[화학과 분석화학 실험] HPLC 분석 Determination of caffeine in beverages by HPLC

소개

3. 실험 원리
3-1. 이론적 해석
3-1-1. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)
보통의 액체크로마토그래피에서 입자를 더욱 작게 하고, 가는 분리관(分離管)을 사용해서 알맞은 압력을 가하여(입자를 작게 하면 액체의 통과가 느려지므로) 용매를 흘리면, 기체크로마토그래피와 같은 속도로, 또한 뛰어난 분리기능을 얻을 수 있다.
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목차

1. 실험 목적
2. 실험기구 및 시약
3. 실험 원리
4.실험방법

본문내용

1. 실험 목적

역상 HPLC는 커피, 홍차, 코카콜라 및 펩시콜라 속에 들어있는 카페인의 농도를 정량하는 데 이용한다.

2. 실험기구 및 시약

2-1. 실험기구
자외선 검출기(254nm)가 붙어있는 HPLC(bioanalytical Systems Student LC 와 같은)
역상 C분리관(LiChrosorb RP 18과 같은), 메스플라스크(100ml) 5개, (20ml) 4개,
주사기(50), 피펫(2ml, 4ml, 8ml) 각기 한 개씩

2-2. 시약
표준시약용 카페인, 20%메틸알코올 : 80% 물의 용매, 1L, 커피, 홍차, 코카콜라, 펩시콜라

3. 실험 원리

3-1. 이론적 해석

3-1-1. HPLC(High Performance Liquid Chromatography)
보통의 액체크로마토그래피에서 입자를 더욱 작게 하고, 가는 분리관(分離管)을 사용해서 알맞은 압력을 가하여(입자를 작게 하면 액체의 통과가 느려지므로) 용매를 흘리면, 기체크로마토그래피와 같은 속도로, 또한 뛰어난 분리기능을 얻을 수 있다. 최근 충전제 ·고압펌프 ·검출기 등의 기술적 문제가 해결되어 천연물 유기화학 ·임상화학 등의 분야에서 이용하게 되었다. 충전제는 10∼15μm의 다공질 중합체 또는 비다공질인 작은 입자에 실리카겔과 같은 것의 엷은 층을 만들어 여기에 액체를 입힌 것 등이 쓰인다. 도입 압력은 100∼3000psi, 검출기로는 차동굴절계(差動屈折計) ·자외선분광광도계(紫外線分光光度計) 등이 있다.
HPLC는 HPLC급 용매가 따로 있어서, 물질을 순수 분리하여 정성, 정량 분석에 이용한다. HPLC는 정지상과 이동상으로 나누어지는데, HPLC에서 사용하는 이동상은 흡착과 분리가 가능하다.
특히 HPLC는 먼지가 들어가면 안 되기 때문에 3차 증류수를 사용한다. 3차 증류수는 3번의 필터 과정을 거치면서 그 속에 들어 있는 미생물, 불순물, 먼지, 생화학물질 등을 제거하는 역할을 해준다.

참고자료

· [1]. Donald T. Sawyer/ William R. Heineman/ Janice M. Beebe, 기기를 이용하는 화학실험법, 박기채/박면용/원충택/차기원,