[생화학]생화학실험- enzyme kinetics

소개

생화학실험- enzyme kinetics 실험입니다.

Tyrosinase와 β-galactosidase를 이용하여 각각의 기질과의 효소반응을 spectrophotometer를 이용해 흡광도를 알아보고 Km값과 Vmax 값을 여러 plot을 통해 구한다.

목차

Purpose
Principle
Materials
Methods
Result
Discussion
Reference

본문내용

Purpose

Tyrosinase와 β-galactosidase를 이용하여 각각의 기질과의 효소반응을 spectrophotometer를 이용해 흡광도를 알아보고 Km값과 Vmax 값을 여러 plot을 통해 구한다.


Principle

효소에 의해서 대단히 빠른 속도로 반응이 진행되는 것을 결합에너지로 설명할 수 있다. 결합에너지는 촉매반응에 에너지를 공급할 뿐만 아니라 반응 특이성(specificity)의 확보에도 관계하고 있다. 일반적으로 특이성이란, 효소와 기질분자의 많은 부분, 또는 구조의 거의 모든 부분과의 사이에서 많은 약한 결합이 형성되어 생기는 것이다.
기질 농도가 충분할 때에는 효소농도를 증가시키면 반응속도도 그에 따라 증가한다.(그림1 참조)
단순한 효소반응에서 효소농도가 일정할 때 기질농도를 증가시키면 반응속도가 점차 증가하지만 기질농도가 일정농도를 넘으면 효소의 활성중심은 기질로 포화되어 반응속도는 일정하게 된다.(그림2 참조)
<그림2>
* Km은 Michaelis 상수로 효소와
기질의 친화성을 나타낸다.
이러한 효소반응과정의 특성을 설명하기 위하여 Leonor Michaelis와 Maud Menten은 다음과 같은 모델을 제안하였다.
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효소 E는 속도상수 k1으로 S와 결합하여 ES 복합체를 형성한다. ES 복합체는 속도상수 k2로써 E와 S로 해리할 수도 있고 속도상수 k3로써 생성물 P를 만드는 반응으로 진행할 수 있다. 생성물은 전혀 초기상태의 기질로 되돌아가지 않는다고 가정하면 반응속도 V는 ES
복합체의 농도와 k3의 곱에 비례한다.

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참고자료

· 1. 생화학 (2002) James K. Mckee. 박익국 역. Life science. chap.6.3
· 2. Lehninger 외,박인원 옮김 생화학 3th, 서울; 외국서적,2001.