X-ray crystallography 실험

소개

서울대 생명과학실험3 레폿입니다.

목차

I. Introduction
II. Result
‣ mother liquor의 성분 및 screening
‣ single crystal의 확인
III. Discussion
‣ Model building의 과정

본문내용

I. Introduction
‣ Unit Cell
unit cell은 crystal의 basic building block을 말한다. (Fig-1)
다시 말해 동일한 단백질의 집합에서 기본이 되는 입자체를
의미한다. unit cell의 성상은 dimension (그림에서 a, b, c)와
기준점으로부터 각 plane으로의 angle (그림에서 )로
표현할 수 있다.

II. Result
‣ mother liquor의 성분 및 screening
single crystal이 만들어 지는 조건을 알지 못하는 protein에 대해 X-ray crystallogra phy 실험을 할 때 우리가 사용한 방법은 hanging drop method 였다.
약술하면, well plate에 mother liquor를 넣고 (실제로는 다양한 성분비의 mother liquor를 준비해야 한다.) cover glass에 hanging drop의 방법으로 거꾸로 매달아서 덮 은 다음 silicon(또는 바세린)으로 밀폐시키는 과정을 진행한다. 이는 poly crystal powder가 만들어지지 않게 하기 위한 방법이다.
최적의 성분비를 가지는 mother liquor가 포함된 well에서 well의 buffer와 droplet의 1:1 (protein : buffer) solution 사시에 dynamic equilibrium state가 형성되면, single crystal을 확인할 수 있게 된다.
실험실에서 adequate mother liquor의 성분비를 찾으려면 screening이라는 과정이 필 요하다. screening은 아주 다양한 성분비의 buffer solution에 protein을 위 실험 과정과 같이 첨가하고 well plate에 (Fig-2와 같은 방법으로) set-up하고 이틀 이상 지나면 Fig-3와 같이 다양한 형태가 나오게 되는데 그 중 완벽한 single crystal을 찾아서 mother liquor의 standard solution을 확인할 수 있게 된다.
우리가 실험한 protein X의 mother liquor 는 single crystal condition으로 다음 장의 표와 같은 성분비를 보였다.

참고자료

· 없음