유전자 클로닝을 위한 효소들의 종류와 특징

소개

자연과학, 의학을 전공한 학생들에게 유용한 정보입니다.

목차

유전자 클로닝을 위한 효소들의 종류와 특징
1. 유전자 클로닝을 위한 효소종류
(1) 뉴클레아제
(2) 리가아제
(3) 중합효소
(4) DNA 변형효소
(5) 토포이소메라제

2. DNA를 절단하는 효소들-제한효소
(1) 제한 효소의 발견과 기능
(2) Form II 제한효소는 특별한 염기배열을 절단한다.
(3) blunt 말단과 sticky 말단
(4) DNA 분자에서 인식 염기배열의 빈도수
(5) 실험실에서 제한효소에 의한 절단
(6) 제한효소 절단 결과의 분석
(a) 젤 전기영동에 의한 분자들의 분리
(b) 젤 상에서 DNA분자를 보는 방법
(7) DNA 분자의 크기측정
(8) DNA 분자의 다른 제한부위의 위치도

3. Ligation-DNA 분자의 결합
(1) DNA 리가아제의 활동 방식
(2) sticky 말단은 ligation효율을 증가시킨다.
(3) Blunt 말단 분자에 sticky말단의 도입
(a) 연결자
(b) 어답터
(c) homopolymer tailing에 의한 접착말단의 도입

본문내용

이러한 부류의 효소를 상세하게 고려하기 전에 두 가지 사실을 알아야 한다. 첫째, 대부분의 효소가 특별한 부류에 속에 있지만 소수의 효소는 두 개 이상의 부류에 걸쳐서 복합적인 역할을 보여 준다. 가장 중요한 것은 많은 중합효소는 새로운 DNA 분자를 만드는 능력과 DNA 절단 역할을 동시에 한다는 것이다.
둘째, DNA조작효소뿐만 아니라 RNA 에 작용할 수 있는 많은 유사한 효소가 알려져 있는 것은 다행한 일이다. DNA 제법 시 오염된 RNA를 제거하기 위해 사용된 리보뉴클라아제가 이러한 효소의 한 예이다. 어떤 RNA조작효소는 유전자 클로닝에 응용될 수 있다.

(1) 뉴클레아제
뉴클레아제는 DNA 가닥에서 하나의 뉴클레오티드가 그 다음에 연결되어 있는 포스포디에스테르 결합을 깸으로써 DNA 분자를 절단한다. 두 가지 종류의 뉴클레아제는 다음과 같다.
1) 엑소뉴클레아제는 DNA 분자의 말단에서 뉴클레오티드를 하나씩 제거한다.
2) 엔도뉴클레아제는 DNA 분자 내에서 내부 포스포디에스테르 결합을 끊을 수 있다.
다른 엑소뉴클레아제 간의 주요 특징은 이중가닥 분자가 공격을 받을 때 절단되는 가닥의 숫자에 있다. Bal3I이라 부르는 효소는 이중가닥 분자의 양가닥으로부터 뉴클레오티드를 제거하는 엑소뉴클레아제의 한 예이다. Bal3I이 DNA 분자에 작용하는 시간이 길수록 남은 DNA 단편은 짧아질 것이다. 반면에 대장균 엑소뉴클레아제III와 같은 효소는 이중가닥 분자의 한 가닥만을 절단하여 생성물로서 한가닥 DNA를 만든다.
똑 같은 기준이 엔도뉴클레아제를 분류하는 데 사용될 수 있다. S1 엔도뉴클레아제는 한가닥만을 절단하는 반면에 암소 췌장에서 얻어지는 디옥시리보뉴클레아제I 은 한가닥과 이중가닥 분자 모두를 절단한다. DNase I은 DNA 내부의 어떤 한 포스포디에스테르 결합도 공격하며 장시간 DNaseI 역할의 마지막 결과로 모노뉴클레오티드와 아주 짧은 올리고뉴클레오티드의 혼합물이다. 그 반면에, 제한효소라고 부르는 특별한 종류의 효소는 제한된 순자의 특별한 인식부위만의 이중가닥 DNA를 절단한다.

참고자료

· 없음