[생화학실험]Bradford assay

소개

UV spectroscopy 측정장비를 이용하여 단백질 정량법을 이해하는 실험입니다.
bradford assay 실험을 통하여 간단히 단백질에 대한 흡광치를 계산할 수 있다.
•bradford assay법을 이용하여 미리 농도를 알고 있는 Standard 용액을 이용하여 농도를 모르는 sample의 농도를 구할 수 있다.
•단백질 정량법에 대한 이해를 할 수 있다.

목차

■ 실험 목적

■ 실험 이론 및 원리
(1) Spectroscopy (분광광도법)
(2) 자외선-가시광선 분광광도법 (UV-Visible spectroscopy)
(3) Bradford Assay의 원리
(4) 표준곡선을 이용하여 시료의 농도구하기

■ 실험 기구 및 시약

■ 실험방법

■ 결과 및 분석

■ 토의 사항

■ 참고 자료
(1) 분광학적 정량법
(2) 단백질 정량법
1) 단백질 정량법의 종류

본문내용

■ 실험 목적
• 미리 농도를 알고 있는 Standard 용액을 이용하여 농도를 모르는 sample의 농도를 구할 수 있다.

■ 실험 이론 및 원리
(1) Spectroscopy (분광광도법)
분자들은 빛을 흡수할 수 있는데 그 분자가 흡수하는 빛의 파장과 흡수하는 정도는 분자의 구조와 환경에 의해 좌우되기 때문에 흡광 분광 광도법 (absorption spectroscopy)은 물질을 분별하거나 그 구조를 연구하는데 사용될 수 있다.
현재 다양한 분광광도법이 사용되고 있지만 고분자 분석에는 자외선-가시광선 (UV-visible) 분광광도법과 적외선 (infrared, IR) 분광광도법이라는 두 가지 흡수 분광광도법이 주로 사용된다. 이 두 가지 분광광도법은 분석에 사용되는 빛의 파장에 의해 분류된 것이다. 빛은 전자기파 (electromagnetic wave)인데 전체 전자기파는 다음 그림과 같이 파장에 따라 구분될 수 있다. 여기에서 전자기파의 파장을 , 진동수를 라고 하면 빛의 속도 는 라는 식으로 나타낼 수 있기 때문에 파장과 진동수는 서로 반비례 관계에 있음을 알 수 있다. 또한 전자기파의 에너지 는 라는 식으로 표현되기 때문에 진동수가 클수록 그리고 파장이 짧을수록 전자기파의 에너지는 커진다.
분자에 있는 전자들은 일정한 위치에너지를 갖는 오비탈에 소속되어 있다. 가장 안정한 상태가 되도록 하기 위해 한 분자에 소속된 전자들은 가장 위치 에너지가 낮은 오비탈부터 채우게 되는데 이 상태를 바닥상태 (ground state)라고 한다. 그러나 분자가 빛을 흡수하면 그 빛 에너지의 크기에 해당하는 에너지 차이를 갖는 더 높은 에너지 상태로 전자가 이동하여 들뜬 상태 (excited state)가 된다. 만약 전자가 파장이 인 빛을 흡수하여 이라는 에너지를 갖는 오비탈에서 라는 에너지를 갖는 오비탈로 이동하였다면 두 오비탈의 에너지 차이와 흡수한 빛의 파장은 다음과 같은 관계식으로 나타낼 수 있다.

참고자료

· ∙ Biochemistry 6th, Stryer, Chapter 8
· ∙ 개정 제 3판 단백질 실험 노트 (상), 김승호 외 1명, 월드 사이언스, p30～31