[분자생물학] 분자생물학 Gene Cloning-DNA recombination 실험 리포트

목차

1. Title
2. Propose
3. Introduction
4. Material&Method
5. Result
6. Discussion

본문내용

이번 한 학기 동안 수행한 실험의 궁극적인 목적은 형광을 띄지 않는 E.coli를 유전자 조작을 통해 형광을 띄게 하고 단일 cloning을 얻는 것이다. 가장 먼저 수행한 실험은 plasmid DNA를 isolation하여 실험에 사용할 gene을 얻어내는 것으로서 pRSET과 pGFP가 사용되었다. pRSET의 경우는 vector로서 쓰였고 pGFP의 경우는 GFP gene을 사용하기위해 사용되었다.
우선 각각의 plasmid DNA를 isolation 한 결과, <figure.1>에서와 같이 lane 1~8)에서 3.3kb의 pGFP가 확인되었고, lane 9~16)에서 2.9kb의 pRET이 확인 되었다. 이렇게 뽑은 DNA를 restriction enzyme을 사용하여 enzyme cutting 하였다. pRSET에 GFP gene을 insertion하기 위한 것이다.
pGFP의 5‘ MCS와 3’MCS사이가 GFP gene으로서 형광을 띠게 하는 물질을 coding하는 gene이다.약 800bp 정도의 size이다. 그리고 vector로 사용될 pRSET의 size는 enzyme cutting후 약 2.500bp일 것이다.
공통된 restriction site를 사용하여 cutting하였는데, pRSET과 pGFP 두가지 모두 EcoRⅠ,BamHⅠ이 존재함을 확인하고 실험을 수행하였다. enzyme cutting은 Isolation DNA plasmid에 EcoR, BamHl 과 10X buffer를 넣어준 후, 2시간동안 incubation하였다.
enzyme cutting 후 정확히 cuuting 됐음을 확인했고, 원하는 band를 elution하기 위해 elution하기 위해 elution gel 이라는 보통 gel running하는 것보다 많은 양을 할 수 있는 gel을 만들어 electrophorsis를 수행하였다.

참고 자료

없음