단백질정량 (Bradford) 실험보고서

소개

단백질정량(Bradford assay) 실험보고서 입니다.

목차

1. 단백질이란?
2. 단백질 정량 실험의 종류
뷰렛 시험 (biuret test)설명
Lowry 시험(Folin-Ciocalteau )설명
분광학적 정량법 (UV-vis Spectrophotometry)설명
Bradford법에 의한 단백질 정량 설명
3. 실험재료
4. 실험방법
5. 실험 결과
6. Standard Curve작성
7. 실험고찰

본문내용

2. 단백질 정량 실험의 종류

Bradford법에 의한 단백질 정량

산성용액에서 Coomassie brilliant blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도(λmax)는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 따라서 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 이 방법은 발색반응 2분 이내에 완결되며, 1시간까지 유지된다.
Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량 정량법을 사용하면 1~20μg의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다.

4. 실험방법

① Bradford reagent를 1:5의 비율로 증류수에 희석한다 (working solution).
(10ml 용액을 만드는 경우 2ml Bradford reagent와 8ml 증류수를 섞어준다)
② BSA standard를 준비 한다. (1mg, 2mg, 4mg, 6mg, 8mg, 10mg)
③ 1ml Bradford reagent working solution에 BSA standard를 넣어주고 5분간 상온에
방치한 후 spectrophotometer를 이용하여 595nm에서 흡광도를 측정한다.
④ Spectophotometer를 이용하여 각각의 sample을 흡광도를 확인하여 standard curve를 작성해 본다.
⑤ 시료단백질을 같은 방법으로 처리하여 step4에서 얻은 standard curve로부터 단백질량을 도출한다.

참고자료

· 없음