Yeast의 complementation실험

소개

Yeast들의 complementation을 실험한 실험 결과 리포트 입니다.

목차

1. PORPOSE
2. MATERIALS & SUPPLES
3. PROCEDURE
4. RESULT
5. DISCUSSION
6. REFERENCE

본문내용

1.1. DBY1826, YJY45를 각 YPD plate에 stick한다. (알콜램프를 켜서 그 주위에서 작업하여 낙균으로 인한 오염을 방지한다.)
1.2. Incubator 안에서 대략 26℃ 정도로 2~3일정도 배양한다.
1.3. Petri dish에 3개의 구역을 나눴다.
1.4. DBY1826의 10㎕를 따서 A구역과 B구역에 동그랗게 도말했다.(이 때도 알콜램프를 켜서 작업을 한다.)
1.5. YJY45를 DW에 희석시켜 e-tube에 담은 액을 C구역에 10㎕를 넣었다.
1.6. A구역의 DBY1826이 마르고 난 후에 YJY45를 A구역에 DBY1826이 있던 장소에 그대로 10㎕떨어뜨려줬다.
1.7. A 구역에 있던 부분을 Striking해줬다.
1.8. Yeast들이 마를 때까지 기다려 준 뒤 뚜껑이 덮힌 상태로 petri dish를 뒤집은 상태로 incubator에서 26℃에서 2~3일동안 배양시켰다.
1.9. 2~3일 뒤에 배양 결과를 관찰한다.
상했던 결과는 DBY1826과 YBY45를 mating 시킨 것만 살아남고 DBY1826이나 YBY45만 접종시킨 부분은 완전히 사멸해야했다.
DBY1826
his3-△200
leu2-3,112
ura3-52
ade2

YBY45
his3-△200
leu2-3,112
ura3-52
lys2-801
trp1-1

위에 보이는 도표는 DBY1826과 YBY45가 만들지 못하는 요소들이다. 여기에서 소문자로 쓰여진 것이 recessive mutation이기 때문에 발현되지 않아 해당되는 아미노산을 합성하지 못한다. 그리고 △표시는 deletion을 의미하므로 his3-△200은 200번째 염기가 deletion되었다는 말이다. 이들은 각각 a와 α type의 haploid cell이여서 genotype이 바로 phenotype으로 표현된다. 따라서 위에 표시된 아미노산은 스스로 생산할 수 없는 아미노산, 즉 필수 아미노산이라는 것이다.
위 도표를 보면 알 수 있듯이 3개는 공통적으로 만들 수 없는 아미노산이고 나머지 부분은 서로가 만들지 못하는 아미노산들이 달랐다. 공통적으로 모자란 것은 Selection 배지인 SD에 His + Leu + Ura를 넣었기 때문에 이 부분에 대해서는 생장하는데 문제가 없지만 나머지 아미노산은 서로 만들어 내지 못하기 때문에 살아남지 못한다.

참고자료

· 1. http://www.ihop-net.org/UniPub/iHOP/gs/34478.html