생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 6. Plasmid DNA Preparation

소개

생화학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 6. Plasmid DNA Preparation 관련 리포트입니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험 재료 및 기구

3. 방법

4. 실험 결과
가. 예비 실험

나. 본 실험 과정

5. 실험 원리(배경) 및 실험 고찰
가. 실험원리(배경)

나. 실험 고찰

6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
대장균의 유전형질을 플라스미드를 이용하여 형질전환 시키고, Plasmid DNA 분리 과정을 이해한다.
박테리아로 부터 Plasmid DNA를 분리하고, Kit를 구성하는 여러 용액들의 생화학적 기능을 알아본다.

2. 실험 재료 및 기구
대장균(E.coli DH5α), Plasmid DNA 분리용액(Soln.I, II, III), Microcentrifuge, 마이크로 피펫과 팁 (Micropipette & Tip 1ml, 200ul, 20ul), 1.5ml tube (EP tube ), 1조 당 2개 sample, Isopropanol, 70% EtOH, DW, Nanodrop

<중 략>

3. 방법
가. 예비 실험
① 1개의 박테리아 콜로니를 3 ㎖ LB/amp liquid media에 접종한다.
② 박테리아가 액체배지에서 자랄 때까지 37℃ shaking incubator에서 밤새 배양한다.

나. 본 실험 과정
① 배양된 박테리아 (E coli competent cells)를 1ml 씩 1.5ml tube에 넣고 1분간 원심분리 한다.
② E coli 분주한 15ml tube를 12000 rpm로 1분간 원심분리 후 pipette을 이용하여 상층액을 버린다.
(이 때, 한 곳에 뭉쳐 있는 pellet을 건드리지 않도록 주의한다.)
③ 분리한 pellet에 Soln.I 용액 100㎕을 넣고, pipetting 또는 vortexing으로 pellet을 resuspend 후 2-3번 부드럽게 뒤집어 섞는다. (inverting)
④ Soln.II 용액 100㎕을 넣고 4-6번 부드럽게 뒤집어 섞는다.
(inverting, 투명해질 때까지 기다리지만, 5분을 넘기면 안된다.)

참고자료

· 신경옥, ”생화학 실험”, 국내서 단행본, 서울: 파워북, 2014, p.126-133
· 이종호, “의생명과학 실험서. 상권”, 국내서 단행본, 서울 : 라이프사이언스, 2021, p.4-11, 22-24