Purification of Thermostable DNA Polymerase

소개

이제야 올리네요.
시간이 조금 지난 보고서라 매우 유용하게 사용될 것입니다.
생화학 보고서로 A+ 이었고 discussion부분 특히 잘 참고하시고
그대로 쓰지 마시고 조금씩 바꿔서 자기의 생각을 써주심 더 좋겠죠?!^^
그럼 좋은 보고서 점수 받으세요.

목차

1. Title
2. Date
3. 실험자
4. Theory
5. 실험과정 및 준비물
6.Result
7. Discussion
8. Further study

본문내용

(2) Taq polymerase
- Taq DNA polymerase는 thermostable한 효소로서, 74 ℃ 에서, DNA복제가 이루어지며, 95℃에서, 40분의 half-life를 지닌다.
- Taq은, magnesium의 존재 하에서, 5‘->3’ 방향의 DNA polymerization을 촉매한다.
-molecular weight : 94,000 daltons
5`->3` exonuclease activity 지님.
-최적의 반응 조건 : 1.4 mM MgCl2, 50~55mM KCl (PH 7.8~9)

7. Discussion
이번 실험은 PCR을 위한, thermostable한 DNA polymerase를 얻기위해, cell을 lysis 한 후 ion-exchange column을 이용하여, taq polymerase를 정제하는 실험이었다. 그러면, 조교님께서 미리 준비해 놓은 실험과정부터 살펴보도록 하자.
먼저, seed culture를 위해, LA media에 single colony를 접종하는데, LA media는 bacteria의 영양분이 될, LB와 selectable marker로 사용될 ampicillin이 포함되어 있다. 이 때 주의해야 할 것은 O.D 600nm ~0.5가 될 때까지 배양하는데, O.D 600nm값이 0.5를 넘지 않도록 주의 해야 한다. 0.5이상이 되면, 성장이 거의 끝났음을 의미하므로, 이전에 한창 cell이 자라고 있을 때에 배양을 멈춰서, 후에 protein expression이 활발히 진행될 수 있도록 한다. 다음으로, IPTG를 첨가하여, taq polymerase를 over expression 시킨다. IPTG는 lactose의 analog로서 lac operon의 inducer 역할을 하므로, repressor에 binding, DNA에서 repressor가 떨어지게 만든다. 이 때 lac operon에 taq polymerase를 발현하는 gene을 넣어두면, IPTG가 계속적으로 repressor과 binding 상태로 되어, taq polymerase

참고자료

· 1) 한국생화학회 (1999) 실험생화학, 탐구당, 서울
· 2) 생화학실험(1) 전반기 (2004)
· 3) Biochemistry, Stryer 외, Freeman