gene cloning기초실험 - DNA prep과 PCR

소개

직접 실험을 했던 실험리포트입니다.
분자생물학의 기본이 되는 gene cloning에서 목적하는 유전자를 찾고, 얻는 과정으로,
plsmid DNA를 분리하는 DNA prep과정과 정량, PCR에 관한 실험입니다.

목차

(실험)
◎ introduction
◎ 실험목적

◈ Prep
- plasmid DNA분리
◎ 실험 재료와 방법

◈ DNA 정량
◎ METHOD

◈ PCR
- DNA 증폭
◎ PCR의 증폭 과정

◎ RESULT
◎ Discussion

본문내용

◎ introduction
분자 생물학의 기초인 gene cloning과정, 즉 우리가 원하는 유전자를 찾고 그 유전자를 얻어야 한다. 그 목적 유전자를 어떤 유전자에서 찾을 것인가, 또 어떤 방법을 통해 얻을 것인가 하는 것을 이번 실험을 통해 살펴보았다. 우리는 DNA prep을 통해서 찾고자하는 plasmid DNA을 분리하고 정량하였다. 그리고 Polymerase chain reaction(PCR, 중합효소 연쇄반응) 과정을 통해서 DNA prep으로 얻은 plasmid DNA, 즉 이미 염기서열을 일부 알고 있는 유전자를 증폭해서 목적하는 유전자를 얻을 수 있었다.

이번 실험에서는 주로 miniprep이라고 부르는 방법인 plasmid DNA를 소량 분리하고 PCR을 통해서 gene cloning의 가장 보편적인 방법을 알아보았다.


◎ 실험목적
DNA prep과 PCR을 통해 분자 생물학의 기초인 gene cloning을 알아보자.

◈ Prep
◎ 실험 재료와 방법

* Prep : insert(pUC-SOD), Vector(pGBKT7)
-DNA중에 chromosome DNA와 plasmid DNA을 분리, 자가 복제할 수 있는 plasmid DNA을 뽑아내는 준비단계.

▶harvesting : 1.5㎖ c.f.g at 12,000rpm(2min, 4℃)

▶solⅠ 200㎕ ---> vortexing
※solution Ⅰ-EDTA는 세포벽을 군데군데 무너뜨리고 glucose는 삼투압을 유지한다.

▶solⅡ 150㎕ ---> inverting
※solution Ⅱ -SDS는 세포막을 깬다, NAOH는 DNA를 denatunation시킨다.

▶solⅢ 100㎕ ---> inverting
※solution Ⅲ -renatnation시키는 산성용액이다. 이렇케 chromosome DNA는 SDS와 potassium과 함께 엉키게 되는 것이다.
※강하게 흔들어 버리면 chromosome DNA가 잘게 부숴져 plasmid DNA와 구분이 되지 않으므로 inverting을 한다.

참고자료

· 없음