[일반생물학]대장균 레포트

소개

대장균 실험에 따른 레포트 입니다^^* 많은 도움이 되셨으면 합니다~

목차

1.abstract

2.introduction

3.Meterials & Methods

4.result

5.discussion

7.reference

본문내용

이번 실험은 E.coli에서 DNA를 추출, 정량하는 실험이었다. 먼저 배지에는 기른 대장균을 원심분리하면 대장균은 자라않고 배지와 분리된다. 그 후 EDTA 용액을 넣어 주는데, 이 시약은 Mg2+ chelator로 세포벽을 약화시켜 세포가 용해되기 쉽게 해주는 성질이 있다. 세포벽을 제거한 후에는 SDS를 넣어주어 세포막을 제거하면 세포내 물질이 세포 밖으로 흘러나오게 된다. 이는 SDS는 지질을 제거하기 때문에 인지질 성분인 세포막이 손실되었기 때문이다. 여기에 염기성인 NaOH를 가하면 단백질이 변성되고 엉겨서 제 기능을 하지 못하게 된다. 그리고 ethanol을 넣으면 DNA는 탈수 되는데, 이는 물과 에탄올의 친화도가 물과 DNA의 친화도보다 더 크기 때문이다. 이 때 NaCl 을 넣어주면 Na+ 이온이 DNA와 결합하여 섬유질 형태로 DNA는 침전된다. 즉, DNA의 인산기가 (-)전하를 띄기 때문에 (+) 전하인 Na+ 이온과 반응하는 것이고 상대적으로 (+)전하를 띤 유리막대로 (-)전하를 띄는 DNA를 감을 수 있게 된다. O.D 260nm와 O.D 280nm로 나누어 측정하는 이유는 260nm에서는 DNA나 RNA를 정량할 때 쓰이며 280nm은 단백질을 정량할 때 쓰이는 파장이다. 그래서 DNA purity를 구할 때 260nm OD값을 280nm OD값으로 나누는데 이 나눈 값이 1.8이면 순수한 DNA라고 할 수 있다. DNA에는 히스톤 단백질처럼 DNA를 감싸고 있는 단백질이 존재한다. 물론 실험과정 중에 단백질을 제거하지만 완전히 제거할 수는 없다. 따라서 자신의 DNA 샘플이 단백질에 얼마만큼 오염이 되었는가를 알고자 할 때 DNA를 280nm에서 O.D값을 측정하기도 하지만 정량할 때에는 280nm에서 측정할 필요가 없는 것이다. 고리형구조의 아미노산에서 280nm파장을 최대로 흡수한다. 고리형 구조의 아미노산에는 Histidine, Tryptophan, proline 이렇게 세 가지가 존재한다. DNA의 최대 흡수파장은 260nm 이고, 단백질의 최대흡수 파장은 280nm이므로 DNA 외의 물질인 단백질을 이용해 DNA 농도와 순수도를 구할 수 있다.

참고자료

· 없음