[A+] 2024 서강대 현대생물학실험1 4차 (항체생산)

소개

"[A+] 2024 서강대 현대생물학실험1 4차 (항체생산)"에 대한 내용입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

이번 실험은 항체를 생산하고 그 항체를 이용하여 목적 단백질을 검출하기 위함으로 정제한 eGFP를 쥐의 복강에 주사하여 1차 항체를 생산하고 SDS-PAGE와 immunoblotting을 통해 eGFP를 검출하였다. eGFP는 Freund’s adjuvant와 1:1로 섞어 150µl씩 3주에 걸쳐 주사하였으며 마지막 접종 일주일 후 CO2 gas로 쥐를 안락사시켜 심장 채혈을 통해 항체를 얻었다. eGFP sample은 각각 1X, 1/2X, 1/4X, 1/8X로 희석하여 SDS-PAGE하고 PVDF membrane에 transfer하여 생산한 1차 항체를 처리하였다. 1차 항체 처리 후에는 1차 항체를 항원으로 인식하는 AP와 conjugation된 anti-mouse IgG goat antibody를 2차 항체로 사용하여 처리하였다. Visualization을 위해 AP의 기질인 BCIP/NBT를 처리한 결과 보라색 발색반응을 통해 band를 관찰할 수 있었다. eGFP의 크기인 28.3kDa 위치에서 band가 가장 뚜렷하게 관찰되었으며 eGFP가 아닌 다른 위치에서도 band가 관찰되었다. Coomassie blue staining과 비교했을 때 Coomassie blue staining은 gel에 존재하는 모든 단백질을 검출할 수 있고 항체를 이용하는 immunoblotting의 경우에는 특이적으로 항체와 결합하는 단백질만을 검출할 수 있다는 특징이 있다. 하지만 eGFP 외에 다른 위치에서도 band가 관찰된 것은 항원으로 사용한 eGFP가 완벽하게 정제된 것이 아니었기 때문일 것이고 항체와 membrane 간의 non-specific binding 때문일 가능성도 있다. 실험의 개선을 위해서는 하나의 항원 결정기만을 인식하여 polyclonal antibody보다 더 높은 특이성을 가지는 monoclonal antibody를 이용할 수 있다.

참고자료

· Neil A. Campbell (2019), Biology A Global Approach. 12th, Pearson, pp. 1106~1113
· David L. Nelson (2021), Lehninger Principles of Biochemistry, 8th, W.H. Freeman and Company, pp. 86~88
· Geoffrey M. Cooper (2019), The Cell A Molecular Approach, 8th, Oxford University Press, pp. 131~134
· 최희락, 고종현, 이해범, 이준모 (2013), 실험용 쥐의 마취, 대한미세수술학회지, 22(1): pp. 1~6