[공학]플라스미드/DNA 분리정제

소개

플라스미드 DNA의 분리 정제에 대한 실험 레포트 입니다.

목차

실험제목
실험날짜
실험자
실험목적
실험이론
실험방법

본문내용

3.실험목적
형질전환용 대장균을 만들 수 있으며 플라스미드에 포함된 선발마커를 이용하여 형질전환이 일어난 대장균을 선발할 수 있다. 또한 세균의 염색체 DNA와 구별하여 플라스미드 DNA를 정제하는 방법을 습득한다.

4.실험이론

(1)형질전환(transformation)

*세포 형질전환
생명체로 새로운 DNA를 삽입하거나 유전자 클로닝에 필요한 숙주를 사용하기 위해서 유전자 전달 방법이 필요하다. 외래 DNA를 세균, 효모, 식물, 동물에 형질전환하기 위해 사용되는 다양한 방법이 있다. 어떤 세균은 자연적으로 수용성이다. 즉, 이들은 외래 DNA를 받아들이는 능력이 있다. 그러나 많은 세균은 형질 전환되기 위해 화학적으로 처리가 되어야 한다. 염화칼슘과 같은 염의 용액에 세균을 처리하고 재조합 DNA가 있는 가운데 열 충격을 주는 것은 DNA를 세포로 옮기기에 효과적인 형질전환에 충분하다. 그러나 진핵 생명체는 더 복잡한 방법이 필요하다. 그러나 진핵생명체는 더 복잡한 방법이 필요하다.

*형질전환
주변배지에서 DNA조각 자체가 세포 내로 받아들여져 세포의 유전체로 통합되는 것이다. 자연환경에서 이러한 형질전환은 완전한 무작위 과정으로 세포가 획득하는 DNA단편은 분해된 세포에서 나온 것이다. DNA 단편들은 크기가 클 수도 있고 여러 유전자들을 동시에 포함할 수도 있다. 그러나 이러한 DNA 단편들은 소위 ‘컴피턴트(competent, DNA 수용능)’ 세포라 불리는 DNA가 투과할 수 있는 특정한 생리적 상태의 세포에만 들어갈 수 있고 이에 따른 형질전환이 일어난다.

*competent cell : 어떤 cell이 외부로부터 DNA를 받아들일 수 있는 상태의 cell.

*형질전환방법
-전기천공법 : 외래 DNA를 원형질체 안으로 도입시키는데 사용한다. DNA 분자가 통과해서 들어가는 세포막이 순간적으로 열려서 삽입될 것이라고 생각되어 원형질체에 잠깐 동안 전기 충격을 가한다. 형질전환 후에 세포를 씻고 배양하면 그 세포벽이 재형성되고 세포분화가 시작된다.
-유전자총 : 금이나 텅스텐으로 만들어진 아주 작은 미세탄두에 DNA를 입혀서 세포나 조직 내로 유전자총을 이용하여 빠른 속도로 쏜다. 그 발사체가 세포로 들어가기 때문에 그 벽은 제거될 필요가 없다. 유전자총은 살아있는 동물 기관의 세포에 정상 유전자를 형질전환 시켜야 하는 유전자 치료에 사용되며 전망이 밝다

참고자료

· 생명공학 제2판/월드사이언스/오계헌, 소재성, 송홍규, 이병욱
· 산업·응용 미생물학/라이프 사이언스/김수기, 경규항, 김형권 등.
· http://cafe.naver.com/biotechcyberlab.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=4