혈액의 채혈을 통한 혈구 수 계수

소개

면역학 실습시간에 쓴 보고서입니다..

목차

6. 준비물
7. 방 법
8. 결 과
9. 고 찰
1. 채혈의 종류 및 특성
2. 혈액의 구성 (Composition of Blood)
3. lymphocyte의 분리 방법 (Ficoll 이용)
4. 항응고제 (anticoagulants)의 종류 및 특성

본문내용

4. 제 목혈액의 채혈을 통한 혈구 수 계수5. 목 적채혈의 방법을 이해하고, 혈액을 희석하여 mL당 혈구 수를 계산해 낼 수 있다.6. 준비물소독용 기구 (70% 알코올, 마른거즈 혹은 솜), tip, pipet, heparin-coated blood tube, syringe, tray, 15 ml tube, centrifuger7. 방 법1) 남·여 총 4명을 선정하여, 정맥 채혈법을 통해 10mL을 채혈한다. 상완을 압박대로 묶어 정맥 환류를 막기에 충분한 정도의 압박을 가하여 출현된 혈맥을 주로 팔꿈치 안쪽의 정맥으로부터 채혈한다.
2) 채집된 혈액은 응고를 막기 위해 heparin-coated blood tube에 넣어 둔다.
3) 2)의 혈액을 2000rpm 이하에서는 30분, 3000rpm에서는 10분 동안 centrifuge한다.
4) centrifuged tube의 buffy coat만을 추출해낸다.
5) 4)에 PBS를 넣고 섞어 준 다음, 다시 1500rpm으로 1분정도 centrifuge 한다.
6) 상층액을 덜어내고 다시 PBS를 넣은 다음, 5)의 과정을 한다.
7) 6)의 과정을 여러번 반복한다.
8) 남은 pellet을 PBS로 100 배 희석한 후, cell을 계수한다. 8. 결 과 시약이 부족한 관계로 적혈구를 파괴시키지 못하였으므로 당초에 계획하였던 lymphocytes만을 계수하지 못하였고, 모든 혈구의 수를 세었다.
Cell couting 결과, 우리 조(혈액 공여자 : 김선욱, 남)는
214, 178, 216, 235, 181의 cell이 counting 되었으므로, 1mL 안의 총 혈구의 수는 (214+178+216+235+181)X100X5/(0.1X0.1X0.01) = 5.12X109 (cells/mL)
다른 조의 결과를 보면 (혈액 공여자 : 김유정, 여),
(81+123+97+113)X100X(25/4)/(0.1X0.1X0.01) = 2.587X109 (cells/mL)

참고자료

· http://www.hallym.or.kr/~kdcp/education/student/Hema2003.hwp
· http://labmed.hallym.ac.kr/education/Blood-preparation.ppt
· http://blog.naver.com/rezielf?Redirect=Log&logNo
· =120001923053
· http://www.bmi-korea.com/download/manual/lymphocyte%20preparation.pdf