대학생물학 및 실험IⅠ. Title: 물 탑 쌓기 및 현미경 사용법과 파이펫 사용법Ⅱ. Date:Ⅲ. Name:Ⅳ. Purpose: 대학생물학실험에 있어서 필요한 여러 가지의 초자류의 조작방법을 알아보도록 한다. 광학현미경의 구조와 기능을 익히고 그 밖에 실험에 주로 사용되는 장비인 Pipette, Autoclave, Clean bench, Incubator, Centrifuge 등의 기능과 사용방법을 익혀 보도록 한다.Ⅴ. Material-광학현미경, slide-cover glass-pipette, tip, microtube, 농도 90%의 설탕물, 증류수, 물감Ⅵ. Method①현미경에 Slide glass를 장치한다.②머리카락을 올려놓고, 저배율에서 고배율로 관찰한다.③남자1명, 여자1명의 머리카락을 관찰한다.① Ep-tube 4개를 준비하고 각각 90%, 60%, 30%, 0%로 labeling한다.② 60%로 labeling한 ep-tube에 농도 90%의 설탕물 600ul 증류수 300ul 넣고 inverting하여 골고루 섞어준다.③ 30%로 labeling한 ep-tube에 농도 60%의 설탕물 300ul 증류수 300ul 넣고 inverting하여 골고루 섞어준다.④0%로 labeling한 ep-tube에 증류수 400ul을 넣는다.⑤위와 같은 방법으로 90%, 60%, 30%, 0%의 설탕물을 준비한다. 각 용액에 각각 다른 색깔의 물감을 10ul씩 넣어서 잘 섞어준다.⑥농도가 짙은 설탕물부터 차례로 200ul씩 tube에 담아 색깔 별 탑을 쌓아본다.Ⅶ. Results1. 남자 생 머리카락X40X100X400X10002. 여자 파마 머리카락X40X100X400X1000현미경의 배율이 높아질수록 머리카락을 자세히 관찰할 수 있다. 육안으로 관찰했을 때 모두 검은색으로 보인 것과는 다르게 두 머리카락의 색의 차이가 보였다. 또한 머리카락의 안과 밖에 명암이 생긴 것을 확인할 수 있었다. 배율 X40에서는 여자의 머리카락이 남자의 머리카락에 비해다. 이는 슬라이드 글라스를 커버글라스로 덮어주는 과정에서 생긴 기포였다. 이렇게 생긴 기포는 관찰에 방해요인으로 작용하므로 여자 머리카락의 프레파라트를 만들 때는 이러한 점을 개선하여 기포를 생기지 않도록 하여 더욱 잘 관찰할 수 있었다.배율 X400을 관찰하면서 처음에는 색 이외에 다른 차이를 찾지 못했는데 사진을 확대해서 관찰한 결과 머리카락 표면에서의 차이점을 발견할 수 있었다. 머리카락 표면에 각질처럼 올라온 것이 생머리인 남자보다 파마를 한 여자의 머리카락에서 더 잘 관찰되었다. 이는 모소피라고 하는 모피질이 각질화한 것이라고 한다. 모소피가 파마를 한 여자의 머리카락에서 더 잘 관찰된 것은 성별의 차이보다는 파마의 유무로 인해 발생했다고 생각했다. 그 이유는 모소피가 잘 관찰된 것은 모발의 손상을 의미하고 머리카락은 18가지 아미노산으로 구성된 케라틴이라는 단백질로 이루어져 있고, 단백질은 열에 의해 변형되기 때문에 드라이, 잦은 파마 등에 의해 머리카락이 손상되기 때문이다.머리카락의 안과 밖에 명암이 생긴 것을 확인할 수 있었다. 실험이 끝나고 ‘왜 안과 밖에 명암이 생길까?’라는 생각은 머리카락이 평평한게 아니라 둥글기 때문에 빛을 받아 들이는데 있어 차이가 발생하기 때문일 거라는 생각으로 이어졌다.남녀 모두의 머리카락을 관찰하면서 배율 X1000에서는 낮은 배율과는 다르게 초점이 잘 맞지 않아 흐리게 관찰이 되어 조교님께 질문 드린 결과 배율 X1000이상의 고배율 관찰에서는 오일을 사용해야 한다고 알려주셨다. 여기서 오일을 바르는 이유는 액침법(immersion method)를 이용하기 위해서였다. 액침법은 유침법이라고도 하며 공기 대신 Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1067928&ref=y" 굴절률이 렌즈의 굴절률(1.6)에 가까운 Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1112952&ref=y" 시더유(cedar油)를 물체와 이며 tube는 고정되어 있지 않았고 이 과정에서 각 층이 정확이 분리되지 못하고 섞인 것이라고 생각했다.두 번째는 정확하지 않았던 각 농도의 액체와 색소(물감)의 비율이다. 농도가 다른 액체들에 물감을 넣는 과정에서 2가지 문제가 발생했다. 하나는 각 다른 농도의 액체의 양은 다르게 준비된 상태에서 같은 양의 색소를 넣은 것이다. 즉, 90%, 60%, 30%, 0%의 액체의 양이 다른 상태에서 같은 양의 색소를 넣은 후 200ul씩 tube에 담아 오차가 발생한 것이다. 다른 하나는 같은 양의 색소를 넣는 과정에서 색소로 이용된 물감은 점성이 높았고 높은 점성은 들어가는 색소의 양의 오차를 만들어 냈다.위와 같은 문제점을 계선한다면 더욱 완벽한 물 탑을 쌓을 수 있을 것이라고 생각했다.Ⅸ. Projects① 현미경의 다양한 종류에 대해 조사하시오.1) 빛을 쓰는 광학 현미경(optical microscope 또는 light microscope),2) 전자를 쓰는 전자 현미경(electron microscope),3) 이온을 쓰는 이온 현미경(ion microscope),4) 음파를 쓰는 음파 현미경(acoustic microscope),5) 아주 작은 탐침을 쓰는 주사 탐침 현미경(scanning probe microscope),6) 엑스선을 쓰는 엑스선 현미경(x-ray microscope).② 현미경을 관찰 할 때 왜 저배율에서 고배율로 관찰하는지 이유를 쓰시오.고배율에서는 관찰 대상의 상을 찾기 힘들기 때문에 쉽고 빠르게 상을 찾기 위해 저배율에서 고배율로 관찰한다.③ 멸균 및 소독법의 종류에 대해 조사하시오.1-멸균법(1) Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=429976&ref=y" 건열멸균: 배양병이나 피펫 등 초자기구, 금속기구를 멸균하는 데에 사용한다. 통상 160℃에서 90분 또는 180℃에서 50분가량 가열한다. 종이는 고온에서 타르를 생성하기 때문에 바람직하지 않다.(2) 가압멸균: 사용한다. 니트로셀룰로오스막 필터(0.45μm 또는 0.2μm)를 가장 많이 사용한다. 그러나 0.2μm에서도 Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=425675&ref=y" 마이코플라스마의 투과를 완전히 방어할 수는 없다.(4) 가스멸균: 폴리스티렌 배양접시 등 가열할 수 없는 기구를 멸균시킬 때 사용되며, 가압(1kg/cm2가량) 에틸렌산화물가스(30%가량)를 40~50℃에서 3시간가량 처리하는 것이 보통이다. 알킬화반응이기 때문에 표면의 Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=429197&ref=y" 세포부착성이 변화하거나 변이원성이 나타나는 것이 있는 등 주의가 필요하다.(5) Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=2691658&ref=y" 방사선멸균: 자외선, Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=2690566&ref=y" γ선 등을 사용하여 멸균하는 방법인데 플라스틱제용기 등 가열할 수 없는 기구의 멸균에 사용하고 있다. 자외선살균등(燈)을 사용할 때는 가까운 거리에서 30분 정도로 멸균할 수 있다.2-소독법물리적 방법을 이용한 미생물 소독 방법자비소독법: 자비소독법(Boiling)은 대부분의 병원성 미생물들이 50~70°C에서 10분 정도 노출되면 사멸된다는 점에 착안한 소독법이다. Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144850&ref=y" 저온살균법(Pasteurization): Louis Pasteur가 고안한 방법으로 62~65°C에서 30분 또는 75°C에서 15분간 가열하면서 소독하게 된다.자외선 소독법(UV radiation): 대략 10~400nm까지의 낮은 파장을 가진 자외선은 미생물에게 파괴적인 영향을 끼친다. 따라서 이러한 자외선 조사를 통하여 소독이라는 소기의 방해한다.-계면활성제, Chlorhexedine: 미생물의 세포막 구성을 방해한다.-머큐로크롬, 양성비누, 붕산: 미생물의 효소계를 저해한다.-Ethylene Oxide, Formaldehyde: 미생물의 핵산을 파괴하여 저해한다.④ pipette 사용 후 volume을 최대로 맞추어 놓는 이유를 설명하시오.Pipette의 volume 조절은 스프링의 장력차이로 이루어진다. volume 조절에 이용되는 스프링을 무리하게 늘리거나 늘어난 상태를 오래 유지시키면 원상태로 돌아가지 못하고 변형된다. 이처럼 volume을 최대로 맞추어 놓지 않으면 용수철이 변형되어 pipette의 고장을 유발할 수 있기에 pipette 사용 후 volume을 최대로 맞추어 놓는다.Ⅹ. Reference네이버, 백과사전,’현미경 종류’, Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=3537359&cid=60217&categoryId=6021" https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=3537359&cid=60217&categoryId=6021네이버, 백과사전,’멸균법’, Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=426138&cid=60261&categoryId=60261" https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=426138&cid=60261&categoryId=60261네이버, 백과사전,’소독’, Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144965&cid=61232&categoryId=61232" l "toc2" https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5144965&cid=61232&categoryId=61232#toc2네이버, 백과사전,’유침법’ Hyperlink "https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=1
