PCR

소개

세포학 실험중 하나인 PCR에 대한 실험보고서입니다.

목차

없음

본문내용

1. Title : DNA 증폭을 위한 PCR

2. Purpose : 우리가 원하는 DNA의 양의 적을 때 소량의 DNA을 PCR을 이용하여 오염과 손상 없이, 특히 원하는 DNA만을 증폭시켜서 얻는다

3. Principle : PCR의 원리는 3가지 단계를 반복하여 특정 DNA 영역을 증폭한다.

(a) Denaturation
PCR의 가장 첫 단계이며, 이 과정 때 DNA는 두가닥으로 갈라진다. 이것은 온도가 높아짐에 따라 DNA의 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어지기 때문이다. 일반적으로 94℃ 정도에서 1분간 진행된다.

(b) Annealing
각각 두가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라 붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 accuracy를 결정 짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮을 경우에는 primer가 mismatch할 확률이 높아서 정확도가 그만큼 더 떨어진다. 일반적으로 온도는 아래의 식에서 결정되며, 여기서 trial & error 과정을 포함하여 좀 더 구체적으로 결정한다.

Tm = (4*[G+C]) + (2*[A+T])℃

여기서 G+C의 계수가 더 큰이유는 그들이 A+T의 수소결합 보다 센 수소결합을 하기 때문이다.

(c) Extension
Primer로부터 DNA가 뻗어나가는 과정이다. 물론 template와 상보적 결합으로 인하여 뻗어나간다. 이때는 보통 74℃에서 2분간 진행되며, 이 온도가 Taq polymerase의 활성이 최대로 되는 온도이다...........

참고자료

· 없음