Northern Blot

소개

Northern Blot 의 모든 것 총정리

이것 하나면 원서보다 좋은 자료 정리 가능

목차

Northern Blot의 목적

Northern Blot의 원리

Northern Blot의 방법

여기다 자세한것을 모두 기록하기는 힘드네요..

본문내용

1. 목적
RNA의 정성, 정량을 행하기 위해서 이용된다. 이 방법에 의해 RNA의 크기나 발현 량의 정보가 얻어져 mRNA의 발현이 어느정도 행하여져 있는가를 알 수 있다.

2. 원리
Northern blot이란 전기영동을 이용하여 크기별로 분리된 RNA 중 원하는 것을 찾아내는 방법이다.
RNA를 denaturing agarose gel 상에서 전기영동하여 그 분자량의 크기에 따라 전개시킨 다음 활성화된 Nylon 또는 Nitrocellulose에 옮긴다. 분석하고자 하는 RNA는 방사선 동위원소로 표식된 특정 DNA 혹은 RNA와 hybridization된 후 자가 방사법(autoradiography)을 시행함으로써 그 양과 위치, 크기를 결정할 수 있다.
전기영동으로 RNA를 분리하는 방법은 denaturing agent에 따라 Glyoxal / DMSO(Dimethyl sulfoxide) 방법(McMaster & Carmichael, 1977)과 formaldehyde 방법(Rave et al, 1979)으로 나눌 수 있다. 각각의 장단점은 있지만, 여기서는 formaldehyde에 의한 것을 설명하였다. Transfer하는데 이용되는 membrane중 Nitrocellulose membrane은 RNA와 nonconvalent하게 결합하지만 불가역적인(irreversible) 결합을 함으로써 hybridization 때 달라 붙어있는 핵산의 의미있는 소실이 없는 장점이 있는 반면, 두 차례이상의 hybridization과 washing에는 견디지 못하는 단점이 있다. 그러나, Nylon membrane은 이러한 NC membrane의 단점을 극복하여 수 차례에 걸친 hybridization에 견딜 수는 있으나, background hybridization이 더 많다는 단점이 있다. 따라서 prehybridization과 hybridization 과정 중에 blocking agents의 양을 증가시킴으로써 문제를 해결할 수 있다. 본 실험에서는 Nylon membrane을 사용한 경우를 나타내었다.
또한 Transfer하는 방법에 따라 모세관 현상을 이용한 Capillary Transfer, Vacuum을 이용한 Vacuum Transfer, 전기를 이용한 Electroblotting이 있으나, 여기서는 경제적인 Capillary Transfer에 대해 설명하였다. hybridization을 위한 probe의 방사선 동위원소는 반감기가 짧은 32P (14.3일)를 이용하였다.

참고자료

· 없음