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  • Monoclonal anyibody 생산하는 실험 방법
    ●다량의 Monoclonal antibody를 생산하는 hybrid cell (hybridoma)Polyclonal antibody는 여러 가지의 antibody가 하나의 cell에 있는 서로 다른 epitope를 인식하는 종류를 말하는 것이고 monoclonal antibody는 그 중 같은 epitope를 인식하는 antibody를 말하는 것이다. 이것은 농도가 낮아 만들기 어려운 것인데 Hybridoma를 만들면 쉽게 얻을 수 있다.이는 Myeloma cell(암세포)의 증식과 monoclonal antibody의 특이성을 이용한 것이다.-In mammal, B lymphocyte는 antigen에 대한 antibody 생성.따라서monoclonal antibody 생성하기 위해 쥐에 antigen을 주사함.-B lymphocyte에서 antibody 생산 및 분비-antigen-activated B lymphocyte는 신장이나 lymphonode에서 각각clone을 생성하고 특이적인 antibody 생성(monoclonal antibody)-이를 HGPRT mutant인 myeloma cell(immortal lymphocyte)와 fusion-이를 HAT(Hypoxanthine, Aminopterin, Thymidine) medium에 배양.정상 B lympocyte는 HGPRT 생산가능하여 살아갈 수 있으나 번식의 제한으로 인해 나중에 death.Fusion되지 않은 cell은 myeloma cell은 HGPRT에 mutant가 있으므로 Aminopterin(antifolate)로 인해 De novo synthesis가 막혀 핵산을 생성못하므로 죽음.
    자연과학| 2009.10.24| 1페이지| 무료| 조회(644)
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  • 시상화석과 표준화석
    Index fossil(표준화석) and Facies fossil(시상화석)화석은 쓰임새에 따라 표준 화석과 시상 화석으로 분류된다.대기세생물의 진화상거금년수(백만년)신생대제 4기현 세현대인0.0**************************0*************00최신세인류의 진화 : 거대포유동물제 3기선신세큰 식육류 ; 초원이 퍼짐중신세유인원류 퍼짐점신세첫 유인원류 ; 단자엽식물이 혼합시신세유태반류 방산효신세첫 유태반류 포유동물 ; 단자엽식물중생대백 악 기첫 현대 조류 ; 포유류의 몇 현대목 ; 말기에 공룡류 멸망 시작; 피자식물이 퍼짐 ; 나지식물이 쇠퇴쥐 라 기공룡류 우세 ; 첫 조류 및 포유류 출현 ; 소철류 및 송백류가 혼합트라이아스기공룡 등 큰 파충류 출현 ; 포유류 비슷한 파충류 ; 종자 양치식물 멸망 ; 나자식물 우세고생대폐 름 기파충류의 적응방산 ; 양서류 쇠퇴 ; 많은 해양 무척추동물 멸망; 석송류 쇠퇴석탄기펜실베니아기파충류 출현 ; 양서류 우세 ; 곤충이 흔함 ; 나자식물미시시피아기양서류의 적응방산 ; 상어류 많음 ; 인목?종자 양치식물데 본 기어류 우세 ; 양서류 출현; 나자식물의 첫 삼림실 루 리 아 기턱이 있는 어류 ; 해산거미류 우세 ; 육상절지 동물 ; 원시육상식물오 르 도 비 스 기갑자어류(첫 척추동물) ; 해양무척추동물이 많아짐 ; 육상식물 출현캠 브 리 아 기많은 주요 무척추동물의 문, 강 출현 ; 삼엽충, 완족동물 우세; 해조 다양화전캄브리아대해양원생돌물 ; 약간의 연체동물, 기타 후생동물, 원시해조 ; 균류지질시대표표준 화석은 특정한 시기에 광범위하게 분포하여 생존하다가 멸종한 생물의 화석이다. 유용한 표준화석은 뚜렷한 특징을 지니며 쉽게 인지되어야 하고, 풍부해야 하며, 지리적으로 넓은 지역에 걸쳐 분포해야 하고, 생존기간이 짧아야 한다. 표준화석은 지질시대 구분의 경계와 층의 대비를 정의하는 기초가 된다. 해성층에서 흔히 이용되는 표준화석으로는 경질부를 가지는 단세포 원생동물과 암모나이트류와 같은 좀더 큰 종류가 생대 퇴적층의 연대측정에는 표준화석으로 포유류가 널리 이용된다. 이러한 동물 종들은 모두 껍질·뼈·이빨 등과 같은 경질부를 가지고 있으며, 빠른 속도로 진화하는 특성을 가지고 있다.이러한 생물 화석은 한 지층군에서만 발견되기 때문에 그것이 나온 지층의 생성 연대를 결정하는 데 중요한 기초 자료가 된다. 가령 삼엽충 화석이 발견된다면 고생대에 형성된 지층임을 알 수 있다. 중생대의 공룡, 신생대의 화폐석도 표준 화석이다.이와 달리 시상 화석은 특정 환경에서 살았던 생물의 화석으로, 시대와 무관하게 당시의 환경을 나타내 준다. 산호는 예전이나 지금이나 수온이 높고 얕은 바다에서 생활하며, 고사리는 습기가 많은 음지에서 자란다. 이러한 산호나 고사리의 화석이 나오면 그곳의 환경을 미루어 짐작할 수 있는 것이다. 그 외에 생물이 기어간 흔적이나 발자국이 암석화되어 남아 있는 생흔 화석도, 배설물이 굳어 된 분화석도 있다. 이들은 고생물의 생활상을 아는 데 중요한 단서가 된다. 단단하게 굳은 나무가지나 벌레구멍의 흔적, 해안선을 따라 난 발자국, 호수 퇴적층에 묻힌 꽃가루 등 어떤 형태이든 화석은 모두 과거 생물에 대한 귀한 정보를 제공해 준다.표준화석의 경우 대표적인 것으로는 선캄브리아대는 스트로마톨라이트, 석회조류, 박테리아, 고생대는 삼엽충, 갑주어, 필석, 방추충, 그리고 중생대는 암모나이트, 공룡, 신생대는 매머드와 화폐석으로 볼 수 있다. 그리고 시상화석으로 대표적인 것은 은행나무와 산호, 고사리 등을 볼 수 있다.Ⅰ. 표준화석ⅰ,선캄브리아대가장 오래된 지각의 나이가 캐나다 순상지의 38억년이라고 한다. 그때부터 1만년전까지를 지질시대라 하고 그후부터 인간의 역사시대라고 한다,그 긴시간동안 지구에는 많은 생물들이 멸종, 진화를 반복해 왔다. 그리고 지형도 마찬가지로 점점 변화했다.지구과학자들은 화석을 연구하여 지구환경이 조용히 만들어진게 아닌 급변하면서 만들어졌다는것을 알아 냈다. 그리고 화석들의 종류의 변화 등을 기준으로 긴 지질시대를 4개의 대로 구분한다스트로마토라이트(Stromatolites)이는 현존하는 스트로마토라이트와 같은 구조로 미생물로 구성된 매트같은 구조로서 다양한 수중 침전물들이 축적되고 고착되어 거대한 단축같이 생긴 얇은 판이 겹쳐진 형상을 하고 있다. 주로 석회암으로 구성된다. 미생물, 주로 시아노박테리아(청록조)의 성장과 신진대사에 의해 퇴적물이 독특한 구조를 보이며 쌓여서 만들어진 유기적 퇴적구조를 말한다. 선캄브리아시대 암석에서 가장 많이 발견되는 화석이며, 국내에서는 경상누층군에서 많이 발견되고 있다.ⅱ. 고생대고생대는 약 5억5천만년 전부터 2억 4천만년 전까지의 시대로, 이때부터 많은 생물들이 나타나게되었다. 기후는 대채로 온난 다습하엿으나 말기에는 빙하기도 있엇다. 발견되는 대부분의 화석들은 굳은 경질부를 보유하였으며, 주로 삼엽충 , 필석류, 완족류, 해면류, 산호류, 방추층류 등의 무척추 동물들이 주종을 이루었다. 삼엽충은 캄브리아기에 출연하여 고생대 말기에 멸종하기까지 크게 번성하여 고생대를 대표하는 표준화석이되었으며 척추 동물로는 원시적인 어류가 나타났고, 말기에는 양서류가 번성하였고, 파충류도 나타나기 시작했다 식물계는 실루리아기에 최초의육상 식물이 출현하여 급격한 증가를 보이면서 석탄기에 인목, 유절류, 양치류 등이 대규모의 삼림을 이루었으며, 이들은 석탄의 원료가 되었다.-삼엽충삼엽충은 삼엽충강중에서 절멸한 절지동물을 가리킨다. 고생대 캄브리아기 초기에 등장하였고 고생대 전반기에 번성하다가, 데본기에 대량 멸종으로 1목을 제외하고는 모두 자취를 감췄다. 결국 2억 5천만 년 전인 페름기에 모두 멸종하였다.-갑주어갑주어(ostracoderm)는 오늘날 어류의 조상이며 가장 오래된 척추동물로 고생대 오르도비스기에 바다에 나타나 데본기에 번성하였다가 데본기 말에 멸종하였다. 민물이나 민물과 짠물이 섞인 물에서 살았으며, 몸은 머리·몸통·꼬리로 이루어져 있었다. 몸에 뼈가 없고 머리와 몸통 앞부분이 딱딱한 골질판으로 덮여 있었다. 몸통 뒷부분은 비늘로 덮여 있고 머리 뒤에 머리의 위쪽에 서로 가까이 붙어 있었고, 머리의 아래쪽에는 작은 판이 모여서 된 감각기관이 달려 있었다. 이 기관은 압력이나 진동 따위를 느꼈을 것으로 여겨진다.-필석고생대에만 생존하였다가 멸종된 생물로 고생대 오르도비스기와 실루리아기를 세분하고,그시대를 결정하는 중요한 표준화석이다. 현생물로는 밀접하게 연관된 생물이 없어서 필석에 관한 생태에 대해서는 함께 산출되는 삼엽충이나 다른 해서생물을 통한 간접적인 자료를 통해 얻어진다.이 생물은 바다에서 서식하는 부유성 생물이 있었고 바다의 표면에서 해초등에 부착하여 생활하면서 조류에 의해 널리 분포되었을 것으로 해석된다-방추충고생대 석탄기~페룸기 까지 생존하였던 단세포 생물이며 수심이얕은 바다에 서식하였던 것으로 추정된다. 석탄을 발견할 때 중요한 자료가 되며, 우리나라에는 강원도 태백, 충북일대에서 발견된다.ⅲ. 중생대(Mesozoic Era)중생대는 약2억 4천만년 전부터 6천 6백만년 전까지로고생대에비하여 진화된 생물이 많이 나타났다. 기후 조건은 빙하의 흔적이 거의없는 것으로보아 전반적으로 온난한 기후로 생물이 살기에 좋은 환경을 이루었던 시기이다.동물계에는 공룡류로 대표되는 파충류가 절정에 달하였고 바다에서는 암모나이트의번성이 극에 달하였으며, 벨렘나이트 및 산호류, 경골어류 역시 발전하였다.은행류와 같은 나자식물 (겉씨식물)이 크게 번성하였다. 중생대 말기에 공룡류와 암모나이트등 중생대를 대표하는 생물군이 일시에 멸종하는 대사건이 일어나는데, 그원인에 관해서는 지구환경의 한랭화, 식생의 변화, 운석 충돌에 따른 기후의 변화, 전염병설등의 가설이 제시되었지만, 지금도 지질학자들의 연구가 계속되고 있다.-공룡(Dinosaurs)중생대가 시작되면서 출현하여 1억 6천만년 동안 지상의 왕자로 군림했던 공룡은 중생대말에 전멸하였다. 공룡의 크기는 아주 다양하여 작은 것은 병아리 보다 작은 것도 있는가하면, 큰 것은 그 길이가 30m정도에 이르는 것이있었고, 그 형태도 극히 다양하며, 먹이의 종류도 윳식,초식 등 충류인 테코돈트에서 분화하기 시작하여 여러 종류의 공룡으로 진화 하였으며, 골반의 구조에 의해 용반목(파충류형)과 조반목(조류형)으로 분류된다.-암모나이트(Ammonite)고생대 데본기에서 중생대 백악기말까지 번성하였던 두족류로서 외벽은 딱딱한 껍질로 싸여있고 모양은 나선형이며, 봉합선을 지고 있다. 봉합선은 암모나이트의 진화의 정도를 파악할 수 있는 중요한 역할응 한다. 현재 화석으로 출토되는 암모나이트의 종류는 다양하며 황철석, 오팔, 규산 등으로 치환되어 매우 다양한 색깔을 띈다ⅳ신생대 (Cenozoic Era)신생대는 약6천6백만년 전 이후부터 인류의 역사가 시작된 약1만년 전까지 이며 가장 최근의 지질 시대로 그 생물은 현생 생물에 가까운 것들로 이루어져있다. 신생대에는 부족류, 복족류 등의 연채동물이 크게 번성하였고, 원생동물인 유공충과 포유류가 큰 발전을 보였다. 특히 대형유공충인 화페석은 제3기 초에 급속한 진화와 발전을 하다가 제 3기 중반에 멸종하였다 포유류는 처음에는 미미한 존재였으나, 곧 발전을 거듭하여 신생대 4기 에는 이를 대표하는 동물이 되었다. 신생대에 살았던 매머드와 말의 화석은 생물의 진화 연구에 중요하고, 영장류 사이에서 인류의 선조가 등장하여 인류시대를 맞이하였다. 식물계는 피자식물 (속씨식물) 이 주종을 이루면서 현재까지 번성하고 있다.-화폐석 (Nummulite)화폐석은 신생대 제3기에 번성하였던 유공충의 일종으로 신생대 제3기의 표준화석이다. 화폐석은 유공충들 중에서 대형유공충이며 껍질의 최대 직경은 약10cm에 달한다 납작항 동전모양으로 생겨서 라틴어로 작은동전(Small Coin)이란 뜻을 가진 Nummulites라고 불리워지게 되었다 내부구조는 수많은 격벽 (Septum)으로 나뉘워진 윤생체로 되어져 있으며, 각 격벽으로 싸인 격실(Chamber)들은 좁은 틈으로 서로 통하게 되어있다.-매머드매머드(mammoth)는 포유류 장비목에 속하는 멸종한 동물로, 크게 휜 엄니와 긴 털이 특징이다. 플라이스토세인 약 480.
    자연과학| 2009.10.24| 7페이지| 1,000원| 조회(2,891)
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  • Living fossil, 살아있는 화석
    Living fossilLiving fossil은 살아있는 생물 종 가운데 화석으로만 발견되는 종과 닮았으면서, 연관된 친척 종이 없는 것을 부르는 말이다. 대량 멸종 속에서 살아남은 생물로, 종의 다양성이 비교적 적다. 진화적 관점에서 진화속도에서의 정의로는 정적이고 느린 쪽 끝에 놓인다.다시 말하자면 살아있는 화석이란 수천만년 전에 살았다고 생각하는 화석화된 형태와 똑같은 모습으로 오늘날에도 살아있는 생물들을 말한다. 예로 실러캔스(진화론자들은 화석 실러캔스를 3억4000만년전 생물로 믿어왔다)를 포함하여 은행나무(Gingko trees, 1억2500만년), 악어(crocodiles, 1억4000만년), 투구게(horseshoe crabs, 2억년), 개맛(Lingula lamp shell, 4억5000만 년), Neopilina molluscs(5억년), 큰도마뱀(tuatara lizard, 2억년) 등이다.실러캔스이것은 진화론자들에게는 풀 수 없는 수수께끼인 것이다."왜 이 생물들은 수억 수천만년 동안 똑같은 형태를 유지하고 있는 것일까?"그들은 바퀴벌레(2억5000만 년 동안 살아남았다고 생각하고 있다)가 성공한 이유로 모든 곳에서 살아남았고, 번식력이 강했다는 것을 들고 있다.즉 먹이와 서식지에 까다롭지 않았고, 잘 적응할 수 있었다는 것이다. 그러나 많은 살아있는 화석들은 사실 매우 특별한 서식지를 필요로 한다. 예를 들어 실러캔스는 심해 동굴과 같은 흔하지 않는 장소에서 살아간다.New Scientist 에서 실러캔스가 변하지 않고 있는 것은 서식지가 변하지 않았기 때문이라고 설명하고 있다. 그러고 현재 살아있거나, 멸종된 다른 종들에게서도, 또한 이것은 적용된다.일부 진화론자들은 살아있는 화석에 있어서 극히 천천히 일어나는 진화는 한 세대의 기간이 길었기 때문(예를 들어 큰 도마뱀의 경우 적어도 15 년)이라고 생각한다. 그러나 이것은 빠르게 번식하면서도 변하지 않은 바퀴벌레(cockroaches)나, 원시박테리아(archebacteria)에서는 적용할 수 없다.Living fossil은 상당히 많은 예가 존재하는데 Limulus(검미목, 창게), Lingula(개맛), Sphenodon(뿔도마뱀) 뿐만 아니라 식물에서는 쇠뜨기, 솔잎란, 은행나무, 금송, 메타세콰이아, 윌레미 소나무, 고사리, 바다나리 등이 있고 동물에서는 유조동물 (Onychophora), 투구게 (Limulus polyphemus), 트리옵스 새우 (Triops cancriformis), 투아타라, 단공류 (오리너구리와 가시두더지), 라오스 바위쥐 (Laonastes aenigmamus), 실라칸스, 앵무조개, 상어,악어 등이 있다.이러한 미스테리적 living fossil의 실예를 자세히 보자.1. 부유성 유공충중생대로부터 신생대로 번영하여 다공질인 유리모양의 석회질 껍데기를 가진 유공충은 페름기에 출현한다. 중생대 쥐라기에 들어와 그때까지 모두 저생이었던 유공충 중 부유생활에 적응하고 있었다고 생각되는 것이 나타난다. 이들은 백악기 이후 신생대로 서식지역을 비약적으로 넓혀가게 된다. 신생대 제 3기는 화폐석(누물리테스)으로 대표될 수 있는 대형 유공충의 다채로운 분화시대라 할 수 있다. 제 4기 끝 무렵에는 가늘고 긴 방해석 결정으로 된 바늘 모양 체질 껍데기를 가진 유공충이 나타난다. 이와 같은 유공충의 진화사는 유공충 화석이 표준화석으로 사용될 경우의 이론적 기초가 된다. 후기 고생대의 푸줄리나류 고 제 3기의 대형 유공충류 등은 일찍부터 지층대비나 시대결정에 사용되어 왔다. 이들과 함께 표준화석으로서 중요한 역할을 한 것이 백악기 중기 이후의 부유성 유공충류이다. 표준화석으로서의 부유성 유공충은 시상화석으로서 중시된다. 유공충은 수온, 염분농도, 심도, 저질의 성질, 수소이온농도, 용존산소량, 해저지형 등의 영향을 받으며 서식하고 있다.2. 갈르와벌레갈르와벌레는 캠브리아 후기 유존동물로서 살아있는 화석곤충으로 불리고 있으며, 빙하기를 거치면서도 살아남은 생물이다. 이 곤충의 주요 서식처로는 북미 및 동아시아대륙 북반부이며, 고산성, 고산지대 수목대 한계, 설원표면, 빙하지대 늪부근, 전석지나 썩은 고목나무숲, 낙엽 밑 등에 서식하며 전 세계적으로 28종이 기재되어 있다.한반도에는 석회암 동굴에 적응한 남한의 고수갈르와벌레, 동대갈르와벌레, 비룡갈르와벌레, 오대산갈르와벌레(신칭) 등 4종과 북한지역의 묘향산갈르와벌레, 백두산갈르와벌레(중국발표) 2종등 총 6종이 보고 되었다.3. 투아타라투아타라는 도마뱀을 닮은 뉴질랜드 고유종으로 부리를 가진 유일한 파충류이다.투아타라는 2억 2000만년 전에 지구상에 나타나 ‘살아있는 화석’이라고도 불리는 파충류로, 다 자라면 몸길이가 80센티 정도 되며 평균 수명은 60년이다.이 파충류 과에 속하는 모든 종들은 6,500만년 전에 멸종했다.4. 은행나무겉씨식물 은행나무목의 한 과이고, 중생대 트라이아스기 말에 나타난 트리코피티스과와 함께 은행나무목을 이룬다. 부채꼴 모양의 잎은 가지 끝에 3∼5개가 어긋나거나 덥수룩하게 달려 마치 한 곳에서 자란 것처럼 보인다. 잎맥은 2개씩 되풀이해서 갈라지고, 가장자리의 아랫부분은 밋밋하지만 윗부분은 물결 모양을 하고 있거나 2개 또는 그 이상으로 갈라지며, 잎자루가 있다. 중생대 쥐라기 이후부터 현재까지 생존해 온 가장 오래된 식물의 하나인 은행나무는 12종이 있었다고 추측되고 있으나, 현재는 동아시아에 1종만이 남아 있다.5. 실러캔스실러캔스(coelacanth)는 알려진 것 가운데 가장 오래 전부터 있어 왔던 유악어류(턱이 있는 물고기)이다. 백악기에 멸종한 것으로 알려져 왔으나 1938년 남아프리카의 동해안의 칼룸나강 앞바다에서 마저리 래티머에 의해 살아있는 개체가 발견되었으며, 1952년 이후 아프리카 동해안의 코모로 제도에서 약 200마리가 포획되었다. 2006년 5월 30일 인도네시아 연안에서도 일본 후쿠시마 해양과학관 ‘아쿠아머린 후쿠시마’의 조사단의 수중촬영으로 살아있는 개체가 발견되었다.[1] 살아있는 화석’으로 불리며 길이는 1.8 m이다. 대한민국의 63빌딩 수족관에도 아프리카 코모로 공화국에서 기증받은 표본이 한 점 전시되어 있다.6. 앵무조개앵무조개는 연체동물문 앵무조개강에 속해있는 종들을 말한다. 2개의 속에 6가지 종이 있으며, 두 속은 많이 다른 점이 있다.앵무조개속에 속하는 종으로는 앵무조개(Nautilus pompilius), 알룸누스앵무조개(N. alumnus), 레페르투스앵무조개(N. repertus), 팔라우앵무조개(N. belauensis), 큰배꼽앵무조개(N. macromphalus), 넓은배꼽앵무조개(N. scrobiculatus) 등이 있다.기타 현존동물 중 오징어·문어·낙지가 비교적 먼 친족관계이며 과거 멸종된 생물인 암모나이트가 앵무조개와 가까운 종이다. 고생대 캄브리아기에 출현하였으며 멸종된 암모나이트와 같은 조상에서 진화하였다. 일부는 오르도비스기 말기에 멸종하였으나[1] 앵무조개는 살아남았다. 오랜 기간 동안 많이 변하지 않았으며, 앵무조개아강에서 생존해 있는 유일한 종들이다.7. 아나스피데스담수 새우(freshwater shrimp)인 아나스피데스(Anaspides)는 태즈매니아 섬의 300 m 이상의 높은 산 개울에서 산다. 이 생물은 Syncarids로 알려진 갑각류의 일종이다. 아나스피데스는 개울 바닥에서 바위에 붙어있는 조류(algae)들을 먹고 살며, 수면 위로 떨어지는 곤충들을 포획할 수도 있다. 곤충들을 포획하기 위해서 등을 돌려 공격한다. 이것과 거의 똑같은 동일한 생물체의 화석이 유럽과 북아메리카의 2억1천5백만년에서 3억5천만년 전 고생대 페름기와 석탄기 암석에서 발견되어진다.8. 폐어허파로 숨을 쉬는 물고기 폐어는 3억만년전(고생대 말기)에 출현한 고대어류로 아가미 호흡과 폐호흡을 함께 한다.
    자연과학| 2009.10.24| 5페이지| 1,000원| 조회(475)
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  • Aurora kinase
    Multiple functions of Aurora kinases in the regulation of mitosisCell cycleMain phenomenon of cell cycle -Chromosome condensation, aligment, segregation 관여된 주요 mitotic protein kinases -Cdks -Bora -Polo-like kinase(Plk) -Aurora kinaseJohn R. Rollard et al. (2009), Discorvery and Development of Aurora kinase Inhibitors as Anticancer Agents, J Med Chem, vol. 52, No. 9Aurora kinases- serine/threonine kinase - N-terminal : centrosome과 결합하는 domain - C-terminal : catalytic domain Significant sequence homology. But, localization and functions are largely distinct.Madhu Kollareddy et al(2008), Aurora kinases : structure, fuctions and their association with cancer, Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub, 152(1) : 27-33Aurora kinase A-Also known as Aurora-2/BTAK cancer에서는 Arora A가 overexpression → 최근cancer target으로 연구됨.Richard D. Carvajal et al(2006), Aurora kinases: New Targets for Cancer Therapy, Vol 34, Issue 2, p 175-182Aurora kinase A ; PrincipleMitotic entry-Phosphorylate Cdc25 (cell division cycle 25 homologue B), direct regulator of the cyclin B1-Cdk1 complex -Bora가 Plk1과 직접적으로 결합함으로 Aurora kinase A가 Plk1의 Thr210을 phosphorylation → Mitotic enterSpindle formation①Condensation된 chromosome이 Ran-GTP를 Importin α,β-TPX2 complex에 binding. ②TPX2 release. (TPX2 : microtubule-associated protein) ③Aurora A에 붙어 있는 PP1γ를 떼어냄. ④Aurora A는 autophosphorylation and activation ⑤TPX2를 phosphorylation하고 binding하여 PP1 결합을 억제 ⑥Recruit spindle assembly factors(Eg5) and formation of the bipolar spindle.Richard D. Carvajal et al(2006), Aurora kinases: New Targets for Cancer Therapy, Vol 34, Issue 2, p 175-182Aurora kinase A ; Principle이후 조절 -ExTAH(Eg5, XMAP2154, TPX2, Aurora A, HURP) 같은 microtubule binding, cross-linking, kinesin moter activity를 가지는 인자를 regulation.If, depletion of Aurora A, delayed entry into mitosis, defects in chromosome segregation, lead to anueploidyApoptosisAurora kinase BAlso known as Aurora-1Richard D. Carvajal et al(2006), Aurora kinases: New Targets for Cancer Therapy, Vol 34, Issue 2, p 175-182Aurora kinase B ; PrincipleMitotic entryHistone H3를 phosphorylation시켜 chromosome condensation과 함께 mitotic enterChromosome biorientationRepair incorrect microtubule-kinetochore attachment. ①If, merotelic or Syntelic attachment occurs, senses the lack of tension, severs microtubule- kinetochore attachment. ②Recuting check point protein (Bubk1, Mad2), and maintaing inhibition of APC/cyclosome. ③After repair, check point disassembled and APC activated.Richard D. Carvajal et al(2006), Aurora kinases: New Targets for Cancer Therapy, Vol 34, Issue 2, p 175-182Comparative localization of Aurora A,BAurora A(Green) Aurora B(Red)Madhu Kollareddy et al(2008), Aurora kinases : structure, fuctions and their association with cancer, Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub, 152(1) : 27-33Prophase Metaphase TelophaseAurora kinase CIt is uncleareLocalization : Colocalizes with Aurora BFunction : Spermatogenesis and regulation of cilia and flagellaReference1. Richard D. Carvajal et al(2006), Aurora kinases: New Targets for Cancer Therapy, 34(2), 175-182 2. John R. Rollard et al. (2009), Discorvery and Development of Aurora kinase Inhibitors as Anticancer Agents, J Med Chem, 52(9) 3.Giannis Mountzios et al(2008), Aurora kinases as targets for cancer therapy, Cancer teratment Reviews, 34, 175-182 4. Chun-Ting Chen et al(2009), A Last-Minute Rescue of Trapped Chromatin, Cell 136(3) : 397-9 5. Zhong-Zhe Lin et al(2009), The Aurora kinase inhibitor VE-465 has anticancer effects in pre-clinical studies of human hepatocellular carcinoma, Journal of Hepatology 50, 518-527 6. Oliver Gautshi et al(2008), Aurora kinases as Anticancer Drug Targets, Clin Cancer Res, 14(6) : 1639-1648 7. Dale O. Cowley et al(2009), Aurora-A kinases Is Essential for Bipolar Spindle Formation and Early Development, Mol Cell Biol. 29(4):1059-71 8. Altaf A. Dar et al(2008), Aurora kinases A Inhibition Leads to p73-Dependent Apoptosis in p53-Deficient Cancer Cells, Cancer Res; 68(21) 9. Jingyan Fu et al(2009), A single amino acid change converts Aurora-A into Aurora-B-like kinase in terms of partner specificity and cellular function, PNAS, 106(17) : 6939-6944 10. Teresa Sardon et al(2008), Dissecting the role of Aurora A during spindle assembly, The EMBO Journal. 27 : 2567-2579 11. Madhu Kollareddy et al(2008), Aurora kinases : structure, fuctions and their association with cancer, Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub, 152(1) : 27-33Thank you!{nameOfApplication=Show}
    자연과학| 2009.10.24| 12페이지| 1,500원| 조회(555)
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  • PCR 및 gene cloning의 전반적인 내용 요약
    Chapter 6. Genomics▶PCR : polymerase chain reaction이론으로는 한 molecule만 있으면 엄청난 DNA를 짧은 시간 안에 만들 수 있는 기술▶PCR의 특징?특정 DNA 조각을 증폭시킬 수 있음.?DNA cloning 대신으로 사용 가능함.?실험과정이 빠르고 간편하며 돈이 많이 들지 않음.?다양한 곳에 적용가능함.(RT-PCR,, LCR...)▶PCR 원리?1. Denaturation : dsDNA를 분리하는 과정으로 일반적으로 90℃까지 열을 가하면 손상없이 두 가닥의 single strand로 풀어짐.?2. Annealing : Single strand로 풀어진 templates가 각각의 상보적인 sequence를 찾아서 binding하는 과정. 보통 40~60℃정도이며 PCR의 최종적인 sensitivity와 specificity를 결정하는 가장 중요한 과정이므로 정확한 온도를 결정해야함.PCR primer는 보통 15~30bp의 oligonucleotide. 이것이 template DNA에 붙으려면 온도의 결정이 중요하다.-온도가 중요한 이유 : 온도가 낮을 경우 annealing이 잘 일어나지만(primer가 template에 잘 붙지만), target sequence 위치에 붙지 못해 false sequence가 나타날 확률이 높아져 정확도가 떨어지고, 온도가 높을 경우 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어짐.-온도에 영향을 미치는 요인 : primer length, primer GC content, pH, salt concentration 등?3. Extension : PCR에 넣어준 특정 polymerase(일반적으로 Taq pholymerase)가 primer의 3`-OH를 시작점으로 하여 Single strand template의 상보적인 dNTP를 붙여 나가며 새로운 상보가닥을 만들어내는 과정. 신장반응에 필요한 시간은 주형 DNA 농도, 증폭단편의 크기, 반응온도에end 끝이 최대 2개의 연속적인 G 또는 C로 끝나게 함. (3개 이상일 경우 비특이적 false sequence가 생산될 가능성이 많으므로...)요즘은 oligo, generunner, genefiser 등의 인터넷사이트에서 template sequence를 알기만 하면 primer length, product size, GC content 등의 많은 요소를 쉽게 알 수 있음.목적에 따라 primer 제작에서 5`쪽에 추가적으로 template DNA와 상관없는 몇 개의 sequence(Cloning을 목적으로 하는 경우 restriction site sequence)를 넣기도 함.▶random primer일정한 길이의 primer를 random하게 여러개 제작한 primer로써 RAPD(rapid amplification of polymorphic DNA) 등에 사용할 수 있음. RAPD란 개인마다 primer binding sequence의 차이가 있음을 이용하여 random primer로 PCR을 증폭시켜 전기영동을 통해 유전자 차이를 알 수 있게 하는 기술.▶PCR template.?template는 어떤 DNA의 하나의 double strand molecule을 가르킴.?RNA 같은 경우 PCR template으로 적당하지 않기 때문에 이를 DNA로 바꾸어 준 후 PCR을 하는 RT-PCR(reverse transriptase PCR)을 사용한다.?RT-PCR을 통해 증폭된 mRNA의 cDNA는 세포의 gene expression을 구별하기 위해 사용되며, 이를 통해 잠재성 바이러스(PCR을 통해 탐지)와 활동성 바이러스(RT-PCR을 통해 탐지)를 구별할 수 있다.▶PCR의 적용.?LCR(ligase chain reaction)(설명안하시고 그냥 넘어 가신 듯 함) : PCR과 비슷하지만 이것은 열에 안정한 DNA ligase사용하고, 또한 두 개의 primer를 제작한다는 차이가 있음. Single point mutation을 알아내기 적합한 나와 형광을 방출하게 되는데 이러한 형광을 탐지하여 이를 정량화 할 수 있다.-Real time PCR : dNTP에 형광을 붙여 PCR과정을 razer로 탐지 가능하게 하여 정량적 표현을 가능하게 함.Chapter 7. DNA-Based Information Technologies.Reductionism VS Per-se-ism.▶Reductionism : 환원주의. 생물현상을 물리학 및 화학 이론이나 법칙에 의해 해명이 가능하다는 입장. 즉, 생물을 쪼개어 복잡한 형상의 원인을 보다 단순한 현상에서 구하는 것으로 복잡한 구조와 속성이 부분을 통해서 설명될 수 있다는 것이다. 이를 통해 생체분자의 현상(enzyme catalysis, macromolecular structure, cellular metabolism 등)을 규명할 수 있었고 생물의 독립적 기능단위인 세포를 발견하게 하였다.▶Per-se-ism : 생체분자 하나 하나를 보는 것이 아니라 그 전체를 조합하여 생명현상을 규명하는 입장. 개체 자체를 이해한다는 것.(genome, proteome, trasncriptome, metabolome 등등이 이에 속함)컴퓨터의 발달과 부속적 technique의 발달로 이전에 불가능했던 Per-se-ism이 현재 가능하게 되었음.▶DNA cloning큰 염색체로부터 특정한 유전자나 DNA 조각을 분리하여 작은 vector의 DNA에 붙여 그것을 세포에 넣은 후, 세포를 증식하여 각 세포 내에서 cloning DNA의 수를 증가시키는 방법.genomics와 proteomics 발달에 큰 영향을 미침.▶DNA cloning 방법-1~2.Restriction endonuclease(restriction enzyme)를 이용하여 정확한 위치에서 vector DNA와 관심있는 gene부위를 절단. Vector는 일반적으로 plasmid 또는 virus DNA임.-3. DNA ligase를 이용하여 제한효소를 처리한 vector와 관심있는 gene을 ligation하여 aline phosphatase5' 또는 3‘ 말단(또는 둘다)의 인산을 제거한다.재조합 DNA 기술에 이용되는 효소▶Restriction endonuclease(제한효소)의 종류이들의 다양하며 이들은 두가지 end를 만들어 내는데 두 개의 DNA 가닥에서 같은 위치를 인식하여 잘라 절단 면을 형성하여 blunt end를 형성하는 것과 DNA 가닥의 다른 위치를 인식하여 잘라 한 부위가 튀어나온 sticky end가 있다.서로 sticky end를 가진 DNA fragment들은 연결 반응을 매우 빠르게 진행시키지만 서로 다른 제한효소로 처리한 가닥끼리는 연결되지 않는다. 반면 blunt end를 가진 DNA fragment는 sticky end보다 낮은 효율로 결합하지만 blunt end를 만드는 여러 다른 제한효소로 잘린 가닥과도 연결될 수 있다. 이런 제한효소로 잘린 vector에 삽입되는 몇 종류의 제한효소자리를 가지는 DNA fragment를 linker라고 부른다. 또한 DNA fragment에 여러 자리의 제한효소자리를 가지는 것을 polylinker라고 한다. 이 부위에는 제한효소로 처리하여 추가적인 DNA fragment를 집어 넣을 수 있다.▶Plasmid(vector라고도 할 수 있음. vector란 cell에 gene를 넣기 위한 도구이기 때문임)plasmid는 host chromosome과는 별개로 자가 복제될 수 있는 작은 circular DNA임.transformation과정을 거쳐 세균 세포 내로 도입가능함.약한 열을 가하여 세포벽을 얇게 하는 heat shock과 전기충격을 주어 세포벽에 작은 구멍을 내는 electorphoration을 통해 세포 내로 도입이 가능함.plasmid가 세포 내로 들어간 것을 확인하기 위해서는 plasmid 내에 selectable maker라는 항생제 저항성이나 필수 아미노산을 만들어내는 gene이 필요함.대표적인 예) pBR322, bacteriophage, BAC, YAC?pBR3221. 복제가을 비교해 tetracycline+ampicillin이 있는 배지에서 죽은 colony가 recombinant DNA를 가지고 있음을 알 수 있다.?bacteriophage vector다소 큰 DNA 조각을 cloning하기위한 vector로 사용됨.1. λ 유전체의 약 1/3이 비필수 gene으로 이곳에 관심있는 유전자를 삽입할 수 있음.2. DNA가 일정 크기 이상에만 bacteriophage로 package될 수 있으므로 잘리기만 하고 재조합 DNA가 들어가지 않거나 재조합 DNA만 transformation되는 경우를 selection할 수 있음.Pakaging을 통해 원하는 recombinant DNA가 bateriophage에 있어 bateriophage를 구분해 원하는 gene을 얻을 수 있다.?BAC(bacterial Artificial Chromosome)-BAC는 긴 DNA 조각(about 300kb)을 cloning 하기 위해 고안된 plasmid.-CmR(Chloramphenicol 저항성)과 같은 selectable maker를 가지고 있고 매우 안정한 ori(복제기점, 1~2 copy만 항상 생성)을 가지고 있음.-transformation할 때 electrophoresis(전기천공법)을 사용하여 host cell에 도입됨.-BAC의 lacZ부위를 잘라서 cloning 할 경우 선별은 Cm+ X-gal이 들어간 배지에서 하면 되는데 BAC가 들어간 cell은 Cm이 있는 배지에서 자랄 수 있으며 또한 원하는 gene이 들어간 cell은 그 중에서 흰색을 띠게 될 것이다. (lacZ는 beta-galactosidase를 생성하는데 이는 X-gal을 분해하여 파랑색을 표지함으로 cloning된 BAC는 lacZ부위가 끊어져 beta-galactosidase를 생성하지 못함으로 흰색을 나타냄)(?공부안해도 상관없을 것 같음)?YAC(Yeast artificial Chromosome)큰 genome을 다루는 작업과 높은 수용력을 가진 clon.
    자연과학| 2009.05.31| 8페이지| 1,500원| 조회(1,576)
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