인간 혈액으로부터 말초혈액단핵세포 (PBMC) 분석

소개글

PBMC안에는 B cell, T cell, macrophage, dendritic cell, NK cell(natural killer cell)등의 면역세포들이 포함되어 있다. 또한 PBMC는 인간 및 여러 동물군의 면역 실험에 많이 이용되고 있는 세포군 이다. PBMC에 있는 여러 세포들의 표면에는 CD 분자들이 있으며, 이 분자들을 통해 세포군 들을 나누고 측정하여 변화 정도를 확인한다. 이러한 변화 측정에는 flow cytometry라는 세포분석 기계를 사용한다.

목차

1. 실험목적
2. 실험과정

⑴ Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) isolation from human adult blood
⑵ Surface staining

3. 실험 결과
4. 실험고찰 (discussion)
Flow cytometry (유체 세포 측정법)
Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC)

본문내용

PBMC안에는 B cell, T cell, macrophage, dendritic cell, NK cell(natural killer cell)등의 면역세포들이 포함되어 있다. 또한 PBMC는 인간 및 여러 동물군의 면역 실험에 많이 이용되고 있는 세포군 이다. PBMC에 있는 여러 세포들의 표면에는 CD 분자들이 있으며, 이 분자들을 통해 세포군 들을 나누고 측정하여 변화 정도를 확인한다. 이러한 변화 측정에는 flow cytometry라는 세포분석 기계를 사용한다.
따라서 본 실험은 혈액의 구성 중 하나인 PBMC만을 혈액으로부터 분리해 내고, 분리 된PBMC 속 면역세포들의 구성과 변화를 살펴보는 것을 목적으로 한다.

2. 실험과정

⑴ Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) isolation from human adult blood
① Ficoll 용액을 50ml tube에 준비
② PBS와 Blood(혈구세포만 농축된 상태)를 1:1로 섞은 후 흔들어서 mixing 해준다.
③ ②번의 mixture를 ①번의 tube에 넣는다. (20ml mixture(blood)/ficoll tube)
④ centrifuge 1400rpm, 25min, 25℃
⑤ 새로운 50ml tube를 준비하고 buffycoat(the layer of PBMC)를 모은다.
⑥ PBS로 washing하기 위해 약하게 잘 섞어준다.
⑦ Centrifuge(2000rpm, 3min) 하여 cell down시키고, 상층액을 제거한다.

참고 자료

1. Sabine Cepok, Marc Jacobsen, Sabine Schock, Bilal Omer, Steffi Jaekel, Inke Boddeker, Wolfgang H. Oertel, Norbert Sommer and Bernhard Hemmer, Patterns of cerebrospinal fluid pathology correlate with disease progression in multiple sclerosis., Brain, Vol. 124, No. 11, 2169-2176, November 2001.
2. 병태생리학., 박지원, 유지수. 김정화 저. 군자출판사. 2004