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미생물학실험 보고서

미생물학실험 보고서미생물 배양 및 도말법[1] 실험의 목적미생물 배양 및 도말법의 종류에 대해 알아보고, 주변에서 직접 미생물들을 채취하여 도말하고 배양해본다.[2] 실험의 원리 및 이론1. 도말법2. 획선 도말법 (streaking)획선도말은 단일 콜로니를 얻게 하기 위한 목적으로 균주를 접종하는 방법이다. 뒤쪽으로 갈수록 넓게 균주를 도말하여 단일 콜로니를 얻을 수 있도록 한다. 따라서 균주를 백금이에 너무 많이 묻혀 도말하면 단일 콜로니가 얻어지지 않고 연고를 바른 것처럼 될 수 있으니 주의한다.1) 균이 담긴 시험관의 입구를 화염멸균한다.2) 백금이를 화염멸균한 후 균이 없는 평판배지에 식힌다.3) 백금이에 균을 묻힌 후 평판배지를 지그재그로 그으며 도말한다.4) petri dish 뚜껑을 닫고, 백금이는 다시 화염멸균하여 보관한다.3. 평판 도말법 (spreading)평판 도말법은 획선 도말과 달리 전체적으로 균주를 도말해 주는 방법이다. 평판배지에 균주 액 0.1ml를 분주하고 도말봉으로 전체적으로 도말해 주는 것이다. 도말봉을 잡은 손은 수직으로만 움직이면서 도말하고 다른 한 손으로는 평판배지를 시계방향 또는 시계 반대방향으로 한 방향으로만 돌려주면서 도말하는 것이 바람직한 방법이다.1) 균주가 담긴 시험관의 입구를 화염멸균한다.2) 피펫을 이용해 균주 액 0.1ml를 흡입한 후 배지에 분주한다.3) 도말봉을 화염멸균한 후 균이 없는 배지 끝 부분에 식힌다.4) 도말봉을 이용해 균이 배지의 모든 부분에 스며들 때까지 도말한다.5) petri dish 뚜껑을 닫고, 도말봉을 다시 화염멸균하여 알코올로 닦는다.4. 고층배지의 접종고층배지의 접종은 백금선을 사용하여 균주를 묻힌 후 미리 제조한 고층배지에 그대로 푹 찍는다. 이 때 균이 시험관 벽에 묻지 않도록 주의한다.1) 균주가 담긴 시험관의 입구 및 배지가 있는 test tube 입구를 화염멸균한다.2) 백금선을 화염멸균 한 후, 균이 없는 배지의 끝 부분에 식힌다.3) 백금선에 균을 묻힌 후 test tube 벽에 닿지 않게 푹 찍어 준다.4) 백금선을 다시 화염멸균한다.5. 사면배지의 접종사면배지 접종은 백금이를 이용하여 균을 묻힌 후 지그재그 형식으로 도말한다. 이 때 고층배지와 마찬가지로 균이 시험관 벽면에 묻지 않도록 주의해야 하며 배지가 파이지 않도록 힘 조절을 잘 해야 한다.1) 균주가 담긴 시험관의 입구 및 배지가 있는 test tube 입구 화염멸균2) 백금이를 화염멸균 한 후, 균이 없는 배지의 끝 부분에 식힌다.3) 백금이에 균을 묻힌 후 기울어진 경사면에 벽면에 닿지 않도록 주의하며 지그재그 형식으로 그려준다.4) 백금이는 다시 화염멸균하고 테이블 위 또는 rack에 꽂아 놓는다.[3] 실험의 재료 및 방법재료: 멸균된 LB plate, 이쑤시개 또는 면봉방법:1. 주변에서 미생물을 채취한다.2. 미생물을 채취한 방법에 따라 streaking, spreading 여부를 결정한다.3. 채취한 미생물을 멸균된 배지 뚜껑을 열고 streaking or spreading 한다.4. 햇빛이 들지 않고 너무 습하지 않은 적당한 곳에 두고 미생물이 자라는지 매일 관찰한다.[4] 실험의 결과이어폰이 귀에 닿는 이어팁 부분을 면봉으로 긁어 streaking 방식으로 멸균된 배지에 도말한 후 7일 후 관찰한 결과이다. 총 5개의 미생물 colony가 자란 것을 관찰할 수 있다.[5] 고찰이번 실험에서는 이어폰에서 채취한 미생물을 배지에 streaking으로 도말해 자라는 미생물을 관찰했다. 원해 streaking은 지그재그로 백금이를 움직이며 도말해야 하지만 면봉으로 도말을 해야 하는 상황이었기 때문에 배지가 긁히지 않게 1자로 5번 그어 도말했다. 7일 뒤, 도말한 선 한 부분에 5개의 미생물 colony가 자란 것을 확인했다. 지난 실험에서 관찰할 수 있었던 미생물과 형태가 같아 공기중에 있던 미생물이라는 의심을 했지만 5개의 colony가 도말한 선 중 하나에서 일렬로 자랐기 때문에 공기중의 미생물이 아니라 채취한 미생물이라는 것을 알 수 있었다. Streaking으로 도말하면 보통 앞 쪽에서는 미생물 colony가 뭉쳐 자라고 뒤쪽으로 갈수록 묻어있는 균주가 떨어져 희석된다. 이번 실험에서 초반에 도말한 곳에만 미생물이 자랐는데 이를 통해 미생물을 채취한 이어폰에 많은 수의 미생물이 분포해 있지 않다는 것을 알 수 있었다. 이렇게 배양한 미생물이 모여 형성하는 colony는 형태적으로 조금씩 차이가 있지만 대부분 작은 원형으로 나타나기 때문에 맨눈으로 구별하여 동정하기에는 어려움이 있을 수 있다. 제대로 미생물을 동정하려면 생리학적, 유전학적 방법이 필요하며, 형태를 파악하는 것도 눈으로 보는 것보다는 주사전자현미경(SEM)을 이용하는 것이 좋다. 이번 실험에서는 미생물을 정확히 동정할 수 있는 기구나 방법을 사용할 수 없었기 때문에 눈으로 대략적인 면을 관찰해 보았다. 평균 지름 3mm의 하얀 원형의 미생물 colony이고, 가운데에 더 많은 수가 있어 조금 볼록해 보이지만 높이가 높지 않아 거의 평평한 모습이다. 보통배지에서 배양한 미생물에 대해 검색해 보았을 때 형태가 비슷한 것이 많았는데, 이 중 lactobacillus, E.coli와 가장 비슷했다. 하지만 Lactonacillus는 후벽균문, E.coli는 프로테오박테리아문으로 분류군에서 차이가 심하게 나기 때문에 종을 구분하는 데 범위를 좁히기 힘들었다.[6] 참고문헌조혜빈, 한국분석시험연구원KATR, 배지란 무엇인가?, 2020.5.13 접속 Hyperlink "http://katr.re.kr/%E2%97%8F-%EB%B0%B0%EC%A7%80%EB%9E%80-%EB%AC%B4%EC%97%87%EC%9D%B8%EA%B0%80/" http://katr.re.kr/%E2%97%8F-%EB%B0%B0%EC%A7%80%EB%9E%80-%EB%AC%B4%EC%97%87%EC%9D%B8%EA%B0%80/

자연과학| 2023.06.21| 5페이지| 1,000원| 조회(343)

미생물, 미생물학, 미생물학실험

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