원하는 유전자 클로닝

소개

원하는 유전자 찾아서 클로닝하는 실험 전과정과 이론적 설명

목차

♦실험의 목적
1. Legumin이란?
2. 식물체에서 DNA추출
- 방법 -

본문내용

1단계- DNA를 추출하고자 하는 sample을 준비한다.(참깨사용)
채집된 sample은 잘게 잘라야한다. 이것은 표면적을 넓혀 반응이 잘 일어나게 한다.
자른 샘플은 완충용액에 넣어둔다.

·2단계 - 세포 및 조직의 파괴
핵안의 DNA추출을 위해 세포막 및 핵막을 제거하여 DNA를 방출시킨다.
(식물세포나 박테리아의 경우 세포벽도 제거해야 함).
※세포를 파괴시키는 방법
①물리적인 방법 : 세포벽을 파괴시키는 경우에 사용되며 sample을 액체질소에 얼린 후
갈아주는 방법이 이용된다. 학교실험실에서는 sample을 믹서에 갈아 주는 방법을 사용.
②화학적인 방법 : 세포막, 핵막을 용해시키는 화학약품을 사용하며 DNA추출을 위한 가장 일반적인 방법. 일반적으로 SDS를 사용하며 간단한 추출시 세제를 사용할 수 있음.
● lysozyme - 계란 흰자, 눈물, 타액(침)에 존재하는 효소로서, 세균 세포벽을 구성하는 중합체 인 펩티도글리칸(peptidoglycan)의 β(1, 4)glycosidic bond를 절단.
● EDTA(EthyleneDiamineTetraAcetate) - 세포벽의 전체구조를 유지시키는데 필수적인 Mg
이온을 제거하여 세포벽을 불안정화시키고, DNA분해효소를 불활성화시킴.
● SDS(Sodium Dodecyl Sulphate) - 세포막의 지질분자 제거
★식물 세포 : lysozyme이 효과가 없기 때문에 물리적 방법(냉동시킨 시료를 갈아서 부수는 등)

참고자료

· 분자생물학, 인터넷,,,