1. 완충 용액이란?완충제(buffers): 용액 중에 산이나 알칼리를 적은 양을 가하였을 때 일어나는 변화에 저항하는 화합물 또는 화합물의 혼합물• 완충 작용(buffer action): 변화에 대한 저항• 완충 용액(buffer solution): 일반적으로 산이나 염기를 가해도 공통이온 효과에 의해 그 용액의 수소 이온 농도( )가 크게 변하지 않는 용액• 공통 이온 효과: 이온화 평형 상태에 있는 수용액 속에 들어 있는 이온과 동일한 이온, 즉 공통 이온을 수용액에 넣어줄 때 그 이온의 농도가 감소하는 방향으로 평형이 이동하는 현상2. 완충 방정식완충 용액의 산이나 염기를 가하여 일어나는 의 변화는 완충방정식을 사용하여 계산할 수 있다.1) 약산과 그 염에 대한 완충 방정식(Henderson-Hasselbalch equation)2) 약염기와 그 염에 대한 완충 방정식• 약염기는 ① 가 온도 변화에 크게 영향을 받는 ௪ 에 의존하고②염기의 휘발성과 불안정성 때문에 완충 용액으로 만들지 않는 것이 일반적이다. 그러나 에페드린 염기와 염산 에페드린 용액과 같이 약품으로 사용하는 용액은 약염기와 그 염의 조합으로 되어있는 경우가 있다.
4. 급성 독성 시험 : LD50 실험1. introduction① strychnine② LD50③ LD50 계산법1) Behrens 법,2) Kaerber 법,3) Litchfield - wilcoxon's method ; q method for correcting the 0 and 100%2. 결과 report- Kaerber 법을 이용한 LD50 계산- Litchfield 법을 이용한 LD50 계산 (↓참고)1. Introduction① strychnine스트리크닌, 스트리크나인. 극도로 독성이 강한 알칼로이드. 주로 Strychnos nux vomica 및 Strychnos의 다른 종(種)에서 얻어지며, 신경충동(impulse)의 접합부 후부의 억제를 차단함으로써 중추신경계의 모든 부분을 흥분시킨다. 중추신경계의 흥분제로 사용되고 있으며, 이전에는 고미강장제, 순환자극제로 또는 설사제와 아울러 사용되었다. 수의과에서는 가끔 강장제 및 흥분제로 사용된다.Strychnine은 독성이 강하고, 새나 설치류 같은 작은 척추동물을 죽이기 위해 살충제로 사용되는 무색의 알칼로이드 결정이다. Strychnine은 근육 경련을 일으키고 질식이나 탈진으로 결국 사망에 이르게 한다. 마우스에게 I.P.로 Strychnine을 투여할 경우 Strychnine의 LD50는 980 μg/kg(=0.98mg/kg)이다.② LD50동물에게 약을 투여했을 때 그 50%가 사망할 것으로 추정되는 용량이며, 약물의 독성의 증가를 아는 기준이다. 약국법에서는 독소의 강도에 따라 독약, 극약, 보통약을 구별하고 있는데, 그것은 동물에 의한 LD50의 크기를 기준으로 하고 있다. 그러나 이 값은 산출의 기초가 된 실험조건에 따라 상당히 변동하는 점에서 약물을 사용하는데 있어서의 안전성을 판단하는 것이 합리적이다. 즉 안전역(R=LD50/Ed50, ED50은 50% 유효량)의 개념이다. 치료약의 우수성에 대한 하나의 조건은 이 안전역이 크다는 것인데 이 안전역은 동물에서 실험적으로 정해지는 것이고 이것을 그대로 임상상에 적용할 수는 없으며, 대략 그 기준이 되는데 지나지 않는다.③ LD50 계산법1) Behrens 법: 어떤 용량에서 살아남은 동물은 그 이하의 용량을 투여했을 때에도 살 수 있을 것이며 그 용량에서 죽은 동물은 그 이상의 동물에서도 죽을 것이라는 추정 아래 측정하는 방법이다.2) Kaerber 법LD50 = Dt - Σ(Zxd)/mDt : 동물전체를 죽일 수 있는 최소용량Z : 연속용량에 의한 사망동물 수의 평균d : 연속용량의 차이m : 각 군(group)의 동물 수3) Litchfield - wilcoxon's method ; q method for correcting the 0 and 100%① 실험결과를 토대로 effect(%)을 구한다.② dose를 통해 log dose를 구한다.③ log dose와 effect를 가지고 graph를 작성한다.④ 1에서 구한 effect(%)를 가지고 table 3.2를 참고하여 probit1을 구한다. 단, 0.100%는 제외한다.(effect를 소수첫째자리에서 반올림하여 근사치를 구함)⑤ log dose와 probit1을 이용하여 first regression line을 그린다.(graph 1)⑥ 5에서 구한 line을 통해 얻은 식을 가지고 probit2를 구한다.⑦ 6에서 구한 probit2를 가지고 table 3.2를 참고하여 expected effect1을 구한다.⑧ 하지만 expected effect1는 실험에서 얻은 결과와 차이가 크므로 Second regression line을 그려야 한다.⑨ 6에서 구한 expected effet1으로 Table 3.3을 통해 다시 observed effect를 구한다.⑩ observed effect를 가지고 Table 3.2을 통해 probit3을 구한다.⑪ probit3를 가지고 graph를 그린다.(graph 2)⑫ graph를 통해 얻은 식을 Table 3.2을 사용하여 expected effect2을 구한다.⑬ expected effect2를 다시 graph로 나타낸다.(graph 3)⑭ 12를 통해 LD50을 구한다.2. Materials & Methods- Materials: ICR 마우스(5x7=35마리), 농도별 strychnine, 관찰 cage 2개, 주사기, 장갑, 마스크, 기록지, 유성매직, 저울- Methods① 그룹별로 마우스 꼬리에 유성매직으로 번호를 썼다.② 저울에 마우스 무게를 재서 기록했다.③ Strychnine의 LD50을 투여 방법별로 알아보았다.④ Strychnine을 복강투여(I.P.)했다.⑤ 40분 동안 사망 여부를 관찰했다.⑥ 위의 2),3)의 방법으로 각각 LD50을 구하여 비교했다.3. Results1) 관찰 결과2) Kaerber 법(Dt : 동물전체를 죽일 수 있는 최소용량, Z : 연속용량에 의한 사망동물 수의 평균d : 연속용량의 차이, m : 각 군(group)의 동물 수)(1)Dose[mg/kg](2)Effect(%)(3)log dose(4)Probit from col(2) and Table3.2(5)Probit(Line)(6)Expectedeffectform col(5)and Table 3.2(7)Observedeffect(%)(Table3.3)(8)log dose(9)Probit*(Table3.2)(10)Correctedprobit-RegLin(11)Expectedeffect2 (%)0.100.00-1.001.810.000.00-1.000.000.170.000.200.00-0.703.294.001.30-0.702.672.501.000.3020.00-0.524.164.1520.0020.00-0.524.163.8713.000.4040.00-0.404.754.7741.0040.00-0.404.754.8443.000.5060.00-0.305.255.2460.0060.00-0.305.255.5972.000.60100.00-0.225.6373.0092.40-0.226.416.2088.000.70100.00-0.155.9683.0094.80-0.156.646.7296.003) Litchfield-wilcoxon’s methody=125.82x + 103.98 (R² = 0.8263)Graph 4는 corrected probit을 의미한다. 여기서 얻어진 추세선은 다음과 같다.y=50 일 때 x=logLD50을 의미하므로 다음과 같이 대입할 수 있다.x= (50-125.82)/103,98 = -0.43 = logLD50∴ LD50 = 0.37LD50Kaerber0.33Litchfield-wilcoxon’s method0.37평균0.354) 정리4. Discussion이번 실험에서는 1종의 설치류 중 마우스를 사용하였으며 I.P. 한가지 방법으로만 두 dosage에 대해 투여했다. 약물 투여에 따른 치사를 관찰한 후 치사량을 결정하는데에도 여러가지 방법이 존재하며 본 실험에서는 (1) Behrens법, (2) Kaerber법, (3) Litchfield-wilcoxon's법 중에서 Kaerber법, Litchfield-wilcoxon’s method를 이용하여 LD50 값을 도출했다. 두 방법으로 측정한 LD50값은 각각 0.33과 0.37으로 서로 유사한 것으로 보아 두 방법의 보정이 잘 된 것을 확인할 수 있었고, 실험 결과만 보았을 때 strychnine의 LD50은 평균값인 0.35로 추정할 수 있다. 하지만 인터넷으로 검색해본 결과 실제 strychnine의 LD50은 0.98mg/kg이다. 이렇게 값이 실제 값의 3분의 1가량으로 감소한 이유는 크게 두 가지로 추측해볼 수 있다. 첫 번째 이유는 시약의 변성이다. 이번에 사용한 strychnine은 언제 제조되었는지 알 수 없고, 구입한지 아주 오래되었다는 사실로 미루어 볼 때 시간에 따른 변성으로 독성이 더 커진 것으로 판단된다. 둘째, 마우스의 개채차로 인한 것이다. 마우스에 따라 스트리크닌에 대한 감수성에 차이가 있다. 실험에 사용한 마우스들이 이러한 경우였다면 적은 양의 스트리킨으로도 큰 독성을 나타냈을 수 있다. 또한, 마우스들은 매주 수행된 실험으로 인해 건강이 상했을 수 있다. 컨디션에 따라 실험 결과가 달라질 수도 있으나, 마우스 결과가 농도에 따른 차이가 있는 만큼 첫 번째 이유가 더 타당하다고 생각된다.
3. 중추 신경 흥분약 및 항경련 약물 실험1. 뇌전증과 발작2. diazepam3. Pentylenetetrazole(PTZ)4. 흥분과 경련에 대한 평가5. 간대성 경련과 강직성 경련6. saline, unknown A, diazepam 투여에 대한 경련 확률 및 t-단측검정 결과 포함 (↓참고)1. Introduction(1) epilepsy와 seizure- epilepsy(뇌전증): 뇌전증 발작을 유발할 수 있는 원인 인자가 없음에도 불구하고 unconsciousness, convulsion, automic hyperactivity 중 하나 이상의 증상을 나타내는 경우이며 경련, 간질 등과 같은 뇌의 신경질환이다.- seizure(발작): 비정상적으로 과도한 신경 자극으로 인해 발작을 일으키는 경우이다. 예를 들어 열성경련은 seizure에 속하지만 이것이 반복된다면 epilepsy로 판단한다.(2) diazepam① 특징benzodiazepine계 약물로 효과적인 항불안제(anxiolytic agent)이다. 간질(seizure), 경련중적상태(status epilepticus), 급성 알코올 금단증세, 근경련 등에 사용되며 경련중적상태에서 diazepam이 1차 선택약으로 사용된다.② 작용기전benzodiazepine계의 진정작용은 중추신경계에서 억제성 신경전달을 하는 GABA와 관계가 있다. diazepam은 GABA 시냅스에서 GABA 수용체에 강한 친화력을 나타내어 diazepam을 투여 시 중추신경계 내 GABA의 양이 많을 때와 같은 효과가 나타난다. 즉 GABA 수용체의 양성 알로스테릭 조절효과를 나타낸다. 이처럼 GABA를 통한 시냅스 억제 효능이 증진되면 진정, 수면, 마취, 항경련효과 등을 나타낸다. 특히 diazepam의 항경련 작용은 변연계(limbic system)와 mesencephalic reticular formation에서 GABA의 활성이 증가되면 나타난다.③ 약동학적 특징Bioavailability는 경구서방제제의 경우 98%, IV제제(100%)와 비교시 주사용 유액(emulsion)의 경우 93%이다. 경구 투여시 0.89~1.32시간 후에 최고혈중농도를 나타내고 서방형일 경우 3.8시간, IM은 1시간, IV 또는 주사용 유액은 8분 후 최고혈중농도에 다다른다. 진정작용을 목적으로 투여한 경구용 diazepam의 onset time은 약 30분이고 경련중적상태의 치료를 위해 투여한 IV제제는 15~30분 동안 효과가 지속된다.(3) Pentylenetetrazole(PTZ)PTZ는 경련 유발 모델에 사용하는 대표적인 중추신경계 흥분성 약제로서 GABAA 수용체에 대한 chloride ionophore의 차단역할을 하는 것으로 알려져 있다. 화학적으로 PTZ에 의해 유도된 발화(kindling)가 가장 일반적으로 유도된 모델이다.(4) 흥분과 경련에 대한 평가① 일반 운동 활성② EEG(Electroencephalogram, 뇌전도)를 통한 뇌파 검사③ 실험싷에서 경련유도 실험 방법 : 전기 유도, 화학적 유도④ 경련 행동의 발생 유무 또는 경련 점수- 전기적 방법으로 경련을 유도한 경우 아래와 같이 점수를 매겨 평가- 화학적 방법으로 경련을 유도한 경우 경련에 의해 배가 보이는 것을 기준으로 경련 유무를 판단⑤ 경련유발 역치(5) 간대성 경련과 강직성 경련- 간대성 경련: 수의근의 수축과 이완이 급속하고 불수의적으로 반복되는 발작성 경련이다. 발작 시 연속적으로 손발을 펄떡이는 굴신운동을 나타낸다. 강직성 경련에 이어 발생하는 경우가 많다.- 강직성 경련: 장기간에 걸쳐 지속되는 심한 경련으로 전신의 근육이 뻣뻣해지고 손발을 뻗친 채로 굳어진다. 전신적인 것으로는 간질, 파상풍 등에서 나타나며 국소적인 것으로는 후궁반장, 비복근경련 등에서 나타난다.2. Materials & Methods- Materials: ICR 마우스 (5-6/그룹), saline, unknown A, diazepam (DZP, 2mg/kg), pentylenetetrazole (PTZ, 70mg/kg), 장갑, 마스크, 저울, cage, 주사기- Methods① 마우스를 보정한 뒤 꼬리에 그룹별로 번호를 썼다.② 마우스 무게를 쟀다.③ 각 그룹별로 saline, UnknownA, Diazepam 2mg/kg을 1분 간격으로 복강 내 투여했다.④ 30분 후에 PTZ를 (70mg/kg) 복강 내 투여하고 바로 15분간 관찰했다.⑤ PTZ 투여 후 15분 내에 경련 증상을 보이는 마우스를 관찰했다.3. Results4. Discussion이번 실험은 항경련 효과가 있는 약물에 관한 실험이었다. 마우스에게 saline, Unknown A, DZP를 투여했으며 이 때 saline은 음성대조군, DZP는 양성군으로 사용되었다. PTZ(pentylenetetrazole)를 투여했을 때경련의 정도는 ERS에 따른 특징으로 SCORE를 구분 할 수 있으나 이번 실험에서는 전신 근육의 떨림과 함께 mouse가 뒤집어져 dosal side를 보이는 증상을 보이는지에 대한 유무만 판단하였다. 중추신경 흥분제로 쓰인 PTZ를 처리하기 전 사용한 진정제 diazepam은 단순 진정 효과를 보는 것이 아닌 각성 이상의 경련 상태의 작용을 저해해야하므로 2mg/kg의 고용량을 처리하였다.실험 결과, 경련 확률은 DZP
「Writhing test를 통한 진통 약물의 효과에 대한 소논문」목차1. introduction(1) 마우스 보정 ..... 2(2) 경구투여............... 2(3) writhing test....... 2(4) 통증의 정의 및 분류........ 2(5) 진통제의 분류 및 작용 기전......... 2(6) 진통효과 시험법 32. Materials and Methods(1) 실험 동물 ..... 64. Discussion(1) 음성대조군 ...... 7(2) onset time과 frequency의 의미 .............. 7(3) 결과값 해석 .... 7(4) 오차의 원인 및 고찰 ... 75. Reference .............. 8← 결과값 미리보기1. Introduction(1) 마우스 보정마우스를 테이블이나 다른 장소에 두고 목과 어깨 부위의 피부를 왼손의(오른손잡이 기준) 엄지와 다른 손가락을 이용하여 잡는다. 이때 쥐에게 물리지 않도록 엄지와 검지를 7자 모양으로 구부려 잡는다는 점에 유의한다.(2) 경구투여마우스를 움직이지 않도록 단단히 잡은 후, 엄지와 검지로 잡은 동물의 목덜미를 약간 뒤로 당겨 입과 식도가 직선에 가깝도록 유지한 다음 경구용 주사기를 동물의 입천장 쪽 후두부로 천천히 밀어 넣는다. 이 때 주사기가 부드럽게 들어가지 않고 손가락에 압력이나 이물감이 느껴질andin, histamine → A delta ?ber → 척수후근 → 측척수시상트랙- 긴장성 동통 : 둔통과 박동성 - C-?ber → dorsal horn → spinoreticular tract, paleopinothalamic tract(5) 진통제의 분류 및 작용기전① Opioids- 심한 통증에 사용하는 진통제이다. 가능하면 한가지 종류의 마약성 진통제를 사용하고, 부작용이 있거나 효과가 없는 경우 다른 종류의 진통제로 바꾸어 사용해야 한다.ⅰ. 종류와 예시- 강한 마약성 진통제 : morphine, oxycodone, hydromorphone, hydrocodone, fentanyl- 약한 마약성 진통제 : codeine, dihydrocodeine, tramadolⅱ. 작용 기전- adenylate cyclase 억제- 뇌조직의 Ca2+ 고갈- CNS 내 acetylcholine, norepinephrine, aubstance P 등의 유리 억압ⅲ. 유해작용- 부작용 : 강력한 호흡억제, 신경 독성, pinpoint pupils, 오심구토, 뇌압상승, 체위성 저혈압, 변비, 뇨저류 등- 내성과 의존성 존재 : 신체적 의존증상, 금단증상, 행복감과 자기강화 효과ⅳ. 다른 약물과의 상호작용- morphine, hydromorphone : 간에서 1상 대사반응을 거치지 않아 약물 상호작용이 적다- 이외의 opioids : 간기능 저하 환자에게 주의 및 약물 상호작용 주의opioid 부작용 증가시키는 약물azole계 약물(항진균제), macrolide(항생제), omeprazole(위장약), antiviral agent(항바이러스제), tyrosine kinase inhibitor(티로신인산화효소 저해제), grapefruit juice(자몽주스)opioid 효과를 감소시키는 약물corticosteroid(스테로이드제), carbamazepine(향경련제), phenytoin(항경련제)codeine, oxycodone, hydrocodone의 효과를 는 COX의 활성을 억제한다.- COX1, COX2 억제 : ibuprofen, naproxen, aspirin 등 다수의 NSAIDs- COX2 억제 : acetaminophen(기전 명확하지 않음), celecoxibⅲ. 유해작용- 부작용 : 위장관 손상(위점막 손상, 속쓰림, 소화불량, 위출혈, 위궤양), 신독성(신사구체 여과 감소, 부종), 간독성(담즙정체황달 등), 심혈관계 부작용(혈전, 색전)ⅳ. 다른 약물과의 상호작용- 혈장단백질과 결합성이 높아 히단토인계 항전간제, 쿠마린계 항응고제, 설파제, 설포닐 유리아계 혈당강하제와 병용시 약제 작용을 증감할 우려가 있어 유의해야 한다.- 항우울제(특히 SSRI)와 병용시 출혈 합병증 유발(뇌출혈, 위장관 출혈 등)- ACE inhibitor의 작용은 NSAIDs에 의해 억제될 수 있다.- 항응고제와 NSAIDs를 병용시 출혈 위험이 증가되고 신기능이 감소된다.(6) 진통효과 시험법① 역치측정법 : Randall-Seiitto법(paw pressure test)② 열자극법 : Hot plate test, tail ?ick test③ 전기자극법 : 항문점막, 발바닥 전기자극④ 화학적 자극법 : Withing test*주사기를 통해 P.O.(Per Oral)로 투입한다.2. Materials and Methods(1) 실험 동물- ICR 마우스 (16마리)(2) 실험 도구- 유성매직 2개, 관찰 cage 4개, 장갑, 마스크, 기록지, 저울, 70% 알코올, 소독약, 티슈, 경구 투입용 주사기 4개,- 약물 : DW(투여용, 소독용), ethanol, Unknown B material, Aspirin 0.1ml/g, 0.7% 초산용액 0.1ml/g(3) 실험과정① 실험 3시간 전에 충분히 마우스가 실험실에 적응할 수 있도록 케이지를 실험실로 옮겨 주었다.② 총 16마리의 마우스를 준비하고, 음성대조군 DW으로 실험할 쥐 5마리, unknown 약물 B를 투여할 실험군 6마리, asprin을 투여할 양성대조군 5 2.4표 2.5표 2.6표 2.7표 2.84. Discussion(1) 음성대조군이번 시험에 사용한 약물인 unknonw B와 aspirin을 녹이는데 증류수가 사용되었다. 이에 약물 투여 시 증류수에 의한 반응 오차를 보정하기 위해 DW 투여군을 음성 대조군으로 설정했다.(2) onset time과 frequency의 의미진통제는 통증을 억제하는 약물이다. 투여된 초산으로 인해 마우스는 통증을 느끼게 될 것이다. 효과가 강한 마취제를 투여받은 마우스가 통증에 더 많이 둔감해 질 것이므로, 강한 마취제를 사용할수록 onset time이 길어지고, frequency가 감소할 것이다.(3) 결과값 해석실험 결과는 표 1.1과 같았다. 표 1.1을 근거로 onset time과 frequency를 DW, unknown B, aspirin 순서로 도식화 놓은 것이 표 1.2와 1.3이다. 이들로 보아 onset time은 DW(음성대조군) < unknown B < aspirin 이었고, frequency는 aspirin < unknown B < DW 로 나타났다.이들 값 차이의 통계적 유의성을 검정하기 위하여 t-test를 사용했고, 그 결과 표 2.1~2.6을 얻었다. 표 2.1와 표2.3에 의하면 DW와 unknown B의 검정 결과, onset time과 frequency 검정 모두 p값이 0.05보다 크므로 통계적 유의성은 없다고 판단할 수 있다. 반면 표 2.2와 표 2.4로 나타내어지듯 aspirin과 unknown B의 t-test 검정 결과 p값이 0.05보다 작았다. 따라서 aspirin과 unknown B의 onset-time과 frequency 값의 차이에는 통계적 유의성이 있다고 볼 수 있다.이러한 결과를 종합하여 분석해 보았을 때, unknown B의 진통 효과가 aspirin보다 작다는 결론을 낼 수 있었다. 진통제에는 non-opioid 약물과 opioid 약물로 구분할 수 있으며 opidoid 약물의 진통 효과가 더 크다. 따라서 aspi.
< Mouse에 대한 수면약물>- ICR마우스를 음성대조군, diazepam투여군, unknown 약물 투여군으로 나눠 Ketamine을 투여한다. Onset time과 duration time을 측정하여 각 군의 Ketamine의 영향을 비교하며 unknown 약물의 경향성 및 성상을 유추- 결과값 포함 (↓아래와 같은 결과값 분석 data)1. Introduction- ICR마우스를 음성대조군, diazepam투여군, unknown 약물 투여군으로 나눠 Ketamine을 투여한다. Onset time과 duration time을 측정하여 각 군의 Ketamine의 영향을 비교하며 unknown 약물의 경향성 및 성상을 유추한다.- 생존 상태는 Resting state를 기준으로 아래와 같이 나뉜다.경련 ← 과행동 ← 각성 ← Resting state → 진정 → 수면 → 마취이 중에서 진정과 수면은 상대적인 정적 상태가 유지되고 각성 상태에 비해 외부 자극에 대한 반응역치가 증가되는 것으로 특징 지어지는, 유기체의 규칙적이고 반복적이며 가역적인 상태를 의미한다.(1) 실험동물[Mus musculus]현재 실험용으로서 사용되고 있는 마우스는 학명으로 Mus musculus라고 하며 척추동물문, 포유동물강, 설치목, 쥐과, 생쥐속, 생쥐종에 속하는 동물이다. 마우스는 실험동물 가운데에서 가장 사용빈도가 높은 동물이다. 주로 종양, 바이러스, 세균, 약리, 독성, 유전, 면역, 내분비 등의 연구에 사용된다.(2) 투여용액[Saline]생체에서 조직이나 기관을 떼어낼 때나, 배양하는 조직과 세포를 세척하는 경우, 혹은 효소 처리에 의해 조직에서 세포를 해리하는 경우 등에 사용하는 무기염과 포도당만으로 이루어진 생리적 용액을 말한다. 조직과 세포의 삼투압과 생리적?pH(7.2~7.6)를 유지하도록 고려하고 있다. 동물 세포는, 여기에?아미노산과 비타민 등을 첨가하여, 다양한 합성 배양액을 고찰하고 있다. 이번 실험에서는 nagative control 군에 saline이 투여되었는데, 이는 주사 스트레스에 대한 생체 변화를 통제하기 위해 투여되었다.[Diazepam]디아제팜(Diazepam, 제품 상의 첫 표기: Valium)은 스위스 로슈(Roche)사가 개발한 벤조디아제핀계 신경 안정제이다. 통상적으로 불안 장애, 알코올 금단 증후군, 벤조디아제핀 금단 증후군, 경련, 발작, 불면증, 하지불안 증후군을 포함한 다양한 질병 치료에 사용된다. 디아제팜은 레오 스턴바크가 처음 합성하였고, 호프만 라 로슈에 의해 처음 제조되었다. 1963년 출시 이후로 세계에서 가장 흔히 처방되는 약물들 가운데 하나가 되었다. 다이제팜은 의료제도에 필수적인, 가장 효과적이고 안전한 약물이 나열된 WHO 필수 약물 목록에 등재되어 있다[Ketamine]케타민(ketamine)은 마취제의 한 종류이다. 전신 마취제로 분류되며 의학적 용도로는 수술을 위한 마취 유도, 통증의 경감에 이용된다. 환각과 혼란으로 인해 마약으로 악용될 우려가 존재한다. 부작용으로 두통이나 졸림 등이 발생할 수 있고, 혈압 상승, 지리멸렬(chaotic), 어지러움, 메스꺼움을 느낄 수도 있다.(3) 정좌반사 (정향반사, Righting reflex )동물이 이상 자세에서 정상자세로 돌아오는 반사를 정향반사라 한다. 동물의 꼬리를 잡고 몸 전체를 180도 돌려 복부가 하늘을 향하게 한 다음 착지 상태를 측정한다. 정상 동물의 경우에는 즉시 몸을 돌려 복부가 바닥을 향하도록 하나, 중추신경이 억제된 동물은 바른 자세를 취하지 못한다.이번 실험에서, 진정수면제를 투여받아 잠에 든 마우스는 배가 천장을 향하도록 뒤집어 놓아도 뒤집기를 하지 못한다. 반면에 잠에서 깬 마우스는 정좌반사를 하여 원래의 자세로 돌아온다.2. Materials and Methods(1) 실험 동물- ICR 마우스 (16마리)(2) 실험 도구- 유성매직 2개, 관찰 cage 4개, 장갑, 마스크, 기록지, 저울, 70% 알코올, 소독약, 티슈, 주사기 4개,- 약물 : Saline, Unknown B material, Diazepam 1mg/kg, Ketamine 100mg/kg(3) 실험과정① 수면실험이기 때문에 3시간 전에 충분히 마우스가 실험실에 적응할수 있도록 케이지를 실험실로 옮겨 주었다.② 총 18마리의 마우스를 준비하고, 음성대조군 saline으로 실험할 쥐 5마리, unknown 약물 B를 투여할 실험군 6마리, diazepam을 투여할 양성대조군 5마리를 나누고, 유성매직을 이용하여 마우스 꼬리에 표시를 했다.③ 투여 용량을 정하기 위해서 쥐의 무게를 측정하여 기록하였다.④ 무게를 측정한 마우스는 관찰 cage 3군데에 음성대조군, 실험군, 양성대조군 마우스를 각각 옮겨 구분했다.⑤ 음성대조군 saline, unknown 약물 B, diazepam을 순서대로 마우스에 투여하였다.⑥ 이때 1분 간격으로 주사하도록 노력했고, 1분 간격이 정확이 아닌 경우를 고려하여 주사한 시간을 측정했다.⑦ 투약한 시간에서 30분후 ketamine을 투여하였다. 이때부터 마우스가 잠에 들었는지 계속해서 확인해 주었다.⑧ 수면에 빠진 마우스를 뒤집어 정좌반사를 확인하며, 잠에 빠지기까지 드는 시간인 onset time과 자는 시간인 sleeping duration time을 기록하였다.3. Results① on-set time과 duration time(1) saline마우스 번호12345평균표준편차표준오차무게(g)3335333832---on-set time(sec)*************02161.254.2724.27duration time(sec)*************0910401062.6130.0158.14(2) B unknown material마우스 번호12345평균표준편차표준오차무게(g)3435373637---on-set time(sec)1222349911973129.461.6627.58duration time(sec)*************31058991.4158.4870.87(3) diazepam마우스 번호12345평균표준편차표준오차무게(g)3533373834---on-set time(sec)89*************.265.4029.25duration time(sec)*************045031425.6833.18372.61on-set time 비교 그래프duration time 비교 그래프saline > B unknown material > diazepamdiazepam > saline > B unknown material유의성 없음유의성 없음② t-검정을 통한 통계 datat-검정: 등분산 가정 두 집단saline, B unknown materialon-set time비교salineB평균161.2129.4분산2945.23802.3관측수55공동(Pooled) 분산3373.75가설 평균차0자유도8t 통계량0.865647P(T