Cell harvest and protein assay

소개

"Cell harvest and protein assay"에 대한 내용입니다.

목차

1. 서론

2. 재료 및 방법
1) Cell harvest
2) Protein extraction
3) Protein assay
4) Sample preparation

3. 결과

4. 논의

본문내용

Western blot은 여러 물질의 혼합물에서 단백질을 분리하고 어떤 단백질이 있는지 확인하는 데에 중요한 기술이다. 크게, 전기영동으로 단백질을 분리하고, 막으로 옮기고, 항체를 이용해 어떤 단백질이 있는지 확인하는 3단계로 구성된다.(Tahrin Mahmood and Ping-Chang Yang, 2012) 이번 실험에서는 전기영동으로 단백질을 분리하기 위한 Sample preparation을 진행하였다.
Sample preparation은 Cell harvest, protein extraction, protein assay, SDS-page(전처리)의 4가지 과정으로 나눌 수 있다. Cell harvest는 medium에 배양되고 있는 세포를 한곳에 모으는 것을 말한다. Cell은 배양되는 위치에 따라 adherent Cell과 suspension Cell로 나눌 수 있다. adherent cell은 어딘가에 붙어서 배양되는 cell이고 suspension cell은 액체에서 부유하며 배양되는 cell이다. (Vanessa Noel and Mark D Berry, 2022 and Modeline N Longjohn at al., 2022) 이번 실험에서 사용하는 cell은 배지에 붙어있는 adherent cell이다. adherent cell을 harvest하는 과정은 크게 화학적 방법과 물리적 방법으로 2가지가 존재한다. 화학적인 방법은 trysin을 이용하는 방법과 accutase를 이용하는 방법이 있다. trypsin은 대표적인 단백질분해효소인데, cell과 플라스크를 붙어있게 해주는 단백질을 분해하여 떨어뜨리게 만든다. accutase는 콜라겐을 분해하여 세포를 떼어내는데, trypsin보다 더 손상이 적은 장점이 존재한다. 물리적인 방법은 말그대로 scraper을 이용해서 플라스크를 긁어 세포를 떼어내는 방식이다.(A. Nowak-Terpiłowska at al., 2021)

참고자료

· Tahrin Mahmood and Ping-Chang Yang(2012), Western Blot: Technique, Theory, and Trouble Shooting
· Vanessa Noel, Mark D Berry(2022),
· Culture of Adherent Cancer Cell Lines
· Modeline N Longjohn, Hong-Dien Phan, Sherri L Christian(2022), Culturing Suspension Cancer Cell Lines
· A. Nowak-Terpiłowska, P. Śledziński, and J. Zeyland(2021), Impact of cell harvesting methods on detection of cell surface proteins and apoptotic markers
· Mohammed Shehadul Islam, Aditya Aryasomayajula, and Ponnambalam Ravi Selvaganapathy(2017), A Review on Macroscale and Microscale Cell Lysis Methods
· ThermoFisher Scientific Overview of Protease and Phosphatase Inhibition for Protein Preparation, https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/protein-biology/protein-biology-learning-center/protein-biology-resource-library/pierce-protein-methods/protease-phosphatase-inhibitors.html(2024. 04. 02 인용)
· Noble, James E. (2009). [Methods in Enzymology] Chapter 8 Quantitation of Protein
· creative proteomics, Protocol for Bradford Protein Assay, https://www.creative-proteomics.com/resource/protocol-for-bradford-protein-assay.htm(2024. 04. 02 인용)
· Bio-chae(2020), Western blot buffer 역할/ western blotting buffer 역할/ 웨스턴블롯 buffer 역할 / 웨스턴블롯 버퍼 역할, https://bio-chae.com/western-blot-buffer/(2024. 04. 02 인용)
· A Alam(1992), A model for formulation of protein assay
· B.A. Otieno, C.E. Krause, J.F. Rusling(2015), [Methods in Enzymology] Chapter 7 Bioconjugation of Antibodies and Enzyme Labels onto Magnetic Beads