다는 기사를 읽고 사막화 현상의 진행을 막기 위해 이를 해결할 방법을 생각했습니다. 사막에 나무를 심어 숲을 만들었다는 내용의 책을 읽었던 것을 떠올리고 나무 심기 캠페인을 해결방안으로 선정했습니다.주제를 쓰레기 섬에 대해 정한 이유는 쓰레기에 몸이 끼인 동물의 모습을 보고 해양 쓰레기 문제의 심각함을 느꼈기 때문입니다. 이를 해결하기 위해 분해 플라스틱에 대한 내용을 알렸습니다.UCC 대회를 준비하면서 세계의 다양한 환경오염에 대해 알아보고 주변의 환경에서 세계의 환경까지 관심을 넓혔습니다. 이러한 노력과 완성도를 인정받아 UCC 대회에서 은상을 받았습니다.공을 찰 때마다 파울 되기 일쑤였을 정도로 발야구를 못했지만, 잘하고 싶다는 욕심을 가졌습니다. 그래서 1, 2학년 때의 실수를 만회하고 발야구에 꼭 성공하고 졸업하고 싶어서 3학년 체육대회 때도 다시 도전했습니다.처음에는 잘해야 한다는 부담감과 늘지 않는 실력 때문에 발야구를 선택한 것을 후회하기도 했습니다. 하지만 저 혼자만이 힘든 것이 아니며 모두가 우승을 위해 열심히 노력하고 있다는 생각을 했습니다. 또한, 처음 발야구를 선택했을 때의 다짐과 목표가 힘들어도 포기하지 않고 연습할 수 있는 동기가 되었습니다.꾸준히 연습하면서 반동을 이용해서 공을 차야 더 멀리 날아간다는 것을 깨달은 후 자신감이 생겼습니다. 결국, 결승까지 올라 마침내 우승이라는 값진 영광을 거두었습니다.모두가 함께였기 때문에 의지하면서 서로에게 힘이 됨을 느꼈고 그 속에서 협동의 가치를 몸소 느꼈습니다. 이 경험을 통해서 잘하지 못하고 자신 없는 것이라도 목표를 가지고 도전하는 용기를 가져야 함을 깨달았습니다.(1,488)3. 학교생활 중 배려, 나눔, 협력, 갈등 관리 등을 실천한 사례를 들고, 그 과정을 통해 배우고 느낀 점을 기술해 주시기 바랍니다.(1000)모두가 처음이라 낯선 학급이지만 저의 노력으로 친구들이 학급에 대한 애정을 갖도록 하는 데 도움이 되고 싶었습니다. 그래서 1, 2학년 동안 학급의 환경부에 지원해 환경부원 활동을 했습니다.1학년 때 학급 게시판을 꾸민 뒤 마음에 들지 않는다고 불만을 표하는 친구가 있었습니다. 처음에는 저희의 노력과 수고를 몰라준 것 같아서 서운함을 느끼기도 했지만, 그 친구를 통해 반 친구들의 의견을 미처 생각하지 못한 점을 깨달았습니다.학급의 의견을 반영하지 못한 점에서 많은 아쉬움을 느끼고. 이를 통해 2학년 때는 학급의 의견을 반영하려고 노력했습니다. 투표를 통해서 민주적으로 사안을 결정했으며 친구들의 의견을 귀담아듣고 적극적으로 반영한 것을 토대로 게시판을 꾸몄습니다.이러한 경험을 통해 학급이라는 공동체에서는 모두를 위한다고 생각한 것이 개개인의 의견과는 다를 수 있다는 점을 깨달았습니다. 개개인 모두의 의견을 생각하는 것이 그들을 존중하는 진정한 배려의 자세인 것이라고 느꼈습니다.학교청소에 대해 책임감을 느끼고 성실히 임했음을 자신 있게 말할 수 있습니다. 학교 시설은 저뿐만 아니라 모두가 쓰는 공간이라고 생각했습니다. 그래서 사정이 생겨서 청소시간에 하지 못했을 때는 쉬는 시간을 이용해서 청소한 적도 있을 정도로 제 방보다 더 열심히 청소했다고 생각합니다.1학년 1년 동안 화장실 청소를 했는데 초반에는 감독 선생님께서 검사하셔서 친구들이 열심히 청소했지만, 선생님께서 저희를 믿으시고 감독을 소홀히 하시면서 친구들이 하나둘씩 청소를 빠지기 시작했습니다.하지만 저는 제가 쓸 화장실이기 때문에 깨끗한 화장실로 만들고 싶어서 하지 않으려는 친구를 설득해서 함께 청소했습니다. 그러자 다른 친구들도 저희의 모습을 보고 하나둘씩 와서 함께하기 시작했습니다.화장실 청소는 힘들었지만, 화장실을 청소하면서 역지사지의 입장을 통해 청소부들의 수고에 대해 감사함을 느끼고 화장실을 깨끗하게 쓰려고 주의하는 습관을 지니게 되었습니다.(994)4. 지원학과를 선택하게 된 지원동기, 입학 후 학업계획, 졸업 후 진로계획을 모두 기술해 주시기 바랍니다. (1500)(지원 동기)

학교| 2023.08.04| 7페이지| 5,000원| 조회(229)

미생물, 자기소개서, 자소서, 대학교, 부산대학교, 합격, 미생물학과

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식품미생물학 실험 결과보고서 - 우유로부터 미생물의 분리

부산대학교 식품미생물학실험1. Title : 우유로부터 미생물의 분리2. Purpose : 여러 가지 selective medium을 이용해서 우유에 존재하는 미생물을 분리하고, 이들의 배양적, 생리적 특성을 알아본다.3. Materials : Autoclave, incubator, pipette, balance, vortex, clean bench, micropipette4. Method① 각 sample(멸균 우유, 상한 우유)을 증류수에10 ^{2},10 ^{4},10 ^{6}배 희석② 원액과 희석한 sample을 확인하고자 하는 배지에 drop해줌 (20ul씩)control(0%)로 sodium benzoate가 없는 plate에도 동일하게 drop.③ 37℃ incubator에서 24hr, 48hr 배양 후 결과 관찰NA medium 조성 (pH 6.6~7.0)Beef extract0.3 %Peptone0.5 %Agar1.5 %MacConkey agar medium 조성 (pH 6.9~7.3)Pancreatic Digest of Gelatin1.7 %Peptones0.3 %Lactose1 %Bile Salts0.15 %Sodium Chloride0.5 %Agar1.5 %Neutral Red0.003 %Crystal Violet0.0001 %MRS medium 조성 (pH 6.3~6.7)Eenzyme Digest of Animal Tissue1 %Beef Extract1 %Yeast Extract0.5 %Dextrose2 %Polysorbate 800.1 %Ammonium Citrate0.2 %Sodium Acetate0.5 %Magnesium Sulfate0.01 %Manganses Sulfate0.005 %Dipotassium Phosphate0.2 %Agar1.5 %5. Results6. Discussion이번실험인 우유로부터 미생물의 분리 실험은 여러 가지 Selective Medium을 이용해 우유에 존재하는 미생물을 분리하고, 이들의 배양적, 특정 미생물을 선택적으로 배양하기위해 그 미생물만이 이용할 수 있는 영양물질(항생제, 염료, 탄소원)을 포함하여 만든 배지로 타겟하는 미생물만 자라고 다른 미생물은 자라지 않은 배지이다.- 분별배지 (Differental medium) : 특정 미생물을 다른 종류의 미생물과 구별하기 위해 배지에 특수한 지시약을 넣어서 눈으로 미생물이 자란 것을 식별할 수 있는 배지이가. 타겟하는 균과 다른 균도 함께 자란다.실험에서 사용한 배지는 NA, MacConkey agar, 총 3가지이다.NA 배지는 영양분이 풍부해서 웬만한 균은 다 자라는 배지이다.MacConkey agar 배지는 그람음성균만 자라는 선택배지이다. 배지 안에 pH indicator가 포함되어 있어서 Lactose를 발효하여 발효산물로 젖산을 만들어내는 균이 증식하면 pH가 낮은 젖산으로 인해서 붉은 colony가 나타난다.MRS 배지는 우유 미생물 중 Lactose를 발효하는 Lactobacillus를 선택적으로 배양하는 선택배지이다.- 배지의 조성① NA medium 조성 (pH 6.6~7.0)Beef extract : 영양공급(비타민, 탄수화물, 유기질소 화합물)Peptone : 질소원Agar② MacConkey agar medium 조성 (pH 6.9~7.3)Pancreatic Digest of Gelatin : 발효에 필요한 질소워Peptones : 질소원Lactose : 발효성 탄수화물 - lactose 분해균 감별Sodium Chloride : 배지의 삼투압 유지Neutral Red : pH indicator - 산성에서 붉은색 lactose 분해 우유균 감별Crystal VioletBile Salts Gram(+) 생성 저해③ MRS medium 조성 (pH 6.3~6.7)Eenzyme Digest of Animal Tissue : 필수 영양소Beef Extract 질소원, 탄소원, vitamin 등Yeast ExtractDextrose : 탄소원Polysorbate : 계면활성제 (L따라서 MRS 배지는 Lactobacillus가 있음을 알 수 있다.Lactobacillus는 간상형 유산균으로 Lactose를 발효하여 젖산과 에탄올 또는 젖산과 초산등을 만드는 hetero(이상)형 발효를 한다.그람음성균만 자라는 선택배지인 MacConkey 배지에는 colony가 아예 나타나지 않은 것으로 보아 상한우유에 그람음성균은 없다고 여겨진다.따라서 상한 우유에 있을 것이라고 추정되는 균들은 포자 형성 그람양성 간균(Bacillus, Clostridium), 유산균(Streptococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc 등), Micrococcus, 효모, 곰팡이 등이 있다고 생각할 수 있다.- 멸균우유멸균우유(sterilized milk/ Long life milk)는 우유를 장기간 보존하기 위해 135~150℃에서 2~5초간 가열하여 일반실온에서 자랄 수 있는 모든 미생물을 완전히 사멸시키는 초고온 멸균법을 이용하여 멸균한 우유이다. 멸균우유의 특징은 살균온도가 높고 용기가 다르며 무균충전하는 점이 다르다. 멸균우유 가열방법에는 직접 증기 가열법과 관 도는 평판열 교환기를 사용하는 간접 증기 가열법이 있으며, 직접증기 가열법의 제품이 더 좋다. 이러한 가열처리에 의하여 미생물은 균체 성분, 특히 단백질 및 핵산의 변성 또는 분해, 균체의 증식과 대사에 관여하는 효소계의 실활로 사멸된다.멸균우유를 국제낙농연맹에서는 ‘UHT sterilized and aseptically filled milk’라고 표기하도록 규정하고 있으며, 우리나라 멸균우유 성분규격은 1ml 당 세균수와 대장균군이 음성으로서 보존기간은 10주이고, 제품 표기 시 ‘멸균제품’으로 구분 표시해야 한다.멸균우유는 위생적으로 완전하기 때문에 장기간 상온보관이 가능하고 장기간 냉장보관이 어려운 상황에서도 안심하고 마실 수 있다는 이점이 있어서 보존용이나 휴대용 또는 비상식량으로 적합하다. 그러나 개봉 후에는 보통우유와 같이 10℃ 이하에서 냉장물 (감염성이 없거나 또는 감염해도 발병까지에 이르지 않는 미생물)은 죽이지 못하므로 부패하기 쉬워 꼭 냉장보관해야 한다.1860년 프랑스 화학자 루이 파스퇴르가 만들어 ‘파스퇴르 법’이라 불리는 LTLT법으로 만든 우유가 파스퇴르 우유이다. 1987년 파스퇴르 브랜드가 국내 최초 저온살균우유를 선보이며 유행세를 탔다.② HTST : 고온단시간살균법은 72~82℃에서 15~20초간 가열 유지하는 방법이다. 가열과 냉각이 동시에 이루어지기 때문에 다량의 우유를 단시간 살균할 수 있다. 비병원성 미생물도 거의 사멸된다. 서울대 목장우유, 강원 청정목장 우유, 건국 헬스플러스, 동원 F&B 덴마크우유, 연세골드우유 등이 HTST법을 적용한 제품이다.③ UHT : 초고온순간살균은 130~150℃에서 1~2초간 살균한다. 대량의 우유를 단시간에 연속적으로 처리 가능해 보관성도 높다. 건국, 서울, 남양, 매일, 빙그레 등 현재 국내 기업들이 가장 많이 이용하는 방법이다.HTST법이 균의 감소를 목적으로 하고 있는데 비하여 이 방법은 무균상태 가까이 멸균을 시키는 방법이다. 특히 UHT법에 의한 가열에서는 수용성 비타민인 비타민C가 거의 파괴된다. 비타민이 고온살균과정에서 최하 9.45%부터 최고 76% 까지 파괴되는 것으로 확인됐다.멸균우유는 병원성, 비병원성을 포함한 모든 미생물을 사멸하는 방식이다. UHT법 보다 더 고온인 135~150℃에서 2~5초간 멸균 처리한다. 유해균이든 유익균이든 간에 모든 균을 싹 없애버리기 때문에 부패속도가 늦어 실온에서 보관 가능하다.병원성 미생물에 의해 오염된 우유는 다른 어떤 식품보다도 사람에게 많은 전염병을 옮긴다. 병원균, 결핵균, 브루셀라균, 탄저균, 살모넬라균, 연쇄상구균, 포도상구균, Q열의 리켓치아, 디프테리아 등이 있다. 그러나 이들 대부분은 가열에 의해 사멸되므로 열처리를 철저히 해야 한다.그러나 내열성 포자까지 불활성화 시키는 UHT 살균 우유가 아닌 경유, 이들 미생물 포자가 상미기간 동안 발아되지 않고 섭취시에고 Alcaligenes 등의 종류가 있다. 이들 내열성균들은 우유의 살균처리 과정에서 가장문제가 되는 균들이라 하겠다.Microbacterium lacticum과 Bacillus, Clostridium의 포자는 살균처리에 100% 살아남게 되고, Micrococcus의 몇 가지 종류는 열처리에 약한 종류도 있지만, Alcaligenestolerans는 약 1~10%가 살균처리에 살아남게 된다. Streptococci와 lactobacilli는 1% 미만이 63도에서 30분의 열처리에 살아남는 것으로 보고되고 있다. 원유 중에 가장 많이 발견될 수 있는 내열성군은 micrococi로 39% 정도 차지하고 있고, 다음으로 많이 발견될 수 있는 것은 Bacilus의 포자로 약 30%를 차지하고 있다. Clostridrum Spp.의 포자는 혐기성 배양 조건과 적당한 배지를 사용하였을 때만 검출될 수 있는데, Bacillus의 Spore는 여름우유보다 겨울우유에 더 많이 검출된다. 방목하면 Costridial 포자의 수가 줄어들여 ml당 1개로 떨어진다.냉저온성균 이란 5~7도에서 7~10일 후 자랄 수 있는 군으로 Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Aerobacter, Alcaligenes와 같은 그람음성 간군류가 주로 이에 해당되는데, 그들의 약 50%는 Pseudomonas spp. 가 차지하고 있고, 간균류에서도 Bacillus, Arthrobacter 와 같은 속이 이에 속한다. 이들 냉저온성군이 특히 문제가 되는 이유는, 우유의 열처리 과정에서 냉저온성군은 사멸된다고 하더라도 그들이 자라면서 만들어낸 효소들 중에는 열에 파괴되지 않는 것들이 있기 때문이다. 최근에 냉저온성균 중 내열성을 가지고 있는 Bacillus SPP. 들이 내열 . 냉저온성균 (thermoduric psy chrotropic bacteria)으로서 문제를 일으키고 있는데, 이들은 냉장고와 같은 저온에서 자라나며, 또 살균처리에 제거되지 않

자연과학| 2023.08.01| 11페이지| 2,500원| 조회(384)

우유, 멸균, 식품미생물학, 미생물분리, Na, 상한, MRS, 선택배지, 분별배지, M..

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응용미생물학실험 결과보고서 sequencing & BLAST

부산대학교 응용미생물학실험1. Title : 미생물 동정실험 - sequencing & BLAST2. purpose : 서열검색프로그램인 BLAST를 이용하여 미지의 뉴틀레오타이드 서열을 검색하 여 유사한 서열을 조회하여 찾은 후 균을 동정한다.3. Materials : BLAST, 동정하려는 균의 염기 서열4. Method① 동정하려는 균의 염기 서열을 sequencing하고 서열을 정리한다.② BLAST에 염기서열을 넣고 검색한다.③ 나온 결과에 따라서 균을 동정한다.5. ResultsⅠ sequencing 결과- 27F_bacteria_1GATGCGGCATGCTTAACATGCAGTCGAACGGCAGCACGGGTGCTTGCACCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACATGTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGATCTACGGAAGAAAGCGGGGGACCTTCGGGCCTCGCGCTATAGGGTTGGCCGATGGCTGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGTCCGGAAAGAAATCCTGAGGGCTAATATCCTTCGGGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTTGCTAAGACCGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAGGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGGAGGAATTACCGATTGGCGAAGGACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTCGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCCGTGCTTATTCTTCCGGTACCGTCATCCCCCAAAGGATATTAGCCCTCAGGAATTCTTTTCCGGACAAAAATGGTGTTTAAACCCCAAAGGCCTTCTTCCACACGCGGCATTGTTGGGAAAAGGGTTTTCCCCCTTGTCCAAAATTCCCCCCGCTGCCTCCCGCAAGAAGATTTGGGCGGGGGCTCAATCCCCCCGGGGGGTG- 27F_bacteria_2GGGCTGGGCGCATGCTTAACATGCAGTCGAACGGCAGCACGGGTGCTTGCACCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACATGTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGATCTACGGATGAAAGCGGGGGATCTTCGGACCTCGCGCTATAGGGTTGGCCGATGGCTGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGTCCGGAAAGAAATCCTGAGGGCTAATATCCTTCGGGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTTGTTAAGACCGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAAGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCCCCCTGGGCCACCGTCATCCCCGAAGGATATTAGCCCTCAGGATTTCTTTCCGGACAAAAGTGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCCACACGCGGCATTGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAAAATTCCCACTGGTGCCTCCCGTAGGAATCTGGGGCCGGGTTTCAATCCCCCGGGGGGGTGGGGCGCCCTCCCCAGACAACCTACCGGATCTCGCCCCTGGGAGGGCCTTTTCCCCACCAATAAGGTTAATAAGCCATTG- 27F_bacteria_3GTGGAGTGGCGGCAGCTAACACATGCAGTCGAACGGTAACAGGAAGCAAGCTTGCTTGCTTTGCTGACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAACTGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCATAACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCGGATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTAGGCGACGATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCCATGCCGCGTGTATGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGGAGTAAAGTTAATACCTTTGCTCATTGACGTTACCCGCAGAAGAAGCACCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTTTGTTAAGTCAGATGTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCTGATACTGGCAAGCTTGAGTCTCGTAGAGGGGGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGGTGGCGAAGGCGGCCCCCTGGACGAAGACTGACGCTCGTAACGTCAATGAGCAAAGGTATTAACTTTACTCCCTTCCTCCCCGCTGAAAGTACTTTACAACCCGAAAGGCCTTCTTCATACACCCGGCATGGGTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGGGGAAAATTCCCCCCTGGCTGCCTCCCGTAAGAAACTGGGACCGGGTTCAATTTCCCGGGGGGGGGGGGCATCCCCTCCAAACAACCTAGGGGAACTCGCCCCCGGTGAAACCGTTTCCCCCCCCACAAGATTAATCCCTCTTGGGGGCATCCCAAGGGGAGAAGGGCCCAAGGGGCGCCCCCCTT- 27F_bacteria_4GGGGCAGTGGCGGCATGCTTAACATGCAGTCGAACGGCAGCACGGGAGCAATCCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACGTGTCCTGGAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGCTCTGTGGAGGAAAGGGGGGGATCTTAGGACCTCCCGCTCAAGGGGCGGCCGATGGCAGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCTGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACAATGGGGGAAACCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAGCACTTTTGTCCGGAAAGAAAACCATCGCCCTAATATGGTGGTGGGATGACGGTACCGGAAGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTCGCTAAGACAGATGTGAAATCCCCGGGCTTAACCTGGGAACTGCATTTGTGACTGGCGGGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTAGAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACAGTCACAAATGCAGTTCCCAGGTTAAGCCCGGGGATTTCACATCTGTCTTAGCGAACCGCCTGCGCACGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGGTGCTTATTCTTCCGGTACCGTCATCCCACCACCATATTAAGGGCGATGGGTTTTCTTTCCGGAGAAAAATGGTTTTTAAACCCCAAAGGCCTTCTTCCCACACGCCGGCATTGTTGGATAAAGGGTGTCCCCCCTTGTCCAAAATTCCCCCCGGTGGCCCCCGCCAAGAAGAAGGGGGCGGGGGTCCATCCCCCCGGGGGGGGGGGGGGGCCCCTCTTAAAAⅡ BLAST 검색 결과1. - 27F_bacteria_1 검색 결과 : Burkholderia glumae strain- 1492R_bacteria_1 검색 결과 : Burkholderia glumae strainTHEREFORE 1번 균은 Burkholderia glumae이다.2. - 27F_bacteria_2 검색 결과 : Burkholderia plantarii strain- 1492R_bacteria_2 검색 결과 : Burkholderia plantarii strainTHEREFORE 2번 균은 Burkholderia plantarii이다.3 - 27F_bacteria_3 검색 결과 : Escherichia coli strain- 1492R_bacteria_3 검색 결과 : Escherichia coli strainTHEREFORE 3번 균은 Escherichia coli이다.4. - 27F_bacteria_4 검색 결과 : Paraburkholderia sp. strain- 1492R_bacteria_4 검색 결과 : Paraburkholderia sp. strainTHEREFORE 4번 균은 Paraburkholderia sp이다.6. DiscussionDNA sequencing 또는 DNA 염기서열결정

자연과학| 2022.07.06| 8페이지| 2,000원| 조회(198)

미생물, 염기서열, sequencing, blast, Burkholderia, 동..

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응용미생물학실험 결과보고서 전기영동과 PCR product purification

1. Title : 전기영동을 통한 DNA 확인 & PCR product purification2. purpose : PCR을 통해 증폭시킨 DNA를 전기영동하여 size를 확인한다. sequencing 분석을 위해 DNA의 quality 향상시키기 위한 PCR product purification 진행한다.부산대학교 응용미생물학실험3. Materials1) 전기영동④PCR product⑤buffer⑥전기영동 기계①agarose gel(1%)②DNA marker③6X loading dye2) PCR product purification④Wash Buffer⑤Elution Buffer① PCR product② FADF buffer③ heating block4. Method1) 전기영동을 통한 DNA 확인① agarose gel(1%)을 준비한다.② DNA marker를 loading한다.③ 6X loading dye 2ul를 PCR product 10ul와 섞어서 총 volume 12ul를 loading한다.④ 전기영동 running time 22min 후 결과를 확인한다.2) PCR product purification① Transfer up to 140μl of PCR product to a microcentrifuge tube and add 450ui of FADF buffer, mix well by vortexing.② Place a tube into a heating block 50CENTIGRADE , 10 min.③ Transfer the sample mixture to the spin Column.④ Centrifuge at 7,000rpm for 30s, than discard the flow-through.⑤ Add 700μl of Wash Buffer (80% ethanol added) to the FADF Column.⑥ Centrifuge at 13,000rpm for 1min, than discard the flow-through.⑦ C⑨ Add 41μl of Elution Buffer to the membrane center Column.⑩ Stand the Column for 1min at RT.⑪ Centrifuge at 13,000rpm for 1min to elute the DNA.5. Results6. Discussion‘전기영동을 통한 DNA 확인 & PCR product purification’ 실험을 진행했다. PCR을 통해서 DNA를 증폭시켜서 얻은 DNA를 전기영동에 로딩 하여 눈으로 확인할 수 있다.아가로스 겔 전기영동하는 방법은 먼저 겔을 TAE buffer에 담근다. 그 후 DNA 시료를 염색 시약과 함께 섞은 후 시료 홈에 넣는다. 이 때 이미 크기를 알고 있는 크기 표지자(size marker)또한 시료 홈에 넣는다. 그 이유는 전기영동 시에 이미 크기를 알고 있는 DNA marker를 통해서 겔 상에서 움직인 DNA의 정확한 크기를 알 수 있기 때문이다. 시료를 홈에 다 넣은 후 전기 공급 장치를 연결하여 DNA를 이동시킨다. 그 후 전원을 끄고 겔을 에티디움 브로마이드(EtBr) 용액에 담가 DNA를 형광 염색한다. 염색된 겔을 자외선 상자 위에 올려놓고 관찰한 후 사진을 찍어 결과를 기록한다. 사진을 판독하여 DNA를 분석한다. 전기영동 후에 PCR product 순도를 높이기 위해 purification 과정을 진행했다.전기영동 후 결과를 확인했을 때 DNA가 나타나지 않았다.실험실패 이유를 생각해봤을 때,① DNA를 분리하고 추출하는 실험 과정에 문제가 생겼을 수도 있다. DNA 분리, 추출 실험에서 문제가 있어서 DNA가 추출되지 않았을 수 있다.② 실험과정에서 오염으로 인해서 DNA가 분해 될 수 있기 때문에 DNA가 검출되지 않을 수 있다.③ PCR 재료를 제대로 안 넣어서 PCR이 제대로 되지 않았을 수 있다.nanodrop은 1ul의 적은 양의 흡광도를 분석하여 DNA양을 계산하여 이를 이용하여 총량41ul의 DNA 양을 대략 알 수 있는 방법이 겔 전기영동을 이용하면 DNA를 크기에 맞게 분리할 수 있다. 만약에 균의 DNA의 마커의 위치를 알면 DNA를 전기 영동했을 때 마커의 위치에 DNA가 표시되어 있는지 확인하여 같은 크기의 DNA라는 것을 알 수 있다.망상구조의 반 고형상 지지물질인 겔 형태의 아가로스를 사용한다. 아가로스를 물에 넣어 끓인 다음 굳히면 실험에 사용할 수 있는 아가로스 겔이 된다.DNA를 크기에 따라 분리하는 전기영동의 원리는 다음과 같다. DNA는 골격에 인산기(PO4-)를 가지므로 수용액에서 전기적으로 (-) 전하를 띠어 전류를 흘려주면 매질을 타고 (+) 극으로 이동하게 된다. 이때 아가로스 겔의 망상구조는 이 흐름에 저항으로 작용하기 때문에 크기가 다른 여러 DNA 분자 (+) 극으로 이동하면서 크기에 따라 분리가 일어난다. 길이가 긴 DNA분자는 길이가 짧은 DNA분자에 비해 상대적으로 크기가 크므로 이동할 때 큰 마찰력을 받게 되어 천천히 이동한다. 그에 비해 크기가 작은 DNA 분자 일수록 빨리 움직인다. 이 때 같은 길이의 분자들은 거의 동일한 속도로 움직이기 때문에 홈의 모양과 같은 형태의 밴드를 형성한다. 결과적으로 크기가 가장 큰 DNA 분자는 전기영동 comb에서 가장 가까이 위치하여 밴드를 형성하고, 크기가 가장 작은 DNA 분자는 가장 멀리 위치하여 밴드를 형성하는 것이다. 따라서 전기영동 후 크기에 따라 밴드가 형성된 것을 확인하여 DNA를 크기에 따라 분리 할 수 있는 것이다.(1) TAE buffer : 전기영동에 사용한 buffer인 TAE buffer(Tris acetate-EDTA)는 전기영동에 사용하는 완충액으로 전기영동을 하면 DNA를 이동시켜야 하는데 DNA의 운반에 필요한 이온을 공급해주는 역할을 한다. TAE buffer에는 Tris, Acetate, EDTA 라는 세 가지 성분이 들어있다.Tris는 양이온을 공급하여 (-) charge를 띠고 있는 DNA를 끌어주는 역할을 한다. 그러나 Tris는 pH가 11에 가까울 정도로 높가 있다. 첫 번째, DNase inhibition에 의한 DNA 분해를 방지한다.? DNA sample prep 과정에 포함될 수 있는 DNase는 전기영동 중에 DNA를 분해할 수 있다. DNase의 활성에는 Mg2+와 같은 2가 양이온이 필요한데, EDTA는 ethylenediamine tetraacetic acid로 4개의 (-) charge를 띤 acetate 기를 가져 Mg2+와 같은 양이온을 잡아주는 chelate로 작용하며, 결과적으로 DNase의 활성을 억제하고 전기영동 중 DNA 분해를 방지한다.두 번째로 전기영동에 필요한 DNA의 (-) charge를 유지한다. DNA는 당, 염기, 인산으로 구성되어 있는데, 그 중 인산은 당과 당을 연결하는 backbone구조를 형성하고 있고 DNA에 (-) charge을 띠게 한다. 이러한 DNA backbone의 (-) charge는 DNA 전기영동하면 agarose gel에서 (-)극에서 (+)극으로 이동하게 한다. 앞서 언급한 2가 양이온 (Mg2+, Ca2+)은 DNA의 backbone에 존재하는 phosphate의 (-) charge를 중화시킴으로써 DNA 구조를 안정화시키는 역할을 해서 전류에 따른 DNA의 이동을 저해한다. 따라서 DNA 구조에서 (-) charge를 중화시키는 2가 양이온을 EDTA로 제거해 주면 DNA는 분자량에 따라 일정하게 (-) charge를 띠게 되며, agarose gel 상에서 분자량에 따라 분리되게 된다. 이는 단백질 전기영동시 SDS를 sample buffer에 포함시켜 단백질이 균일하게 (-) charge를 띠게 하는 것과 유사한 역할을 한다.(2) 염색시약 : 보통 염색시약은 브로모페놀 블루(bromophenol blue)와 자일렌 사이아놀(xylene cyanol)을 30% 글리세롤 용액에 녹여 준비한다. DNA 시료염색액은 글리세롤이 들어있어 DNA 용액을 무겁게 하여 아가로스 겔의 홈 속으로 DNA를 가라앉히므로 안전하게 시료를 홈 속에 넣을 수 있전기영동 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다. 염색시약은 겔 상에서 DNA의 이동을 알 수 있게 해준다.(3) 겔에서 DNA 염색과 관찰 : 겔 상에서 DNA 분자는 에티디움 브로마이드(EtBr)에 의해 염색되어 관찰될 수 있는데, 이는 EtBr이 DNA의 이중나선 구조에 끼어들어 UV를 비춰주면 형광을 내기 때문이다. EtBr은 돌연변이 유발원이며 또한 암을 유발할 가능성이 있는 물질이므로 취급에 특히 주의해야 한다. 요즘은 돌연변이 유발원인 EtBr 대신 비교적 안전한 SYBR에 근거한 형광 염색물질을 많이 개발하여 사용하고 있다. SYBR 염색 물질은 핵산을 착색시키는데 사용되는 비대칭 사이아닌(cyanine) 염색약이다.(4) 겔의 농도 : DNA의 분자의 이동은 크기뿐 아니라 겔의 구멍 크기에 의해서도 결정되는데 아가로스 겔의 농도에 따라 분리 가능한 DNA의 범위가 달라진다. agar를 더 많이 첨가하여 겔의 농도가 높아질수록 겔이 형성하는 망상구조의 미세한 구멍들의 크기가 더욱 작아지게 된다. 따라서 DNA의 움직임은 더욱 느려지므로 작은 DNA 분자까지 분리할 수 있게 된다. 1.5%와 1% 아가로스겔에서는 0.1kb의 DNA까지 분리가 되어 나타나는 반면에 0.7% agarose gel에서는 1.0kb의 DNA가 제일 작은 DNA로 분리되어 나타난다. 겔의 농도가 높을수록 DNA의 움직임이 느려지므로 작은 DNA 분자를 분리하는 데 적절하게 사용될 수 있다.2) PCR product clean up 과정- 에탄올 침전법(etanol precipitation)과 wash buffer & elution bufferPCR product 순도를 높이기 위해 purification 과정에서 세척단계의 wash buffer는 감소하는 농도의 guanidinium chloride와 에탄올을 포함하고 있다. guanidinium chloride는 막에 결합 된 DNA에 영향을 주지 않고 잔류 단백질과 불순물을 제거한다. wash buffer의 에탄올의 역할서

자연과학| 2022.07.04| 6페이지| 2,500원| 조회(415)

PCR, DNA, 전기영동, 정제, purification, 응용미생물학실험

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